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文檔簡介
植物組織培養具備的6大基本培養條件在植物組織培養中溫度、光照、濕度等各種環境條件,培養基組成、PH值、滲透壓等各種化學環境條件都是影響組織培養育苗的生長和發育重要因素。一、溫度(temperature)因為溫度是植物組織培養中的重要因素,所以植物組織培養在最適宜的溫度下生長分化才能表現良好,大多數植物組織培養都是在2327之間進行,一般采用252。低于15時培養,植物組織會表現生長停止,高于35時對植物生長不利。但是,不同植物培養的適溫不同。白鶴非的最適溫度是20、月季是2527、番茄是28。溫度不僅影響植物組織培養育苗的生長速度,也影響其分化增殖以及器官建成等發育進程。如煙草芽的形成以28為最好,在12以下,33以上形成率皆最低。不同培養目標采用的培養溫度也不同,百合鱗片在30以下再生的小鱗莖的發葉速度和百分率比在25%以下的高。桃胚在25條件進行一定時間的低溫處理,有利于提高胚培養成活率。用35處理草莓的莖尖分生組織35d,可得到無病毒苗。二、LED光照(light)組織培養中使用光照也是重要的條件之一,主要表現在光強、光質、以及光照時間方面:1、LED光照強度(light intensity)光照強度對培養細胞的增殖和器官的分化有重要影響,從目前的研究情況看,光照強度對外植物體、細胞的最初分裂有明顯的影響。一般來說,光照強度較強,幼苗生長的粗壯,而光照強度較弱幼苗容易徒長。2、LED光質(light wave)光質對愈傷組織誘導,培養組織的增殖以及器官的分化都有明顯的影響。如百合珠芽在紅光下培養,8周后,分化出愈傷組織。但在藍光下培養,幾周后才出現愈傷組織,而唐菖蒲子球塊接種15天后,在藍光下培養首先出現芽,形成的幼苗生長旺盛,而白光下幼苗纖細。3、LED光周期(light period)試管苗培養時要選用一定的光暗周期來進行組織培養,最常用的周期是16h的光照,8h的黑暗。研究表明,對短日照敏感的品種的器官組織,在短日照下易分化,而在長日照下產生愈傷組織,有時需要暗培養,尤其是一些植物的愈傷組織在暗培養下比在光下更好。如紅花、烏飯樹的愈傷組織。三、濕度(humidity)濕度的影響包括培養容器保持和環境的濕度條件,容器內主要受培養基水分含量和封口材料的影響。前者又受瓊脂含量的影響。在冬季應當適當減少瓊脂用量,否則,將使培養基干硬,以致不利于外植體接觸或插進培養基,導致生長受阻。封口材料直接影響容器內濕度情況,但封閉性較高的封口材料易引起透氣性受阻,也會導致植物生長發育受影響。環境的相對濕度可以影響培養基的水分蒸發,一般要求70%-80%的相對濕度,常用加濕器或經常灑水的方法來調節濕度。濕度過低會使培養基喪失大量水分,導致培養基各種成分濃度的改變和滲透壓的升高,進而影響組織培養的正常進行。濕度過高時,易引起棉塞長霉,造成污染。四、滲透壓(penetrating pressure)培養基中由于有添加的鹽類、蔗糖等化合物,因此影響到滲透壓的變化。通常1-2個大氣壓對植物生長有促進作用,2個大氣壓以上就對植物生長有阻礙作用,而5-6個大氣壓植物生長就會完全停止,6個大氣壓植物細胞就不能生存。五、PH值不同的植物對培養基最適PH值的要求也是不同的,大多在5-6.5左右,一般培養基皆要求5.8,這基本能適應大多數植物培養的需要。PH值適度因材料而異,也因培養基的組成而不同。以硝態氮作氮源和以銨態氮作氮源就不一樣,后者較高一些。一般來說PH值高于6.5時,培養基會變硬;低于5時,瓊脂不能很好地凝固。因為高溫滅菌會降低PH值(約0.2-0.3個PH值)因此在配制時常提高PH值0.2-0.3單位。PH值大小調節可用0.1M的NaOH和0.1M的HCl來調整。1ml的NaOH可使PH值升高0.2單位,1ml的HCl可使PH值降低0.2單位。調節時一定要充分攪拌均勻。六、氣體(gas)氧氣是組織培養中必需的因素,瓶蓋封閉時要考慮通氣問題,可用附有濾氣膜的封口材料,如易生組培熱銷的培養瓶蓋和封口膜本身帶有PTFE材質的濾菌膜,孔徑為0.2um,即保證通氣又可以濾菌。通氣最好的是棉塞封閉瓶口,但棉塞易使培養基干
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