1、 了解有關(guān)微生物及培養(yǎng)基的基礎(chǔ)知識，了解有關(guān)微生物及培養(yǎng)基的基礎(chǔ)知識， 進(jìn)行無菌技術(shù)的操作，進(jìn)行微生物的培養(yǎng)。進(jìn)行無菌技術(shù)的操作，進(jìn)行微生物的培養(yǎng)。 一、課題目標(biāo)：一、課題目標(biāo)： 掌握培養(yǎng)基的制備、高壓蒸氣滅菌和平掌握培養(yǎng)基的制備、高壓蒸氣滅菌和平 板劃線法等基本操作技術(shù)，熟練、規(guī)范地板劃線法等基本操作技術(shù)，熟練、規(guī)范地 進(jìn)行無菌操作，成功地培養(yǎng)微生物。進(jìn)行無菌操作，成功地培養(yǎng)微生物。 無菌技術(shù)的操作。無菌技術(shù)的操作。 二、課題重點(diǎn)和難點(diǎn)：二、課題重點(diǎn)和難點(diǎn)： 三、技能目標(biāo)：三、技能目標(biāo)： 微生物包括哪五類：微生物包括哪五類： 真菌真菌 原生動物原生動物 特點(diǎn)：結(jié)構(gòu)簡單特點(diǎn)：結(jié)構(gòu)簡單, ,形體

2、微小形體微小. .通常要用光學(xué)顯微鏡或通常要用光學(xué)顯微鏡或 電子顯微鏡才能看到，有的甚至沒有細(xì)胞結(jié)構(gòu)電子顯微鏡才能看到，有的甚至沒有細(xì)胞結(jié)構(gòu). .且且 體內(nèi)一般不含有葉綠素體內(nèi)一般不含有葉綠素. .不能進(jìn)行光合作用不能進(jìn)行光合作用. . 原核生物界原核生物界 原生生物界原生生物界 真菌界真菌界 病毒界病毒界 圖圖1-1 常見的三種細(xì)菌典型形態(tài)常見的三種細(xì)菌典型形態(tài) A.球菌球菌 B.桿菌桿菌 C.弧菌弧菌 傷傷 寒寒 桿桿 菌菌 細(xì)細(xì) 胞胞 壁壁 中中 含含 毒毒 素素 有些細(xì)菌在一定的條件下，細(xì)胞里面形成一個橢圓形的休眠有些細(xì)菌在一定的條件下，細(xì)胞里面形成一個橢圓形的休眠 體，叫做芽孢。芽孢

3、的壁很厚，對干旱、低溫、高溫等惡劣的環(huán)體，叫做芽孢。芽孢的壁很厚，對干旱、低溫、高溫等惡劣的環(huán) 境有很強(qiáng)的抵抗力。例如，有的細(xì)菌的芽孢，煮沸境有很強(qiáng)的抵抗力。例如，有的細(xì)菌的芽孢，煮沸3 3小時以后才小時以后才 死亡。芽孢又小又輕，可以隨風(fēng)飄散。當(dāng)環(huán)境適宜（如溫度、水死亡。芽孢又小又輕，可以隨風(fēng)飄散。當(dāng)環(huán)境適宜（如溫度、水 分適宜）的時候，芽孢又可以萌發(fā)，形成一個細(xì)菌分適宜）的時候，芽孢又可以萌發(fā)，形成一個細(xì)菌. . 菌落 細(xì)菌的菌落特征細(xì)菌的菌落特征 因種而異因種而異 光合自養(yǎng)型光合自養(yǎng)型:光合細(xì)菌光合細(xì)菌 化能自養(yǎng)型化能自養(yǎng)型:硝化細(xì)菌硝化細(xì)菌,鐵細(xì)菌鐵細(xì)菌,硫細(xì)菌硫細(xì)菌 1 1、結(jié)構(gòu)：、

4、結(jié)構(gòu)： 單細(xì)胞原核單細(xì)胞原核 分支狀的菌絲（基內(nèi)菌絲、氣生菌絲）分支狀的菌絲（基內(nèi)菌絲、氣生菌絲） 鏈霉素、土霉素、四環(huán)素、鏈霉素、土霉素、四環(huán)素、 氯霉素、紅霉素、慶大霉素氯霉素、紅霉素、慶大霉素 微生物中發(fā)現(xiàn)了幾千種抗生素，其中微生物中發(fā)現(xiàn)了幾千種抗生素，其中2/32/3是是 由放線菌產(chǎn)生的由放線菌產(chǎn)生的 應(yīng)用應(yīng)用: : 病毒的結(jié)構(gòu)病毒的結(jié)構(gòu) 2、病毒的增殖：、病毒的增殖： 真菌真菌 一、基礎(chǔ)知識：一、基礎(chǔ)知識： （二）培養(yǎng)基（二）培養(yǎng)基 培養(yǎng)基（培養(yǎng)液）是由人工方法配制而成培養(yǎng)基（培養(yǎng)液）是由人工方法配制而成 的，專供微生物生長繁殖使用的混合營養(yǎng)液。的，專供微生物生長繁殖使用的混合營養(yǎng)液

5、。 （1 1）按物理狀態(tài)分：）按物理狀態(tài)分：固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基和和液體培養(yǎng)液體培養(yǎng) 基、半固體培養(yǎng)基基、半固體培養(yǎng)基。其中固體培養(yǎng)基用于菌種。其中固體培養(yǎng)基用于菌種 保存及分離、鑒定菌落、活菌計數(shù)等，半固體保存及分離、鑒定菌落、活菌計數(shù)等，半固體 培養(yǎng)基可觀察微生物的運(yùn)動，液體培養(yǎng)基常用培養(yǎng)基可觀察微生物的運(yùn)動，液體培養(yǎng)基常用 于發(fā)酵工業(yè)。于發(fā)酵工業(yè)。 （2 2）按功能分：選擇培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基。）按功能分：選擇培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基。 （3 3）按成分分：天然培養(yǎng)基和合成培養(yǎng)基。）按成分分：天然培養(yǎng)基和合成培養(yǎng)基。 1.1.培養(yǎng)基的類型和用途培養(yǎng)基的類型和用途 加入青霉素的培養(yǎng)基加入青霉素的培

6、養(yǎng)基: : 分離酵母菌、霉菌等真菌分離酵母菌、霉菌等真菌 加入高濃度食鹽的培養(yǎng)基加入高濃度食鹽的培養(yǎng)基: : 分離金黃色葡萄球菌分離金黃色葡萄球菌 不加氮源的無氮培養(yǎng)基不加氮源的無氮培養(yǎng)基: : 分離固氮菌分離固氮菌 不加含碳有機(jī)物的無碳培養(yǎng)基不加含碳有機(jī)物的無碳培養(yǎng)基: : 分離自養(yǎng)型微生物分離自養(yǎng)型微生物 加入青霉素等抗生素的培養(yǎng)基加入青霉素等抗生素的培養(yǎng)基: : 分離導(dǎo)入了目的基因的受體細(xì)胞分離導(dǎo)入了目的基因的受體細(xì)胞 加入氨基喋呤、次黃嘌呤和胸腺嘧啶核苷的加入氨基喋呤、次黃嘌呤和胸腺嘧啶核苷的 培養(yǎng)基培養(yǎng)基: : 分離雜交瘤細(xì)胞分離雜交瘤細(xì)胞 天然培養(yǎng)基有血清、天然培養(yǎng)基有血清、 血漿

7、、和組織提取液血漿、和組織提取液 （如雞胚和牛胚浸（如雞胚和牛胚浸 液）。液）。 優(yōu)點(diǎn)：營養(yǎng)成分豐富，優(yōu)點(diǎn)：營養(yǎng)成分豐富， 培養(yǎng)效果好培養(yǎng)效果好 缺點(diǎn)：來源受限缺點(diǎn)：來源受限; ;成分成分 復(fù)雜，影響對某些實(shí)復(fù)雜，影響對某些實(shí) 驗(yàn)產(chǎn)物的提取和實(shí)驗(yàn)驗(yàn)產(chǎn)物的提取和實(shí)驗(yàn) 結(jié)果的分析結(jié)果的分析; ;易發(fā)生支易發(fā)生支 原體污染原體污染; ; 根據(jù)細(xì)胞生存所需物質(zhì)的根據(jù)細(xì)胞生存所需物質(zhì)的 種類和數(shù)量，用人工方法模種類和數(shù)量，用人工方法模 擬合成的。擬合成的。 合成培養(yǎng)基主要成分是合成培養(yǎng)基主要成分是 氨基酸、維生素、碳水化合氨基酸、維生素、碳水化合 物、無機(jī)鹽和其它一些輔助物、無機(jī)鹽和其它一些輔助 物質(zhì)。

8、物質(zhì)。 優(yōu)點(diǎn)：標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)，組分優(yōu)點(diǎn)：標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)，組分 和含量相對固定和含量相對固定; ;成本低成本低 缺點(diǎn)：缺點(diǎn)： 缺少某些成分，不缺少某些成分，不 能完全滿足體外細(xì)胞生長需能完全滿足體外細(xì)胞生長需 要。要。 合成培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基: :天然培養(yǎng)基：天然培養(yǎng)基： 血清中含有：血清中含有： 多種蛋白質(zhì)（白蛋白、球蛋白、多種蛋白質(zhì)（白蛋白、球蛋白、 鐵蛋白等）鐵蛋白等） 多種金屬離子；多種金屬離子； 激素；激素； 促貼附物質(zhì)，如纖粘蛋白、冷析促貼附物質(zhì)，如纖粘蛋白、冷析 球蛋白、膠原等。球蛋白、膠原等。 各種生長因子各種生長因子 轉(zhuǎn)移蛋白轉(zhuǎn)移蛋白 不明成分不明成分 人工合成培養(yǎng)基只能維持細(xì)胞生存，要

9、想使細(xì)胞生長和人工合成培養(yǎng)基只能維持細(xì)胞生存，要想使細(xì)胞生長和 繁殖，還需補(bǔ)充一定量的天然培養(yǎng)基（如血清）。繁殖，還需補(bǔ)充一定量的天然培養(yǎng)基（如血清）。 液體培養(yǎng)基：液體培養(yǎng)基： 表面生長表面生長均勻混濁生長均勻混濁生長 沉淀生長沉淀生長 固體培養(yǎng)基：菌落，菌苔固體培養(yǎng)基：菌落，菌苔 半固體培養(yǎng)基：半固體培養(yǎng)基： 無動力無動力 有動力有動力( (彌散彌散) ) ( (是否運(yùn)動是否運(yùn)動) ) 2.2.不同的微生物往往需要采用不同的培養(yǎng)不同的微生物往往需要采用不同的培養(yǎng) 基配方基配方 (參考教材附錄內(nèi)容參考教材附錄內(nèi)容) 3. 3.不管哪種培養(yǎng)基，一般都含有水、碳源、不管哪種培養(yǎng)基，一般都含有水、

10、碳源、 和氮源、和氮源、 無機(jī)鹽、等營養(yǎng)物質(zhì)，無機(jī)鹽、等營養(yǎng)物質(zhì)， 另外還需要滿足微生物生長對另外還需要滿足微生物生長對pHpH、特殊營、特殊營 養(yǎng)物質(zhì)養(yǎng)物質(zhì), ,例如例如: :生長因子生長因子(即細(xì)菌生長必需，而即細(xì)菌生長必需，而 自身不能合成的化合物自身不能合成的化合物,如維生素、某些氨基如維生素、某些氨基 酸、嘌呤、嘧啶酸、嘌呤、嘧啶) )以及氧氣、二氧化碳、滲透以及氧氣、二氧化碳、滲透 壓等的要求。壓等的要求。 4.4.培養(yǎng)基的用途培養(yǎng)基的用途 液體培養(yǎng)基：增菌液體培養(yǎng)基：增菌 固體培養(yǎng)基：純化，增菌固體培養(yǎng)基：純化，增菌 半固體培養(yǎng)基：動力檢測，保種半固體培養(yǎng)基：動力檢測，保種 1.

11、1.無菌技術(shù)的概念無菌技術(shù)的概念 無菌操作泛指在培養(yǎng)微生物的操作中，無菌操作泛指在培養(yǎng)微生物的操作中， 所有防止雜菌污染的方法。無論是隨后將要所有防止雜菌污染的方法。無論是隨后將要 學(xué)到的倒平板、平板劃線操作，還是平板稀學(xué)到的倒平板、平板劃線操作，還是平板稀 釋涂布法，其操作中的每一步都需要做到釋涂布法，其操作中的每一步都需要做到 “無菌無菌”，即防止雜菌污染。只有熟練、規(guī)，即防止雜菌污染。只有熟練、規(guī) 范地進(jìn)行無菌操作，才可能成功地培養(yǎng)微生范地進(jìn)行無菌操作，才可能成功地培養(yǎng)微生 物。物。 （）消毒定義：（）消毒定義： 利用化學(xué)或物理方法，殺死大部份致利用化學(xué)或物理方法，殺死大部份致 病微生物

12、的過程。區(qū)分為高程度消毒病微生物的過程。區(qū)分為高程度消毒 （High-level DisinfectionHigh-level Disinfection）、中程度消）、中程度消 毒（毒（Intermediate-level DisinfectionIntermediate-level Disinfection）、）、 低程度消毒（低程度消毒（Low-level DisinfectionLow-level Disinfection） 三種方式。三種方式。 2.2.消毒與滅菌的概念及兩者的區(qū)別消毒與滅菌的概念及兩者的區(qū)別 （2 2）滅菌的定義：）滅菌的定義： 以化學(xué)劑或物理方法消滅所有微生以化學(xué)劑

13、或物理方法消滅所有微生 物，包括所有細(xì)菌的繁殖體、芽孢、霉物，包括所有細(xì)菌的繁殖體、芽孢、霉 菌及病毒，而達(dá)到完全無菌之過程。菌及病毒，而達(dá)到完全無菌之過程。 滅菌消毒技術(shù)是微生物有關(guān)工作中最滅菌消毒技術(shù)是微生物有關(guān)工作中最 普通也是最重要的技術(shù)。普通也是最重要的技術(shù)。 1 1、煮沸消毒法煮沸消毒法:100100煮沸煮沸5-6min5-6min 2 2、巴氏消毒法：、巴氏消毒法：70-75 70-75 下煮下煮30min30min或或 80 80 下煮下煮15min15min 3 3、化學(xué)藥劑消毒法、化學(xué)藥劑消毒法: :用用75%75%酒精、新潔爾酒精、新潔爾 滅等進(jìn)行皮膚消毒滅等進(jìn)行皮膚消毒

14、; ;氯氣消毒水源氯氣消毒水源 4 4、紫外線消毒、紫外線消毒 (1)消毒的方法：消毒的方法： 3.3.常用的消毒與滅菌的方法常用的消毒與滅菌的方法 1 1、灼燒滅菌、灼燒滅菌 2 2、干熱滅菌：、干熱滅菌： 160-170 160-170 下加下加 熱熱1-2h1-2h。 3 3、高壓蒸氣滅菌：、高壓蒸氣滅菌： 100kPa100kPa、121 121 下維持下維持15-30min.15-30min. (2)滅菌的方法：滅菌的方法： 最常用的滅菌方法是高壓蒸汽滅菌，它可以殺最常用的滅菌方法是高壓蒸汽滅菌，它可以殺 滅所有的生物，包括最耐熱的某些微生物的休眠體滅所有的生物，包括最耐熱的某些微生

15、物的休眠體 ，同時可以基本保持培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分不被破壞。，同時可以基本保持培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分不被破壞。 有些玻璃器皿也可采用高溫干熱滅菌。為了防有些玻璃器皿也可采用高溫干熱滅菌。為了防 止雜菌，特別是空氣中的雜菌污染，試管及玻璃燒止雜菌，特別是空氣中的雜菌污染，試管及玻璃燒 瓶都需采用適宜的塞子塞口，通常采用棉花塞，也瓶都需采用適宜的塞子塞口，通常采用棉花塞，也 可采用各種金屬、塑料及硅膠帽，它們只可讓空氣可采用各種金屬、塑料及硅膠帽，它們只可讓空氣 通過，而空氣中的其他微生物不能通過。通過，而空氣中的其他微生物不能通過。 而平皿是由正反兩平面板互扣而成，這種器具而平皿是由正反兩平面板互扣而成，

16、這種器具 是專為防止空氣中微生物的污染而設(shè)計的。是專為防止空氣中微生物的污染而設(shè)計的。 1 1、器具的滅菌、器具的滅菌 2 2、培養(yǎng)基的配制、培養(yǎng)基的配制 3 3、培養(yǎng)基的滅菌、培養(yǎng)基的滅菌 4 4、倒平板、倒平板 5 5、微生物接種、微生物接種 6 6、恒溫箱中培養(yǎng)、恒溫箱中培養(yǎng) 7 7、菌種的保存、菌種的保存 1.1.無菌技術(shù)除了用來防止實(shí)驗(yàn)室的培養(yǎng)物被其他無菌技術(shù)除了用來防止實(shí)驗(yàn)室的培養(yǎng)物被其他 外來微生物污染外，還有什么目的？外來微生物污染外，還有什么目的？ 2.2.請你判斷以下材料或用具是否需要消毒或滅菌。請你判斷以下材料或用具是否需要消毒或滅菌。 如果需要，請選擇合適的方法。如果需

17、要，請選擇合適的方法。 （1 1） 培養(yǎng)細(xì)菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿培養(yǎng)細(xì)菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿 （2 2） 玻棒、試管、燒瓶和吸管玻棒、試管、燒瓶和吸管 （3 3） 實(shí)驗(yàn)操作者的雙手實(shí)驗(yàn)操作者的雙手 答：無菌技術(shù)還能有效避免操作者自身被微生物感染。答：無菌技術(shù)還能有效避免操作者自身被微生物感染。 答：（答：（1）、（）、（2）需要滅菌；（）需要滅菌；（3）需要消毒。）需要消毒。 三、實(shí)驗(yàn)操作三、實(shí)驗(yàn)操作 1.制備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基（用于培養(yǎng)細(xì)菌）制備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基（用于培養(yǎng)細(xì)菌） 1 1計算、稱量計算、稱量 2 2溶化溶化 3 3調(diào)調(diào)pHpH：pH7pH76 6 4 4過濾：這一步可以省去。過濾

18、：這一步可以省去。 5 5分裝：分裝過程中注意不要使培養(yǎng)分裝：分裝過程中注意不要使培養(yǎng) 基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而 引起污染。分裝三角燒瓶的量以不超過引起污染。分裝三角燒瓶的量以不超過 三角燒瓶容積的一半為宜。三角燒瓶容積的一半為宜。 6 6加塞加塞 7 7包扎包扎 操作步驟操作步驟 8 8滅菌滅菌: : 將將50ml50ml培養(yǎng)基用玻棒轉(zhuǎn)移至三角錐瓶中，培養(yǎng)基用玻棒轉(zhuǎn)移至三角錐瓶中， 塞上棉花塞，包上牛皮紙，再放入高壓蒸氣滅菌塞上棉花塞，包上牛皮紙，再放入高壓蒸氣滅菌 鍋，在壓力為鍋，在壓力為100kPa100kPa、溫度為、溫度為121121，滅菌

19、，滅菌 151530min30min。將培養(yǎng)基用舊報紙包裹，放入干。將培養(yǎng)基用舊報紙包裹，放入干 熱滅菌箱內(nèi)，在熱滅菌箱內(nèi)，在160160170 170 下滅菌下滅菌2h2h。 9 9倒平板倒平板: : 待培養(yǎng)基冷卻到待培養(yǎng)基冷卻到50 50 左右時，在酒精燈附左右時，在酒精燈附 近倒平板。（倒平板操作見課本）近倒平板。（倒平板操作見課本）2d2d后觀察平后觀察平 板，無雜菌污染才可用來接種板，無雜菌污染才可用來接種. . 10 10無菌檢查：無菌檢查： 將滅菌的培養(yǎng)基放入將滅菌的培養(yǎng)基放入3737的溫室中培的溫室中培 養(yǎng)養(yǎng)24482448小時，以檢查滅菌是否徹底。小時，以檢查滅菌是否徹底。

20、1. 1.培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到50 50 左右時，左右時， 才能用來倒平板。你用什么辦法來估計培養(yǎng)基的才能用來倒平板。你用什么辦法來估計培養(yǎng)基的 溫度？溫度？ 答：答：可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶，可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶， 感覺錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時，就可感覺錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時，就可 以進(jìn)行倒平板了。以進(jìn)行倒平板了。 2.2.為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰？為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰？ 答：通過灼燒滅菌，防止瓶口的微生物答：通過灼燒滅菌，防止瓶口的微生物 污染培養(yǎng)基。污染培養(yǎng)基。 3.3.平板冷凝后，為什么要將平板倒置？平板冷凝

21、后，為什么要將平板倒置？ 4.4.在倒平板的過程中，如果不小心將培養(yǎng)在倒平板的過程中，如果不小心將培養(yǎng) 基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個平板基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個平板 還能用來培養(yǎng)微生物嗎？為什么？還能用來培養(yǎng)微生物嗎？為什么？ 答：平板冷凝后，皿蓋上會凝結(jié)水珠，凝固答：平板冷凝后，皿蓋上會凝結(jié)水珠，凝固 后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，將平板倒置，后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，將平板倒置， 既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，又可以既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，又可以 防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。 答：空氣中的微生物可能在皿蓋與皿

22、底之答：空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之 間的培養(yǎng)基上滋生，因此最好不要用這個平板間的培養(yǎng)基上滋生，因此最好不要用這個平板 培養(yǎng)微生物。培養(yǎng)微生物。 2 2、純化大腸桿菌、純化大腸桿菌 接種方法有：接種方法有： 平板劃線法和稀釋涂布平板法平板劃線法和稀釋涂布平板法 平板劃線法平板劃線法: :通過接種環(huán)在瓊脂固體培通過接種環(huán)在瓊脂固體培 養(yǎng)基表面連續(xù)畫線的操作養(yǎng)基表面連續(xù)畫線的操作, ,將聚集的菌鐘將聚集的菌鐘 逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面. . 在數(shù)次畫線后在數(shù)次畫線后, ,可以分離到由一個細(xì)胞可以分離到由一個細(xì)胞 繁殖而來的肉眼可見的子細(xì)胞群體繁殖而來的肉眼可見的子細(xì)

23、胞群體, ,這就這就 是菌落是菌落. . 1.1.為什么在操作的第一步以及每次劃線之前為什么在操作的第一步以及每次劃線之前 都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時，仍然需都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時，仍然需 要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？ 答：操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接答：操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接 種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物；每次劃種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物；每次劃 線前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后，線前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后， 接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時，接種接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時，接種 環(huán)上的菌種直接來源于

24、上次劃線的末端，從而環(huán)上的菌種直接來源于上次劃線的末端，從而 通過劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時菌種的數(shù)通過劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時菌種的數(shù) 目逐漸減少，以便得到菌落。劃線結(jié)束后灼燒目逐漸減少，以便得到菌落。劃線結(jié)束后灼燒 接種環(huán)，能及時殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避接種環(huán)，能及時殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避 免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。 2. 2.在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后 再進(jìn)行劃線？再進(jìn)行劃線？ 答：以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。答：以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。 3. 3.在作第二次以及其后的劃線操作時，為在作第二次

25、以及其后的劃線操作時，為 什么總是從上一次劃線的末端開始劃線？什么總是從上一次劃線的末端開始劃線？ 答：劃線后，線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線條起答：劃線后，線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線條起 始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能 使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少， 最終能得到由單個細(xì)菌繁殖而來的菌落。最終能得到由單個細(xì)菌繁殖而來的菌落。 涂布平板的所有操作都應(yīng)在火焰附近涂布平板的所有操作都應(yīng)在火焰附近 進(jìn)行。結(jié)合平板劃線與系列稀釋的無菌操作要進(jìn)行。結(jié)合平板劃線與系列稀釋的無菌操作要 求，想一想，第求，想一想，第2

26、2步應(yīng)如何進(jìn)行無菌操作？步應(yīng)如何進(jìn)行無菌操作？ 應(yīng)從操作的各個細(xì)節(jié)保證應(yīng)從操作的各個細(xì)節(jié)保證“無菌無菌”。例如，。例如， 酒精燈與培養(yǎng)皿的距離要合適、吸管頭不要接酒精燈與培養(yǎng)皿的距離要合適、吸管頭不要接 觸任何其他物體、吸管要在酒精燈火焰周圍等觸任何其他物體、吸管要在酒精燈火焰周圍等 等。等。 1 1、臨時保藏：、臨時保藏： 接種到固體斜面培接種到固體斜面培 養(yǎng)基，菌落長成后養(yǎng)基，菌落長成后 置于置于44冰箱保存。冰箱保存。 2 2、長期保存：、長期保存： 甘油冷凍管藏法甘油冷凍管藏法 四、課題成果評價四、課題成果評價 （一）培養(yǎng)基的制作是否合格（一）培養(yǎng)基的制作是否合格 如果未接種的培養(yǎng)基在

27、恒溫箱中保溫如果未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫1 12 d2 d后無后無 菌落生長，說明培養(yǎng)基的制備是成功的，否則需要重新菌落生長，說明培養(yǎng)基的制備是成功的，否則需要重新 制備。制備。 （二）接種操作是否符合無菌要求（二）接種操作是否符合無菌要求 如果培養(yǎng)基上生長的菌落的顏色、形狀、大小基如果培養(yǎng)基上生長的菌落的顏色、形狀、大小基 本一致，并符合大腸桿菌菌落的特點(diǎn)，則說明接種操作本一致，并符合大腸桿菌菌落的特點(diǎn)，則說明接種操作 是符合要求的；如果培養(yǎng)基上出現(xiàn)了其他菌落，則說明是符合要求的；如果培養(yǎng)基上出現(xiàn)了其他菌落，則說明 接種過程中，無菌操作還未達(dá)到要求，需要分析原因，接種過程中，無菌操作還未

28、達(dá)到要求，需要分析原因， 再次練習(xí)。再次練習(xí)。 （三）是否進(jìn)行了及時細(xì)致的觀察與記錄（三）是否進(jìn)行了及時細(xì)致的觀察與記錄 培養(yǎng)培養(yǎng)12 h12 h與與24 h24 h后的大腸桿菌菌落的大小會有明后的大腸桿菌菌落的大小會有明 顯不同，及時觀察記錄的同學(xué)會發(fā)現(xiàn)這一點(diǎn)，并能觀察顯不同，及時觀察記錄的同學(xué)會發(fā)現(xiàn)這一點(diǎn)，并能觀察 到其他一些細(xì)微的變化。這一步的要求主要是培養(yǎng)學(xué)生到其他一些細(xì)微的變化。這一步的要求主要是培養(yǎng)學(xué)生 良好的科學(xué)態(tài)度與習(xí)慣。良好的科學(xué)態(tài)度與習(xí)慣。 本課題知識小結(jié)本課題知識小結(jié): : 【典例解析典例解析】 例例1 1關(guān)微生物營養(yǎng)物質(zhì)的敘述中，正確的關(guān)微生物營養(yǎng)物質(zhì)的敘述中，正確的

29、A.A.是碳源的物質(zhì)不可能同時是氮源是碳源的物質(zhì)不可能同時是氮源 B.B.凡碳源都提供能量凡碳源都提供能量 C.C.除水以外的無機(jī)物只提供無機(jī)鹽除水以外的無機(jī)物只提供無機(jī)鹽 D.D.無機(jī)氮源也能提供能量無機(jī)氮源也能提供能量 解析：不同的微生物，所需營養(yǎng)物質(zhì)有較大差別，要針對微解析：不同的微生物，所需營養(yǎng)物質(zhì)有較大差別，要針對微 生物的具體情況分析。對于生物的具體情況分析。對于A A、B B選項(xiàng)，它的表達(dá)是不完整的。有選項(xiàng)，它的表達(dá)是不完整的。有 的碳源只能是碳源，如二氧化碳；有的碳源可同時是氮源，如的碳源只能是碳源，如二氧化碳；有的碳源可同時是氮源，如 NH4HCO3NH4HCO3；有的碳源同時是能源，如葡萄糖；有的碳源同時是；有的碳源同時是能源，如葡萄糖；有的碳源同時是 氮源，也是能源，如蛋白胨。對于氮源，也是能源，如蛋