單克隆抗體制備過程相關知識點檢測（1）該過程中應用到的技術_______________________________________（2）原理_______________________________________（3）注射特定抗原的目的______________________________________________（4）誘導融合的方法______________________________________動物細胞特有的誘導融合方法為_______________________（5）第一次篩選的目的______________________

第一次如何篩選___________________________

篩選原理____________________________________________________（6）雜交瘤細胞的特點__________________________________動物細胞融合、動物細胞培養細胞膜具有一定的流動性、細胞增殖用特定的抗原對小鼠進行免疫，并從該小鼠的脾中得到能產生特定抗體的B淋巴細胞PEG融合法、電融合法、滅活病毒誘導法滅活病毒誘導法篩選獲得雜交瘤細胞用特定的選擇培養基進行篩選在選擇培養基上，未融合的親本細胞和融合的具有同種核的細胞都會死亡，只有融合的雜交瘤細胞才能生長既能迅速大量增殖，又能產生抗體（7）第二次篩選的目的________________________________________________如何篩選___________________________________________________

選擇抗體檢測呈___性的雜交瘤細胞，即_____________

_____________（8）抗體檢測原理_______________________________________（9）如何獲取大量所需雜交瘤細胞__________________________________________（10）如何獲取單克隆抗體①體外培養___________________________②小鼠腹腔內培養_________________________（11）單克隆抗體的優點_____________________________（12）說出以小鼠脾臟為材料制備單細胞懸液的實驗步驟

。獲得足夠數量的能分泌所需抗體的雜交瘤細胞分泌的抗體能與特定的抗原結合抗原和抗體能夠特異性結合(分子水平的鑒定）在體外條件下大規模培養（接種于培養液中）或注射到小鼠腹腔內增殖從細胞培養液中獲取從小鼠腹水中獲取能準確地識別抗原的細微差異，與特定抗原發生特異性結合，并且可以大量制備陽

用96孔板培養，在每一個孔中盡量只接種一個雜交瘤細胞的情況下，進行克隆化培養和抗體檢測（進行多次篩選）人教版

選擇性必修32.2.3動物體細胞核移植技術和克隆動物本節聚焦1.什么是動物體細胞核移植技術？2.動物體細胞核移植的基本過程是什么？3.體細胞核移植技術的應用前景有哪些？4.怎樣理性看待體細胞核移植技術存在的問題？【拔毛變猴】

“（悟空）拔一把毫毛，丟在口中嚼碎，望空噴去，叫一聲‘變！’，即變作三二百個小猴，周圍攢簇（cù）。”這是《西游記》中的一段描述，展示了中華先賢的想象力。克隆豬克隆牛克隆羊自1996年首個體細胞克隆動物多莉羊（Dolly）誕生以來，人類已經成功克隆了馬、牛和豬等大型家畜，但體細胞克隆猴的誕生卻轟動了世界！！為何不稱為“克隆技術”而是“核移植技術”？自主閱讀教材P52，思考下列問題一、動物細胞核移植技術思+議1.動物細胞核移植的概念？原理？生殖方式（有性/無性）？2.動物細胞核移植分類？哪種核移植難度高？為什么？《任務一》3.體細胞核移植的困難原因（非人靈長類動物）？一、動物細胞核移植技術

將動物的一個細胞的細胞核，移入去核的卵母細胞中，使這個重新組合的細胞發育成新胚胎，繼而發育成動物個體的技術。卵母細胞動物細胞去核取核移入重構胚新胚胎克隆動物發育發育動物細胞核的全能性無性生殖1.概念：2.原理：3.生殖方式：供體提供受體沒有經過生殖細胞的結合展+評用核移植的方法得到的動物稱為克隆動物。Vs動物細胞培養原理(細胞增殖)Vs植物組織培養（植物細胞的全能性）一、動物細胞核移植技術4.分類：因此，動物體細胞核移植的難度明顯高于胚胎細胞核移植胚胎細胞核移植：體細胞核移植：細胞分化程度低，表現全能性相對容易細胞分化程度高，表現全能性十分困難5.體細胞核移植的困難原因（非人靈長類動物）①供體細胞的細胞核在去核卵母細胞中不能完全恢復其______前的功能狀態，這導致了__________________；胚胎發育率低②對非人靈長類動物_____進行操作的技術尚不完善。胚胎分化我國科學家經過多年努力，攻克了這些障礙，終于成功獲得了世界上首例體細胞克隆猴。展+評二、體細胞核移植的過程請閱讀課本P53，結合克隆高產奶牛的流程，分析、討論以下問題：《任務二》1.選擇卵母細胞作為核移植受體細胞的原因？采集的卵母細胞培養至什么時期？

2.卵母細胞為什么要“去核”？卵母細胞去核的方法？“去核”去的是什么？3.注入去核的卵母細胞的是整個供體細胞還是供體細胞的細胞核？為什么？4.誘導融合的方法？融合的結果？5.什么是重構胚？激活重構胚的方法？用這些方法處理重構胚的目的？6.該過程用到哪些技術手段？7.上述體細胞核移植技術培育的克隆動物，是對體細胞動物進行了100%的復制嗎？為什么？

思+議二、體細胞核移植的過程采集卵母細胞，在體外培養到MⅡ期高產奶牛(供體)1）為何選MⅡ期的卵母細胞？原因：①其細胞質內存在激發細胞核全能性表達的物質；②卵母細胞體積大，易操作；③卵母細胞內卵黃多，營養物質豐富。去核：顯微操作取體細胞去核的卵母細胞供體細胞2-1）卵母細胞為什么要“去核”？原因：保證核移植的胚胎或動物的核遺傳物質全部來自供體細胞(有重要價值的動物提供的體細胞)。（克隆高產奶牛）體細胞核移植過程：展+評二、體細胞核移植的過程目前動物細胞核移植技術中普遍使用的去核方法是顯微操作法，也有人采用梯度離心、紫外線短時間照射和化學物質處理等方法。這些方法時在沒有穿透卵母細胞透明帶的情況下去核或使其中的DNA變性。相關信息P54

2-3）“去核”去的是什么？紡錘體-染色體復合物展+評二、體細胞核移植的過程去核的卵母細胞供體細胞將供體細胞注入去核的卵母細胞的透明帶3）注入去核的卵母細胞的是整個供體細胞還是供體細胞的細胞核？為什么？電融合法(目的？)5-1）什么是重構胚？重構胚是指人工重新構建的胚胎，具有發育成完整個體的能力。激活方法：①物理方法；

②化學方法重構胚早期胚胎（克隆高產奶牛）體細胞核移植過程：展+評最初是"細胞核"，也是"核移植"這一名詞的含義和來源。后來直接將供體細胞注入去核卵母細胞的透明帶內，再用病毒介導或電脈沖等方法使其融合。優點∶對卵母細胞損傷較小，保證供體細胞的細胞核不被破壞，操作方便。二、體細胞核移植的過程去核的卵母細胞供體細胞將供體細胞注入去核的卵母細胞的透明帶電融合法激活方法：①物理方法；

②化學方法重構胚早期胚胎（克隆高產奶牛）體細胞核移植過程：5-2）激活重構胚方法？用物理或化學方法（電刺激、Ca2+載體、乙醇和蛋白酶合成抑制劑等）激活重構胚5-3）激活重構胚目的是？目的：激活重構胚，使其完成細胞分裂和發育過程。展+評二、體細胞核移植的過程(代孕)母牛體內生出與供體奶牛遺傳物質基本相同的犢牛動物體細胞核移植技術證明了？（原理）該技術證明了：已分化的動物體細胞的細胞核具有全能性。克隆動物早期胚胎（克隆高產奶牛）體細胞核移植過程：7）上述體細胞核移植技術培育的克隆動物，是對體細胞動物進行了100%的復制嗎？為什么？展+評①克隆動物核DNA來自供體動物的細胞核，但質DNA同時來自供體細胞和卵母細胞；③克隆動物的性狀會受環境影響。②克隆動物發育過程中可能發生突變。采集卵母細胞，在體外培養到MⅡ期從供體高產奶牛身上取體細胞顯微操作去核對體細胞進行培養去核的卵母細胞供體細胞電融合法將供體細胞注入去核的卵母細胞重構胚早期胚胎將胚胎移入受體（代孕）母牛體內生出與供體奶牛遺傳物質基本相同的犢牛早期胚胎培養動物細胞培養胚胎移植細胞核移植動物細胞融合動物細胞核移植技術細胞核移植動物細胞培養細胞融合體細胞核移植用到的技術早期胚胎培養胚胎移植二、體細胞核移植的過程體細胞核移植知識歸納激活重構胚使其完成

細胞分裂和發育過程

體細胞核移植技術與誘導iPS細胞相比，有什么相似或不同之處？請你預測它們應用前景的差異。治療性克隆vsiPS細胞治療病人取核去核卵母細胞重構胚胎各種細胞組織或器官誘導取出體細胞核移植移植成纖維細胞取出轉入相關因子iPS細胞各種細胞組織或器官胚胎干細胞取出誘導移植治療性克隆iPS細胞治療細胞發生轉化議+展討論：3.體細胞核移植技術與誘導iPS細胞相比，有什么相似或不同之處？請你預測它們應用前景的差異。體細胞核移植技術誘導iPS細胞體細胞核移植技術與iPS細胞都能生成干細胞，但過程完全不同生成帶有核供體細胞遺傳物質的胚胎干細胞在細胞中表達幾個關鍵基因，將細胞逆轉到類似胚胎干細胞的狀態對核供體細胞有較高要求，一般情況下體細胞的分化程度越高，它重新分化為干細胞的成功率就越低涉及采集卵母細胞、去核、融合等復雜的操作誘導成為iPS細胞的細胞來源相對廣一些，研究表明成纖維細胞、B淋巴細胞、脂肪干細胞等都可以誘導成為iPS細胞流程相對簡單，可能更適合用于生產實踐目前科學家還在研究由這兩項技術生產的干細胞在基因表達、DNA甲基化等方面的差異，這些研究成果也將直接影響它們今后的應用。三、體細胞核移植技術的應用前景及存在的問題1.應用前景體細胞核移植在畜牧業、醫藥衛生以及其他領域有著廣泛的應用前景。加速家畜遺傳改良進程、促進優良畜群繁育在畜牧生產中（1）展+評三、體細胞核移植技術的應用前景及存在的問題①通過建立轉基因體細胞系，再利用體細胞核移植技術培育的轉基因克隆動物可以作為生物反應器，生產許多珍貴的醫用蛋白；乳腺生物反應器換成核移植過程相關細胞在醫藥衛生領域（2）展+評三、體細胞核移植技術的應用前景及存在的問題②在治療人類疾病時，轉基因克隆動物的細胞、組織或器官可以作為異種移植的供體；③以患者作為供體培育的人核移植胚胎干細胞，經過誘導分化能形成相應的細胞、組織或器官，將它們一直給患者時可以避免免疫排斥反應。在醫藥衛生領域（2）展+評三、體細胞核移植技術的應用前景及存在的問題①研究克隆動物可以使人類更深入地了解胚胎發育及衰老過程；②克隆一批遺傳背景相同的動物，可以通過它們之間的對比來分析致病基因；③克隆特定疾病模型的動物，還能為研究該疾病的致病機制和開發相應的藥物提供幫助。在科研領域（3）展+評三、體細胞核移植技術的應用前景及存在的問題在保護瀕危物種方面（4）黑草黃弄蝶白鰭豚金絲猴該技術有望增加瀕危物種的存活數量。展+評三、體細胞核移植技術的應用前景及存在的問題2.存在的問題韋爾穆特與克隆羊多莉克隆羊多莉真身標本（1）成功率低：克隆胚胎移植成功率非常低，各個技術環節有待進一步改進。許多克隆動物表現出遺傳和生理缺陷，如體型過大、異常肥胖、發育困難、臟器缺陷、免疫缺陷等。需要與發育生物學、細胞生物學和分子遺傳學等學科更深層次的理論研究相結合；（3）健康問題：（2）理論研究較為滯后：“多莉”存活不足7年，遠低于平均壽命展+評用物理或化學方法激活重構胚，使其完成細胞分裂和發育本節小結理論基礎動物體細胞核的全能性胚胎細胞核移植原理：類型：體細胞核移植采集卵母細胞，在體外培養到MⅡ期從供體高產奶牛身上取體細胞顯微操作去核對體細胞進行培養去核的卵母細胞供體細胞電融合法將供體細胞注入去核的卵母細胞重構胚早期胚胎將胚胎移入受體（代孕）母牛體內生出與供體奶牛遺傳物質基本相同的犢牛動物體細胞核移植技術和克隆動物理論基礎應用前景畜牧業保護瀕危物種醫藥衛生愿有前程可奔赴，亦有歲月可回首體細胞核移植知識小結1.采集的卵母細胞應培養至_____________________2.選擇MⅡ期卵母細胞的原因①____________________________________②_________________________

③_________________________3.卵母細胞去核的方法_________________4.“去核”去的是什么？________________________5.去核的原因________________________________________________________MⅡ期（減數分裂Ⅱ中期）含有促進細胞核表現全能性的物質細胞體積大，易于操作主要顯微操作（去核）法紡錘體-染色體復合物卵母細胞內卵黃多，營養物質豐富使核移植得到的胚胎或動物核內遺傳物質全部來自有重要利用價值的動物體細胞核移植知識小結6.供體細胞注入卵母細胞的優點_____________________________7.誘導融合的方法____________________8.融合的結果______________________________9.重構胚概念_________________________________________注意：實質是直接將供體細胞注入去核卵母細胞的透明帶內電融合法供體核進入卵母細胞，形成重構胚人工重新構建的胚胎，具有發育成完整個體的能力對卵母細胞損傷較小，保證供體細胞的細胞核不被破壞，操作方便。體細胞核移植知識小結10.激活重構胚的方法①物理方法_______________________②化學方法___________________________________11.以上方法處理重構胚的目的_____________________________________________________12.實驗結論__________________________________________________電刺激Ca2+載體、乙醇和蛋白酶合成抑制劑激活重構胚，使其完成細胞分裂和發育過程證明了動物已分化的體細胞的細胞核具有全能性課堂小結1.細胞核移植的原理動物體細胞核移植的原理是細胞核的全能性，而不是動物細胞的全能性。因為動物體細胞的全能性受到限制，不能經培養直接發育成完整個體，所以用體細胞核移植技術能夠得到克隆動物，說明動物體細胞的細胞核具有全能性。練一練P55【練習與應用】一、概念檢測1.假設世界上最后一頭野驢剛死亡，以下使它“復生”的方案中可行的是()

A.將野驢的基因導入家驢的受精卵中，培育出新個體B.將野驢的體細胞取出，利用組織培養培育出新個體C.將野驢的體細胞兩兩融合，再經組織培養培育出新個體D.將野驢的體細胞核移植到家驢的去核卵母細胞中，經孕育培育出新個體D練一練P55【練習與應用】A.該技術涉及動物細胞培養、細胞核移植等操作B.該技術可避免母親的線粒體遺傳病基因傳遞給后代C.卵母細胞捐獻者攜帶的紅綠色盲基因能夠遺傳給“三親嬰兒”D.“三親嬰兒”同時擁有自己父親、母親及卵母細胞捐獻者的部分基因2.2017年，某國批準了首例使用細胞核移植技術培育“三親嬰兒”的申請。其培育過程可選用如下技術路線。據圖分析下列敘述錯誤的是()C練一練P55【練習與應用】1.

大熊貓是我國的國寶。盡管我國政府采取了許多保護措施，但由于大熊貓的繁殖能力低，幼仔成活率也低，它的數量仍然非常少。有科學家嘗試采用體細胞核移植技術來克隆大熊貓。請你結合本節所學內容并搜集相關資料了解這方面的研究進展。也有人不贊成進行克隆大熊貓的研究，認為保護大熊貓的最好措施就是保護現有大熊貓及其生存環境,對此你有什么看法?是否贊成克隆大熊貓，學生的回答只要言之有理，就應該予以支持，并且還應該讓他們認識到無論贊成還是反對克隆大熊貓的研究，都應該保護好大熊貓的生存環境，否則即使成功克隆了大熊貓，它們沒有適宜的生存環境，也可能走向滅絕。二.拓展應用練一練P55【練習與應用】2.

2003年，世界上第一只用體細胞克隆的動物——多莉，因患有嚴重的肺部疾病被實施了安樂死。它只活了7歲，而普通綿羊的平均壽命在12歲左右。多莉的死亡引發了關于克隆動物是否早衰的爭論。一些研究者認為，克隆動物的端粒比較短，基因表達不正常，早衰是一種必然現象。另一些研究者則認為，克隆動物的遺傳物質是正常的，目前發現的早衰跡象是在克隆過程中的一些技術問題造成的;或者克隆動物在發育過程中出現了變異，早衰只是偶然現象。請你搜集資料，尋找支持各方觀點的