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DB41河南省質量技術監督局發布本標準起草單位:河南海瑞正檢測技術有限公司、河南省獸藥飼料監察所、河南省種牛遺傳性能測1飼料添加劑丁酸梭菌的測定微生物法凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）GB/T6682分析實驗室用水規格和GB/T8170數值修約規則與極限數值的表注：除非另有說明，在分析中僅使用確認為分析純的試劑。水應符合GB/T6682中三4儀器設備4.2粉碎機。4.3高壓滅菌器。4.4恒溫培養箱。4.7厭氧罐（配厭氧產氣袋）。4.8超凈工作臺。4.11酒精燈。4.12試管架。4.13滅菌試管:15mL。25.1試樣稀釋及培養同時用1mL無菌生理鹽水作對照。然后將5.1.5待培養基凝固后迅速將平皿倒置于培養箱中，5.2菌落特征5.3確證試驗從平皿中選出5個特征菌落進行確證試驗，在胰蛋白胨大豆瓊脂平皿上進行純化。挑選純化的菌確證結果:革蘭氏染色為陽性菌，菌體呈桿狀，能形成圓-++---+6.1計算每塊平板上的丁酸梭菌菌落數a，使用式（1）計算:a=×C…………（1）式中:最終結果按照GB/T8170數值修約3選擇兩個連續稀釋度平板（每個稀釋度至少有一塊平板），其上經確證后的丁酸梭菌數介于30~式中:N樣品中丁酸梭菌菌數；Σa所有平板經確證后的丁酸梭菌菌數的總和；n1第一個稀釋的平均數；n2第二個稀釋的平均數；d第一個稀釋度的稀釋因子（未經稀釋的液體樣品的d值為1）。4培養基和試劑A.1硫酸亞鐵培養基A.1.1成分A.1.2制法將上述成分置于燒杯中加熱溶解，分裝于三角瓶中；121℃高壓滅菌A.20.85%生理鹽水A.3革蘭氏染色A.3.1結晶紫染色液A.3.1.1成分A.3.1.2制法A.3.2革蘭氏碘液A.3.2.1成分A.3.2.2制法將碘與碘化鉀先進行混合，加入蒸餾水少許，充分振搖，待完全溶解后，再加蒸餾水至300mL。5A.3.3沙黃復染液A.3.3.1成分A.3.3.2制法6加入指示劑溴甲酚紫，分裝于試管，115℃高壓滅菌

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