生物藥品分析與檢驗,金葉458708244,藥物：能夠預防、治療、診斷人的疾病的物質。,藥品的定義是“用于預防、治療、診斷人的疾病，有目的地調節人的生理機能并規定有適應癥或者功能主治、用法和用量的物質，包括中藥材、中藥飲片、中成藥。化學原料藥及其制劑、抗生素、生化藥品、放射性藥品、血清、疫苗、血液制品和診斷藥品等。” 中華人民共和國藥品管理法（自2001年12月1日起施行）十章第一百零二條,藥物分類:,藥品分類:,生物藥物,化學藥物,中藥、天然藥物,生物制品,化學藥品,1、生物藥物是運用生物學、醫學、生物化學等的研究成果，從生物體、生物組織、細胞、體液等綜合利用物理學、化學、生物化學、生物技術和藥學等學科的原理和方法制造的一類用于預防、治療、診斷人類疾病的制品。,生物藥物的概述,廣義的生物藥物包括：,從動植物和微生物中直接制取的各種天然生理活性物質。人工合成或半合成的天然類似物,2、生物藥物分類,按其來源和生產方法大致分為三類,a) 生化藥物,b) 生物技術藥物,c) 生物制品,按生物藥物的化學本質和化學特性來分類,（1）氨基酸及其衍生物藥物,（2）有機酸，醇酮類,（4）酶及其調節劑,（3）維生素,a) 消化酶類,b)消炎酶類,c) 心腦血管疾病治療酶類,d) 抗腫瘤類,e) 氧化還原酶類,(5) 脂類藥物,（6）多肽和蛋白質類,（7）核酸類及其降解物和衍生物,（8）糖類,（9）生物技術藥物類,（10）生物制品類,生物制品：是以微生物、細胞、動物或人源組織和體液等為原料，應用傳統技術或現代生物技術制成，用于人類疾病的預防、治療、診斷，包括疫苗、抗血清、血液制品等。,生物技術藥物：采用DNA重組技術或其他新生物技術生產的治療和預防藥物。 重組DNA藥物（基因藥物） 重組蛋白質藥物（基因工程藥物）, 按生物藥物的用途分類,（1）治療藥物,（2）預防藥物,（3）診斷藥物,（4）用作其他生物醫藥用品,二、生物藥物的性質,（1）在化學構成上，生物藥物十分接近于人體內的正常生理性質，進入人體后也更容易為機體所吸收利用和參與人體的正常代謝與調節。,（2）在藥理上，生物藥物具有更高的生化機制合理性和特異診療有效性。,（3）在醫療上，生物藥物具有藥理活性高，針對性強，毒性低，副作用小，療效可靠及營養價值高等特點。,（5）生物藥物常常是一些生物大分子，它們不僅相對分子質量大，組成結構復雜，且具有嚴格的空間構象，以維持其特定的生理功能。,（6）生物藥物對熱，酸，堿，重金屬及PH變化都比較敏感，各種理化因素的變化易對生物活性產生影響。,（4）生物藥物的有效成分在生物材料中濃度很低，雜質的含量相對比較高。,（4）效價測定,（5）生化法確證結構,三、生物藥物的分析特點：,（1）相對分子量的測定,（2）生物活性的檢查,（3）安全性的檢查,藥物分析與生物藥物分析的關系, 生物藥物分析是藥物分析的一個分支。,藥物分析研究小分子之間的反應較多。,特點：,A 比較快的反應,B 比較簡單的體系,C 化學鍵的斷裂，組合或重排, 研究對象不同,D 在反應體系中做布朗運動無序碰撞而反應,生物藥物分析研究大分子與大分子或著大分子與小分子之間反應。,生物藥物與化學藥物的區別,a) 在結構上,大分子藥物、化學結構不明確、分子量不是定值。,b) 在檢查項目上,熱源檢查,過敏實驗,異常毒性實驗,c) 在分析方法上,化學藥物測定方法：重量法，滴定法，比色法，HPLC,生物藥物測定法： HPLC，電泳法，酶法，免疫法，生物檢定法,藥品質量標準與藥典,一、藥品質量標準藥品質量標準是國家對藥品質量、規格及檢驗方法所作的技術規定，是藥品生產、供應、使用、檢驗和藥政管理部門共同遵循的法定依據。 1. 組織生產提高質量的手段； 2. 科學管理和技術監督的組成部分； 3. 聯系科研、生產、供應、使用和檢驗的技術紐帶。,藥品質量標準體系,（療效確切、廣泛應用、質量可控）,我國制定藥品質量標準的指導思想：中藥標準立足于特色，西藥標準立足于趕超,生物制品基本保持一致。 我國現行藥品質量標準 1. 中華人民共和國藥典，簡稱中國藥典 2. 中華人民共和國衛生部藥品標準，簡稱部頒標準,藥品管理法中第三十二條規定“藥品必須符合國家藥品標準”。明確取消了地方藥品標準。從2001年12月1日起至2002年11月30日，國家藥品監督管理局對藥品管理法修訂前按照當時實行的地方藥品標準批準生產的藥品品種，逐個進行審查，經審查，對符合中華人民共和國藥品管理法有關規定的，納入國家藥品標準，可以繼續生產；對不符合規定的，立即停止該品種的生產并撤銷其批準文號。,二、中國藥典（一）中國藥典的沿革建國以來，先后出版了10版藥典，1953、1963、1977、1985、1990、1995、2000、2005、2010和2015年版藥典，現行使用的是中國藥典（2015年版）。其英文名稱是 Chinese Pharmacopiea，縮寫為ChP（2015）。,藥典是一個國家關于藥品標準的法典，是國家管理藥品生產與質量的依據。具有與其他法令一樣的約束力。凡屬藥典收載的藥品，其質量不符合規定標準的均不得出廠、不得銷售、不得使用。藥典在一定程度上反映一個國家的醫藥水平。中國藥典質量標準所涉及的分析方法根據生產工藝、檢驗條件和水平及綜合國力等多因素來選擇、建立。 方法學上要求具有普遍適用性。,（二）中國藥典的基本結構和內容 藥典的內容一般分為凡例、正文、附錄和索引四部分。,1. 凡例（General Notices）是制定和執行藥典必須了解和遵循的法則，解釋和說明中國藥典概念,正確進行質量檢驗提供指導原則。將正文、附錄及質量檢定有關的共性問題以及采用的計量單位、符號與專門術語等加以規定,避免全書中重復說明。其內容同樣具有法定約束力。,凡 例,1.名稱及編排,中文藥名:中國藥品通用名稱,英文藥名:國際非專利藥品(INN)命名原則,有機藥物化學名:有機化學命名原則,凡 例,2.檢驗方法和限度,按規定檢驗方法進行檢驗。,標準中規定的各種限度數值的規定,最后一位為有效數字,計算時可多保留一位。,凡 例,3.標準品 對照品,(1) 標準品 指用于生物檢定、抗生素或生化藥品中含量或效價測定的標準物質,按效價單位（或g）計,以國際標準品進行標定。,(2)對照品 指在用于檢測時,除另有規定外,均按干燥品（或無水物）進行計算后使用的標準物質。 用于藥物含量測定、純度檢查和鑒別試驗。.,試驗中的供試品與試液等“稱重”或“量取”的量均以阿拉伯數碼表示,其精確度可根據數據值的有效數位來確定。,(1)“稱取”或“量取”的精密度,凡 例,凡 例,規定“精密稱定”時,系指稱取重量應準確至所取重量的千分之一。,規定“稱定”時,系指稱取重量應準確至所取重量的百分之一。,規定精密量取時,系指量取體積的準確度應符合國家標準中對該體積移液管的精密度要求.,凡 例,取用量為“約”若干時,系指取用量不得超過規定量的10.,凡 例,5.溫度 溫度以攝氏度（）表示： 水浴溫度 98100 熱水 7080 微溫或溫水 4050 室溫 1030 冷水 210 冰浴 0 放冷 系指放冷至室溫,凡 例,2. 正文（Monographys） 是藥典的主要內容，為所收載藥品或制劑的質量標準，主要內容：名稱、性狀、物理常數、鑒別、檢查和含量測定等。,3. 附錄（Appendix） 附錄部分記載了制劑通則、檢查及測定方法、一般鑒別試驗、有關物理常數測定法、試劑配制法以及色譜法、光譜法等內容。 4. 索引（Index） 中文索引（漢語拼音索引）和英文名稱索引。,三、國外藥典 進出口藥品檢驗、仿制國外藥品檢驗、趕超國際水平時，可供參考的國外藥典有：1美國藥典與美國國家處方集 美國藥典 The United States Pharmacopoeia，縮寫USP，目前為37版，即USP（38） 美國國家處方集 The National Formulary，縮寫NF，目前為33版，即NF（33）,二者合并為一冊，縮寫為 USP（38）NF（33） 2英國藥典 British Pharmacopoeia，縮寫BP，目前為2012 年版，即BP（2012） 3日本藥局方 縮寫JP，目前為16 版，即JP（16） 4歐洲藥典 European Pharmacopoeia，縮寫Ph.Eup，目前為第六版。歐洲藥典對其成員國，與本國藥典具有同樣約束力，并且互為補充。,生物藥物質量控制與管理,（二）藥品質量管理規范內容,藥品臨床試驗管理規范 GCP,藥品生產質量管理規范 GMP,藥品經營質量管理規范 GSP,藥品非臨床研究管理規范GLP,科研單位研制安全有效藥物必須按照GLP規定開展工作.嚴格控制藥物研制的質量,確保實驗數據的準確可靠.,1 在新藥研究中保護受試者和病人的安全和權利.,2 新藥臨床研究人員保證藥品臨床試驗資料的科學性、可靠性、重視性.,生產企業生產出全面符合藥品標準的藥物,必須按GMP規定組織生產、嚴格把關.,藥品供應部門為了保證藥品運輸、貯存、銷售過程中藥品的質量和效力，必須按照GSP進行.,檢驗報告,生物藥物分析與檢驗基本程序,1 取 樣,根據藥物性質、不同劑型,采用不同的取樣方法及不同的取樣量。,1 取 樣,先進行外觀檢查包括：品名、劑型、批號、保質期及包裝情況等.,取樣程序,1 取 樣,片劑、膠囊劑（非均勻制劑） 每批至少1020 片注射劑（均勻制劑） 一般35支（測定次）一般情況下，樣品數量應為一次檢驗用量的三倍。,1 取 樣,當n 3時，每件取樣；當n 300 時,按 + 1當n 300時,按 /2 + 1,2 性 狀,記述藥品的外觀、臭、味和一般的穩定性情況，溶解度以及物理常數等。 1.外觀、臭、味和穩定性； 2.溶解度；,2 性 狀,3.物理常數 物理常數包括相對密度、餾程、熔點、凝點、比旋度、折光率、黏度、吸收系數、碘值、皂化值和酸值等；測定結果不僅對藥品具有鑒別意義，也反映藥品的純度，是評價藥品質量的主要指標之一。構成法定藥品質量標準，測定方法收載于藥典附錄。,3 鑒 別,依據藥物的化學結構和理化性質，采用化學法、物理法及生物學方法進行某些特殊反應，或測試某些物理常數或光譜特征及,判斷已知藥物及其制劑的真偽；采用一組（二個或幾個）試驗項目全面評價一個藥物。,3 鑒 別,專屬性強 再現性好 靈敏度高 簡便快速,鑒別方法要求,化學反應法,色譜鑒別法,光譜鑒別法,3 鑒 別,化學鑒別法,1 紫外光譜鑒別法,測定最大吸收波長,或同時測定最小吸收波長.,乙胺嘧啶 供試品在0.1mol/L鹽酸介質中的紫外吸收在272nm處為峰,216nm處為谷.,光譜鑒別法,光譜鑒別法, 規定吸收波長和吸收度比值法,兩性霉素在362nm、381nm、405nm波長處有最大吸收，規定362nm與381nm處吸收度比值不大于0.6、 381nm與405nm波長比值不大于0.9.,光譜鑒別法,己稀雌酚注射液用供試品溶液250450nm波長吸收光譜與對照品是否一致鑒別。, 與對照品比較,對比吸收光譜 的一致性, 經化學處理后,測定其反應產物的吸收光譜特性。, 規定一定濃度供試品在最大吸收 波長處的吸收度。,光譜鑒別法,光譜鑒別法,中國藥典采用標準圖譜對照法BP 采用標準圖譜對照法、對照品法USP 采用對照品法JP 規定條件下測定一定波長處特征吸收峰。,色譜譜鑒別法,適用于復雜環境下藥物有效成分及雜質鑒別,具有分離、分析同時進行的特點。,3 色譜法（ HPLC GC TLC),色譜譜鑒別法,（1）高效液相色譜法(HPLC) 供試品和對照品色譜峰保留時間一致.,（2）氣相色譜法 (GC) 同HPLC要求,色譜譜鑒別法,（3）薄層掃描法(TLC),對照品比較法 供試品斑點與對照品的Rf值及斑點的顏色應一致。, 化學法和儀器法相結合,每種藥 品一般選用24種方法進行鑒 別試驗,相互取長補短。,色譜譜鑒別法, 方法要有一定的專屬性、靈敏 性、且便于推廣。, 盡可能采用藥典中收載的方法。,酶法,電泳法,生物法,3 鑒 別,4 雜 質 檢 查,檢查：包括有效性、均一性、純度要求及安全性四個方面。純度要求即藥物的雜質檢查，亦稱限度檢查、純度檢查。藥物在不影響療效及人體健康的原則下,可以允許生產過程和貯藏期間引入的微量雜質的存在. 檢查是判斷藥品純度是否符合限量規定的要求。,5 安全性檢查,生物藥物應保證符合無毒、無菌、無熱源、無致敏源和降壓物質等一般安全性要求。,（1）異常毒性試驗：用一定劑量的藥物按指定的操作方法和給藥途徑給予規定體重的某種試驗動物，觀察其毒性反應。反應的判斷以試驗動物的死亡與否為終點。,5 安全性檢查,5 安全性檢查,（2）無菌檢查：是檢查藥品及敷料是否染有活菌的一種方法，是藥典中比較重要的檢查項目之一。,5 安全性檢查,（3）熱源檢查：本法是將一定劑量的供試品，靜脈注入家兔體內（家兔法），以其體溫升高的程度，判定該供試品中所含熱源是否符合規定，是一種限度試驗法,5 安全性檢查,（4）過敏試驗：是檢查異性蛋白的實驗。藥物中若夾雜有異性蛋白，在臨床使用時易引起病人的多種過敏反應。,5 安全性檢查,（5）降壓物質檢查：降壓物質是指某些藥物中可能含有的能導致血壓降低的物質。中國藥典采用貓（或狗）血壓法檢查藥物中所含的降壓物質。,6 含量測定,鑒別用來判定藥物的真偽。,檢查和含量測定可判定藥物的優劣。,藥物在通過鑒別無誤、雜質、安全檢查合格的基礎上,進行含量測定。,判斷一個藥物的質量是否符合要求，必須全面考慮鑒別、檢查與含量測定三者的檢驗結果。,6 含量測定,準確測定有效成分的含量。測定藥品的含量是評定藥品質量,保證藥品療效的重要手段。采用化學分析方法或物理分析方法。,含量測定,6 含量測定,生物藥物的含量表示方法, 用百分含量表示，適合于結構明確的小分子藥物或經水解后變成小分子藥物（理化方法測定）。用效價或酶活力單位來表示。適合于多肽、蛋白質和酶類藥物（生物方法或酶學測定）。,三、生物藥物常用的定量分析法,1、酶法, 酶活力測定法：是以酶為分析隊象，目的在于測定樣品中某種酶的含量或活性。, 酶分析法：是以酶為分析工具或分析試劑，測定樣品中酶以外的其它物質的含量，分析對