動態觀察柴胡皂苷a對實驗性癲癇小鼠癇性發作的影響【關鍵詞】柴胡皂苷摘要:目的研究柴胡皂苷a(saikosaponina,SSa)對戊四氮（PTZ）誘導的小鼠癇性發作的影響，了解其藥效特點。方法采用PTZ誘導小鼠急性癇性發作來制作癲癇模型，通過記錄不同時間點小鼠癇性發作潛伏期和強直性驚厥率的變化，研究SSa抗小鼠PTZ致癇作用的動態特征。結果SSa腹腔注射30、60、90min組能顯著延長陣發性痙攣潛伏期（P<；0.05），其中SSa90min組作用最為顯著（P<；001）。在60、90、120min組中，SSa腹腔注射也能明顯延長強直性驚厥潛伏期（P<；0.05），其中尤以90min組作用顯著(P<；001)；SSa90min組對過渡時間延長作用顯著（P<；0.05）；SSa30min、60min組能減少PTZ致癇小鼠強直性驚厥發作例數（P<；005），且以SSa60min組作用最為顯著。結論SSa具有對抗小鼠PTZ致癇作用；腹腔注射SSa對PTZ誘導小鼠的癇性發作在120min內以60min、90min藥效作用較強。關鍵詞:實驗性癲癇；柴胡皂苷a；PTZ；小鼠Abstract:ObjectiveTostudythedynamicvariationsoftheeffectofsaikosaponina(SSa)onepilepticmiceinducedbypentylenetetrazol（PTZ）,andtounderstandtheeffectcharacteristicsofSSa.MethodWiththeepilepticmiceinducedbyPTZasanimalmodel.Inthedifferenttimepoint,thetentativeseizureincubationperiodandthecaseoftetanicconvulsionwererecordedtostudythecharacteristicsoftheantiepilepticeffectofSSaonmouseinducedbyPTZ.ResultsInthegroupof30min,60minand90min,theincubationperiodofcloniccrampwassignificantlyprolongedbySSa(P<；0.05),andinthegroupof90min,theeffectwasremarkable(P<；0.01).Also,intraperitonealinjectionofSSacouldprolongtheincubationperiodoftetanicconvulsioninthegroupof60min,90minand120min(P<；0.05).Theeffectwasespeciallyevidentinthegroupof90min(P<；0.01).Inthegroupof90min,thetransitiontimewasremarkablyprolongedbySSa(P<；0.05).InthegroupofSSa30minandSSa60min,SSacouldreducethetetanicconvulsionofepilepticmiceintroducedbyPTZ(P<；0.05),andtheeffectismoresignificantinthegroupof60minthanthatinthegroupof30min.Inthegroupof30minand60min,SSacouldprotecttheepilepticmiceintroducedbyPTZfromtetanicconvulsionmoresignificantlythanthoseinthegroupof90minand120min.ConclusionsSSacaninhibittheepilepticmiceinducedbyPTZ,SSacanprotectthemousefromtetanicconvulsion,andin2hours,theeffectwasmoreremarkableat60thmin,90thminthanothers.Keywords:epilepsy；Saikosaponina；PTZ；mice柴胡皂苷（saikosaponin）為中藥柴胡的主要成分之一，其單體成分之一的柴胡皂苷a(SSa)有降血脂、抗滲出、抗肉芽腫和保護肝細胞等作用1，對于慢性腎病的治療也有較好療效2，3，但目前尚沒有SSa抗癲癇作用的報道。不過已有不少證據表明柴胡及柴胡總皂苷具有鎮靜和抗實驗性癲癇的作用4，5。在柴胡皂苷單體各成分中，為明確何種皂苷單體具有抗癲癇作用，筆者研究了SSa對PTZ致癇小鼠癇性發作的影響，并探討SSa對癇性發作影響的不同時間的動態變化，以期了解SSa抗癲癇藥效作用的時間特點。1材料1.1動物健康昆明種小鼠180只，雌雄各半，體質量（202）g,由南方醫科大學動物實驗中心提供，合格證號為2004A063。1.2主要試劑柴胡皂苷a購自上海醫藥工業研究所，批號050106；丙戊酸鈉（VPA）注射劑（德巴金）由杭州賽諾菲圣德拉保民生制藥有限公司生產，批號0402049。戊四氮由美國Sigma公司生產，批號064k0686。2實驗方法2.1實驗動物分組將180只昆明小鼠隨機分為9組，每組20只，雌雄各半。A組:生理鹽水組（生理鹽水+PTZ致癇），作為以下各組的對照組；B、C、D、E組分別為經SSa預處理30、60、90、120min組（SSa30min、SSa60min、SSa90min、SSa120min+PTZ致癇）；F、G、H、I組分別為經VPA預處理30、60、90、120min組(VPA30min、VPA60min、VPA90min、VPA120min+PTZ致癇)。2.2模型制備及給藥方法A組小鼠在腹腔內注射生理鹽水（10mL/kg）后30min時腹腔注射PTZ（85mg/kg）致癇；B、C、D、E組小鼠分別在腹腔注射SSa（7.24mg/kg）后30、60、90、120min時腹腔注射上述劑量的PTZ致癇；F、G、H、I組小鼠分別在腹腔注射VPA(200mg/kg)后30、60、90、120min時腹腔注射上述劑量的PTZ致癇。2.3觀察指標小鼠癇性發作分級采用Racine標準4。0級：無發作反應；1級：節律性口角、耳或面部肌肉抽動陣攣；2級：點頭并伴隨更嚴重的面部肌肉抽動陣攣；3級:出現前肢陣攣但不伴隨直立；4級：前肢陣攣伴隨直立；5級：全身強直陣攣發作而跌倒。腹腔注射PTZ后立即觀察小鼠的行為動作，連續10min，記錄小鼠癇性發作潛伏期，包括陣發性痙攣潛伏期（即從注射PTZ開始至相當于13級發作的時間）、強直性驚厥潛伏期（即從注射PTZ開始至相當于5級發作的時間），計算由陣發性痙攣向強直性驚厥發作的過渡時間；并記錄發生強直性驚厥的例數，計算其發作率。2.4統計學處理應用SPSS10.0軟件，多樣本均數的比較采用方差分析，計數資料及率的比較用卡方檢驗，以P<；005為差異有顯著性。3結果3.1SSa對PTZ致癇小鼠癇性發作潛伏期的動態影響將對應時間點SSa預處理、VPA預處理組與生理鹽水組比較，B、C、D、F、G、H各組陣發性痙攣潛伏期明顯延長，與A組比較差異有顯著性（P<；0.05），其中尤以D、F、G組差異顯著（P<；0.01）；C、D、E、F、H組強直性驚厥潛伏期同樣延長，與A組比較差異有顯著性（P<；0.05），其中尤以D、F組差異顯著(P<；001)；在過渡時間的比較中，D、F組與A組比較差異均有顯著性（P<；0.05），其中尤以F組差異顯著(P<；0.01)。將對應時間點的SSa組與VPA組比較，30min時SSa組對各潛伏期的延長作用不如VPA組(P<；001)，其余各時間點比較差異無顯著性。見表1。以上結果提示，SSa不僅能明顯延長陣發性痙攣潛伏期，而且能夠顯著延長強直性驚厥潛伏期及其過渡時間，其作用在60min、90min時強于30min、120min時，而VPA的作用以30min和60min強于90min與120min，可見SSa達到最佳作用的時間比VPA延后。表1SSa對PTZ致癇小鼠癇性發作潛伏期的動態影響（略）3.2SSa對PTZ致癇小鼠強直性驚厥發作例數的動態影響根據小鼠10min內在PTZ誘導下出現強直性驚厥的例數，將對應時間點SSa預處理組、VPA預處理組與生理鹽水組比較，SSa與VPA預處理30min、60min組出現強直性驚厥例數與生理鹽水組比較差異有顯著性，其作用優于90min、120min組。見表2。表2SSa對PTZ致癇小鼠強直性驚厥發作例數的動態影響（略）4討論PTZ為很強的致癇劑，其致癇模型被認為是理想的全身強直性驚厥發作模型之一,PTZ本身無特殊的神經毒性作用6,所以被廣泛應用于癲癇發病機理的研究、抗癲癇藥物的篩選。當PTZ誘發小鼠癲癇發生時，其癇性發作的特點是初期以陣攣性發作為主，很快以全身強直性驚厥發作為主要特點，根據其發作特點，在本研究中以這2種發作形式為指標并結合目前公認的Racine標準來分析其癇性行為。VPA是臨床常用抗癲癇的主要藥物之一，有廣譜抗癲癇作用，對單純失神發作及全身強直陣攣(驚厥)發作療效最好，對單純及復雜部分性發作、肌陣攣性發作等也有良效。有文獻研究VPA在大鼠血清和腦脊液濃度變化時發現，腦脊液內最高藥物濃度低于血清濃度，且其達到最高藥物濃度時間遲于血清藥物最高濃度，其半衰期約為60min7。本研究也證實VPA既能延長陣發性痙攣、強直性驚厥的潛伏期，也能抑制強直性驚厥發作率，明顯減少驚厥發生例數，其作用以30min和60min時尤為明顯，與文獻報道一致。本研究結果顯示，SSa不僅能明顯延長小鼠陣發性痙攣的潛伏期，而且能夠顯著延長強直性驚厥的潛伏期及其過渡時間，能明顯減少小鼠發生強直性驚厥的例數，抑制驚厥發作率，其作用在60min、90min時較強。提示SSa具有較好的抗實驗性癲癇作用，可能對肌陣攣性發作、全身強直陣攣發作有效。就本研究給出的劑量而言，30min時SSa對小鼠各潛伏期的延長作用不如VPA，但隨著時間的延長，SSa在60min、90min時對潛伏期的延長明顯，可能與SSa的起效作用較慢有關。至于SSa的代謝特點，有研究顯示其口服代謝時與消化道的菌群有密切關系8，其代謝呈現時間依賴性，早期有學者將其在體外胃液及腸道細菌共同培養發現SSa在3h內完全被代謝，而轉化為其他類型的皂苷或苷元9。但SSa在血清及腦脊液中的變化情況如何，其代謝與藥效作用是否相關，以及SSa能否在更長的時間內維持其作用，還有待進一步研究。參考文獻:1歐明，林勵，李衍文.簡明中藥成分手冊M.北京：中國醫藥科技出版社,2003：318.2張相年,張相波.柴胡皂苷的生理活性及在治療腎病中的應用J.廣東藥學院學報,2000,16(2):121.3HATTORIT,ITOM,SUZUKIY.Studiesonantinephriticeffectsofplantcomponentsinrats(1)：effectsofsaikosaponinsoriginaltypeantiGBMnephritisinratsanditsmechanismsJ.NipponYakurigakuZasshi，1991,97(1):13.4李靜，謝煒，陳寶田.柴胡對實驗性癲癇大鼠的治療作用J.中藥藥理與臨床,2000,16：28.5黃運生，謝煒，陳寶田.柴胡皂苷對癲癇大鼠腦電圖影響J.第一軍醫大學學報,2004,24(12)：1379.6HOLMESGL.SeizureinducedneuronalinjuryanimaldataJ