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文檔簡介

菌種保藏要求各保藏管理中心所保藏的菌種，必須具有該菌種的詳細歷史及有關實驗資料。并對其所負責保藏的菌種均應采取妥善、可靠的方法保藏，避免菌種的污染或死亡。

《中國微生物菌種保藏管理條例》

1986年

微生物個體微小，代謝活躍，生長繁殖快，如果保存不妥容易發生變異，或被其他微生物污染，甚至導致細胞死亡。

因此，在保藏過程中，必須使微生物的代謝處于最不活躍或相對靜止的狀態，才能在一定的時間內使其不發生變異而又保持生活能力。

微生物菌種保藏

——基本原理

在挑選優良純培養物并使其處于休眠狀態基礎上，人為地創造一個有利于休眠的環境，使其長期保存后仍能保持菌種原有的優良特性。

微生物菌種保藏

——基本措施①傳代培養保藏法

②液體石蠟覆蓋保藏③載體保藏法真空干燥低溫寄主保藏法冷凍保藏法

⑤⑥④冷凍干燥保藏法1．傳代培養保藏法

又有斜面培養、穿刺培養、皰肉培養基培養等（后者作保藏厭氧細菌用），培養后于4—6℃冰箱內保存。2．液體石蠟覆蓋保藏法

是傳代培養的變相方法，能夠適當延長保藏時間，它是在斜面培養物和穿刺培養物上面覆蓋滅菌的液體石蠟，一方面可防止因培養基水分蒸發而引起菌種死亡，另一方面可阻止氧氣進入，以減弱代謝作用。3．載體保藏法

是將微生物吸附在適當的載體，如土壤、沙子、硅膠、濾紙上，而后進行干燥的保藏法，例如沙土保藏法和濾紙保藏法應用相當廣泛。4．寄主保藏法

用于目前尚不能在人工培養基上生長的微生物，如病毒、立克次氏體、螺旋體等，它們必須在生活的動物、昆蟲、雞胚內感染并傳代，此法相當于一般微生物的傳代培養保藏法。病毒等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法5．冷凍保藏法

可分低溫冰箱（-20—-30℃，-50—-80℃）、干冰酒精快速凍結（約-70℃）和液氮（-196℃）等保藏法。6．冷凍干燥保藏法

先使微生物在極低溫度（-70℃左右）下快速冷凍，然后在減壓下利用升華現象除去水分（真空干燥）。

有些方法如濾紙保藏法、液氮保藏法和冷凍干燥保藏法等均需使用保護劑來制備細胞懸液，以防止因冷凍或水分不斷升華對細胞的損害。

保護性溶質可通過氫和離子鍵對水和細胞所產生的親和力來穩定細胞成分的構型。

保護劑有牛乳、血清、糖類、甘油、二甲亞砜等。

濾紙保藏法方法步驟

1）將濾紙剪成0．5×1．2cm的小條，裝入0．6×8cm的安瓿管中，每管1—2張，塞以棉塞，（1．05kg/cm2），121．3℃滅菌30分鐘。2）將需要保存的菌種，在適宜的斜面培養基上培養，使充分生長。3）取滅菌脫脂牛乳1—2ml滴加在滅菌培養皿或試管內，取數環菌苔在牛乳內混勻，制成濃懸液。4）用滅菌鑷子自安瓿管取濾紙條浸入菌懸液內，使其吸飽，再放回至安瓿管中，塞上棉塞。5）將安瓿管放入內有五氧化二磷作吸水劑的干燥器中，用真空泵抽氣至干。6）將棉花塞入管內，用火焰熔封，保存于低溫下。7）需要使用菌種，復活培養時，可將安瓿管口在火焰上燒熱，滴一滴冷水在燒熱的部位，使玻璃破裂，再用鑷子敲掉口端的玻璃，待安瓿管開啟后，取出濾紙，放入液體培養基內，置溫箱中培養。

優缺點

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