微生物實(shí)驗(yàn)室規(guī)范指導(dǎo)原則 影響藥品微生物的檢驗(yàn)結(jié)果的因素 1 實(shí)驗(yàn)人員在取樣或試驗(yàn)過(guò)程中污染微生微 2 生物學(xué)分析方法本身的誤差 3 樣品中或環(huán)境中微生物分布不均勻等因素在藥品檢驗(yàn)中 為保證微生物試驗(yàn)數(shù)據(jù)的可靠性和重現(xiàn)性 藥品微生物實(shí)驗(yàn)室必須使用經(jīng)驗(yàn)證的檢測(cè)方法并按良好的實(shí)驗(yàn)室規(guī)范指導(dǎo)試驗(yàn) 藥品微生物實(shí)驗(yàn)室規(guī)范包括以下幾個(gè)方面 人員 培養(yǎng)基 菌種 實(shí)驗(yàn)室的布局和運(yùn)行 設(shè)備 文件 實(shí)驗(yàn)記錄 結(jié)果的判斷等 人員培訓(xùn)從事藥品微生物試驗(yàn)工作的人員均要受到教育 培訓(xùn)及具備相關(guān)工作的經(jīng)驗(yàn) 微生物實(shí)驗(yàn)人員應(yīng)具備微生物學(xué)或相近專業(yè)知識(shí)的教育背景 崗前培訓(xùn)1 根據(jù)實(shí)驗(yàn)人員的崗位及職責(zé)對(duì)其進(jìn)行相應(yīng)的培訓(xùn)2 工作所必需的設(shè)備操作的培訓(xùn)3 微生物檢驗(yàn)技術(shù)的培訓(xùn)4 實(shí)驗(yàn)室生物安全等方面的培訓(xùn)經(jīng)考核合格后方可上崗 同時(shí) 實(shí)驗(yàn)室應(yīng)制定所有級(jí)別實(shí)驗(yàn)人員的繼續(xù)教育計(jì)劃 微生物實(shí)驗(yàn)室管理人員的培訓(xùn) 1 微生物實(shí)驗(yàn)室管理人員培訓(xùn)包括 管理技能 實(shí)驗(yàn)室安全 試驗(yàn)按排 預(yù)算 實(shí)驗(yàn)室研究 實(shí)驗(yàn)結(jié)果評(píng)估和數(shù)據(jù)偏差的調(diào)查及技術(shù)報(bào)告書寫等 微生物實(shí)驗(yàn)室設(shè)施規(guī)劃和運(yùn)行微生物實(shí)驗(yàn)室的規(guī)劃和設(shè)計(jì)應(yīng)充分考慮到微生物操作規(guī)范和實(shí)驗(yàn)室安全操作的要求 合理的規(guī)劃及活動(dòng)區(qū)域的劃分將提高微生物實(shí)驗(yàn)室操作的可靠性 無(wú)菌室布局無(wú)菌室應(yīng)遠(yuǎn)離交通干道 廁所及污染區(qū) 應(yīng)選上 下水道及其他安裝適宜的位置 無(wú)菌室的配套設(shè)施包括洗刷 培養(yǎng)基配制 消毒滅菌 滅菌物品存放和傳輸 培養(yǎng)間 結(jié)果觀察 試驗(yàn)菌實(shí)驗(yàn)和辦公室等 要集中 減少污染 便于管理和使用 微生物實(shí)驗(yàn)室的規(guī)劃實(shí)驗(yàn)室應(yīng)劃分成潔凈區(qū) 無(wú)菌區(qū)和培養(yǎng)區(qū)等 藥品微生物檢驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)室應(yīng)符合 中國(guó)藥典 無(wú)菌檢查 微生物限度檢查試驗(yàn)環(huán)境的要求1 獨(dú)立設(shè)置的潔凈室 區(qū) 或隔離系統(tǒng)2 細(xì)菌 真菌 實(shí)驗(yàn)室3 培養(yǎng)室4 培養(yǎng)基及實(shí)驗(yàn)用具準(zhǔn)備 包括滅菌 區(qū)5 樣品接收和儲(chǔ)藏區(qū) 標(biāo)準(zhǔn)菌株儲(chǔ)藏區(qū)6 污染物處理區(qū)7 文檔處理區(qū)等輔助區(qū)域?qū)ι鲜鰠^(qū)域明確標(biāo)識(shí) 控制程序和操作規(guī)程 實(shí)驗(yàn)室應(yīng)建立控制程序和標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程 無(wú)菌抽樣特別是無(wú)菌生產(chǎn)的產(chǎn)品 應(yīng)有非常嚴(yán)格的無(wú)菌防護(hù)措施 避免在抽樣過(guò)程中造成微生物的污染 隔離器技術(shù)也適于微生物試驗(yàn)或無(wú)菌試驗(yàn) 隔離器也應(yīng)定期對(duì)試驗(yàn)區(qū)的潔凈度和滅菌效果等功能進(jìn)行驗(yàn)證 實(shí)驗(yàn)室使用的消毒劑應(yīng)無(wú)菌對(duì)并定期更換 污染微生物的樣品 需進(jìn)一步分析鑒定 均應(yīng)在陽(yáng)性菌實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行 被檢樣品應(yīng)有傳遞 儲(chǔ)存 處置和識(shí)別管理程序 待驗(yàn)樣品應(yīng)在合適的條件下儲(chǔ)存 應(yīng)明確規(guī)定和記錄儲(chǔ)存條件 廢棄樣品和有害廢棄物應(yīng)制定處理規(guī)程 設(shè)備實(shí)驗(yàn)室應(yīng)配備與檢驗(yàn)?zāi)芰凸ぷ髁肯噙m應(yīng)的儀器設(shè)備 其種類和型號(hào) 測(cè)量范圍和準(zhǔn)確度等應(yīng)滿足檢驗(yàn)的要求 設(shè)備的安裝和布局應(yīng)便于操作 易于維護(hù) 清潔和校準(zhǔn) 儀器設(shè)備管理制度和操作規(guī)程 1 實(shí)驗(yàn)室應(yīng)建立完整的儀器設(shè)備管理制度 為保證設(shè)備處于良好工作狀態(tài) 應(yīng)定期維護(hù)和期間核查 并保存相關(guān)記錄 重要的儀器設(shè)備 應(yīng)由專人負(fù)責(zé) 保證其運(yùn)行狀態(tài)正常和受控 同時(shí)應(yīng)有相應(yīng)的備用設(shè)備以保證試驗(yàn)菌株和微生物培養(yǎng)的連續(xù)性 3 對(duì)于一些容易污染微生物的儀器設(shè)備 無(wú)菌器具應(yīng)有明確標(biāo)識(shí)及標(biāo)準(zhǔn)的操作規(guī)程 記錄 規(guī)范化管理記錄檔案將充分證明試驗(yàn)規(guī)范化和檢驗(yàn)結(jié)果的真實(shí)性 包括以下幾個(gè)方面 1 試驗(yàn)人員2 試驗(yàn)設(shè)備3 培養(yǎng)基及稀釋液4 試驗(yàn)操作程序 實(shí)驗(yàn)記錄的保存 完整的實(shí)驗(yàn)記錄 以便確認(rèn)數(shù)據(jù)的完整性 實(shí)驗(yàn)記錄應(yīng)是原始記錄 為保證實(shí)驗(yàn)記錄的真實(shí)性 微生物實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量控制 制定嚴(yán)格的微生物實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制程序1 培養(yǎng)基的質(zhì)量和規(guī)范化操作2 菌種的保藏3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果的正確判斷 培養(yǎng)基的制備和質(zhì)量控制 1 培養(yǎng)基的制備方法2 貯藏條件3 質(zhì)量控制試驗(yàn) 1 培養(yǎng)基制備 培養(yǎng)基可按處方制備也可使用按處方生產(chǎn)的符合規(guī)定的商品化成品培養(yǎng)基 配制時(shí)應(yīng)按使用說(shuō)明上的要求操作確保培養(yǎng)基的質(zhì)量符合要求 配制培養(yǎng)基最常用的溶劑是純化水 特殊情況下需要用去離子水和蒸餾水 對(duì)熱敏感的培養(yǎng)基應(yīng)用滅菌水和無(wú)菌容器配制與分裝 配制時(shí)若需加熱助溶應(yīng)注意溫度不要過(guò)高 2 培養(yǎng)基的滅菌培養(yǎng)基滅菌方法和條件 應(yīng)按說(shuō)明書和驗(yàn)證試驗(yàn)的參數(shù) 采用不同的方法進(jìn)行滅菌 通常多用流通蒸汽滅菌濾膜過(guò)濾除菌 過(guò)濾器應(yīng)通過(guò)驗(yàn)證 每批培養(yǎng)基滅菌后均應(yīng)測(cè)定PH值除非經(jīng)驗(yàn)證表明培養(yǎng)基的PH允許的變化范圍很寬 否則 培養(yǎng)基的PH的范圍不得超過(guò)規(guī)定的 0 2 制成平板或分裝于試管的培養(yǎng)基檢查 固體培養(yǎng)基檢查 氧化還原指示劑檢查 詳細(xì)記錄 三 培養(yǎng)基的貯藏商品化培養(yǎng)基應(yīng)根據(jù)使用說(shuō)明書上的要求進(jìn)行儲(chǔ)存 所采用的保藏和運(yùn)輸條件應(yīng)使培養(yǎng)基最低限度失去水分并提供機(jī)械保護(hù) 自配培養(yǎng)基應(yīng)標(biāo)記培養(yǎng)基的名稱 批號(hào) 配置日期并在驗(yàn)證的條件下儲(chǔ)存 1 不得儲(chǔ)藏在高壓菌器中 2 制備好的培養(yǎng)基應(yīng)保存在2 25 避光的環(huán)境 3 保存于密閉容器中 可防止水分流失以延長(zhǎng)保存時(shí)間 3 置冰箱保存一般不超過(guò)一周 瓊脂培養(yǎng)基不得在0 或0 以下存放 若要延長(zhǎng)保存 保存期需經(jīng)驗(yàn)證保存 4 固體培養(yǎng)基滅菌后的再融化應(yīng)在加熱的水浴中或采用流通蒸汽進(jìn)行 只允許一次 融化的培養(yǎng)基應(yīng)放在45 50 的水浴中 不得超過(guò)8小時(shí) 四 培養(yǎng)基的質(zhì)量控制為保證培養(yǎng)基的質(zhì)量對(duì)所配置的培養(yǎng)基均應(yīng)進(jìn)行質(zhì)量控制試驗(yàn) 1 實(shí)驗(yàn)室配制的培養(yǎng)基的常規(guī)質(zhì)控項(xiàng)目有 pH值測(cè)定 適用性試驗(yàn) 定期的穩(wěn)定性檢查 培養(yǎng)基有效期的確定 2 當(dāng)一批培養(yǎng)基的質(zhì)控試驗(yàn)不符合規(guī)定 應(yīng)查找造成不合格的原因 避免問(wèn)題的重復(fù)出現(xiàn) 處理后應(yīng)重新進(jìn)行質(zhì)控試驗(yàn) 合格后再使用 3 用于環(huán)境監(jiān)控的培養(yǎng)基 最好終端滅 否則在使用前應(yīng)進(jìn)行100 的預(yù)培養(yǎng) 避免出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果 4 培養(yǎng)基的有效期 是指已通過(guò)促生長(zhǎng)試驗(yàn)的培養(yǎng)基在整個(gè)有效期內(nèi)均需符合這些相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn) 5 對(duì)配制培養(yǎng)基的過(guò)程作詳細(xì)的記錄 常用菌種管理和保存 菌種的保存 微生物實(shí)驗(yàn)過(guò)程中 實(shí)驗(yàn)菌株可能是最敏感的 因?yàn)樗鼈兊纳锘钚院吞匦砸蕾囉诤线m的試驗(yàn)操作和貯藏條件 菌種的保存和處理 1 實(shí)驗(yàn)室菌種的處理和保藏的程序應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)化 使盡可能減少菌種污染和生長(zhǎng)特性的改變 2 工作菌種的傳代次數(shù)應(yīng)嚴(yán)格控制 不得超過(guò)5代 從菌種保藏中心獲得的標(biāo)準(zhǔn)菌株為第0代 防止過(guò)度的傳代造成菌種變異 工作菌株不可替代標(biāo)準(zhǔn)菌株 標(biāo)準(zhǔn)菌株的商業(yè)衍生物僅可用作工作菌株 未使用完的菌懸液或被污染 變異的菌種應(yīng)滅菌后丟棄 菌種的管理實(shí)驗(yàn)室必須建立菌種保存和使用文件化的程序管理制度 1 朔源2 貯藏條件3 培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件4 鑒定5 銷毀的記錄6 其它需要的程序 菌懸液的制備與保存采用經(jīng)驗(yàn)證的方法制備菌懸液 除另有規(guī)定外 微生物限度試驗(yàn)用菌懸液的制備同培養(yǎng)基靈敏度試驗(yàn) 常用菌種保藏方法菌種保藏方法有多種常用的保藏方法有 瓊脂斜面保藏方法 半固體培養(yǎng)基保藏法及液體培養(yǎng)基低溫保藏方法 試驗(yàn)結(jié)果的判斷一 影響試驗(yàn)結(jié)果的因素 活微生物