備案號：19164-2006DB北京市地方標準DB11/T373—2006pangasiussutchi2006-07-25發布2006-10-01實施北京市質量技術監督局發布IDB11/T373—2006為保護該品種優良的經濟性狀及保存其種質資源，避免在推廣中混雜，特制訂本標準，作為該品種的種質檢測和種質選育依據。本標準的附錄A為規范性附錄。本標準由北京市農業局提出并歸口。本標準由北京市水產技術推廣站起草。本標準主要起草人：楊華蓮、潘志、張黎、柏文東、馬立鳴、張孟才。1DB11/T373—2006本標準規定了蘇氏圓腹魚芒（pangasiussutchi）的主要生物學特性、主要營養成分、細胞遺傳學特性、生化遺傳學特性、分子遺傳學特性，以及檢測方法。2規范性引用文件下列文件中的條款通過本標準的引用而成為本標準的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所有的修改單（不包括勘誤的內容）或修訂版均不適用于本標準，然而，鼓勵根據本標準達成協議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本標準。GB/T5009.3-2003食品中水分的測定GB/T5009.4-2003食品中灰分的測定GB/T5009.5-2003食品中蛋白質的測定GB/T5009.6-2003食品中脂肪的測定GB17718-1999鳙GB/T18654.2養殖魚類種質檢驗第2部分抽樣方法GB/T18654.12-2002養殖魚類種質檢驗3名稱與分類3.1學名3.2分類位置4主要生物學特性4.1外部形態特征4.1.1外形體長，側扁，背部隆起，具脂鰭。頭部扁平略呈圓錐狀，吻短，口亞下位。鰓膜與頰部不相連，兩眼位于近腹面部。有須2對，1對下頜須，1對口角須。臀鰭基長，從肛門后直達近尾鰭，脂鰭與臀鰭后緣相對。背鰭、胸鰭硬棘堅硬。尾鰭叉形。體表無鱗。體色肉白色，外形似鯊魚。具前頜齒、下頜齒、腭骨齒及上咽齒，均為密布細小銳利齒。蘇氏圓腹魚芒外形圖見圖1。2DB11/T373—20064.1.2可數性狀4.1.2.1 4.1.2.2 4.1.2.3背鰭6-8。臀鰭鰓耙數左側第一鰓弓鰓耙數：20-23。4.1.3可量性狀表1不同年齡組可量性狀測量數值與比值4.26±0.174.26±0.338.80±0.58頭長/眼間距尾柄長/尾柄高4.2內部構造特征4.2.1鰾一室，鰾壁較厚，呈錐狀,近與腹腔等長。4.2.2胃較短小，“V”形。4.2.3腸長度與體長相近，接近1:1。4.2.4脊椎骨總數36-38。4.2.5腹膜3DB11/T373—20064.3生長與繁殖4.3.1生長表2不同年齡組魚的體長、體重測量數值696.00±392.004732.00±392.004.3.2繁殖4.3.3性成熟年齡人工飼養條件下，雌性4年，雄性3年。4.3.4性成熟個體性腺每年成熟和產卵次數成熟1次，產卵1次。4.3.5繁殖季節自然條件下每年6月-9月，人工控制條件下全年可繁殖。4.3.6懷卵量每尾雌親魚懷卵量約（30-70）萬粒。不同年齡組個體的懷卵量見表3。表3不同年齡組個體懷卵量3454732.00±392.004.4生態特征4.4.1食性4DB11/T373—20064.4.2溫度生存水溫為15℃~35℃,生活水溫為20℃~30℃,最適生長水溫為24℃~28℃,繁殖水溫為24℃~30℃。5肌肉營養成分5.1主要營養成分表4肌肉（后肢基部）主要營養成分檢測項目營養指標（%）粗蛋白粗脂肪灰分水分5.2氨基酸含量表5肌肉（后肢基部）主要營養成分檢測項目氨基酸含量（%）氨基酸（以鮮基絲氨酸谷氨酸甘氨酸纈氨酸異亮氨酸亮氨酸苯丙氨酸賴氨酸精氨酸脯氨酸6細胞遺傳學特性6.1體細胞染色體2倍數2n=586.2核型公式24m+12sm+12st+10tNF=946.3染色體組型DB11/T373—2006圖3染色體中期分裂相圖4染色體組型7生化遺傳學特性肝臟的乳酸脫氫酶（LDH）同工酶有5條譜帶，見圖5。肝臟的酯酶（EST）同工酶有3個基因座位，有3條譜帶，見圖6。+-圖5肝臟乳酸脫氫酶（LDH）同工酶圖譜Est-3+Est-2+Est-1-O圖6肝臟的酯酶（EST）同工酶電泳圖譜8分子遺傳學特性用15個RAPD（隨機擴增多態性DNA技術，又稱任意引物PCR）引物對其基因組DNA進行分析，確認引物S19的分析結果能夠反應其基因組的多態性特征。引物S19序列：tgcccgtcgt。6DB11/T373—2006C：空白樣品M：分子量標準9檢測方法9.1生物學性狀測定參照GB17718-1999鳙的生物學測定方法。9.2肌肉營養成分測定9.2.1樣品制備取活體后肢基部肌肉，于105℃烘干，粉碎。肌肉各成分測定按照GB/T5009.3、GB/T5009.4、GB/T5009.5、GB/T5009.6規定的方法進行。9.2.2氨基酸使用氨基酸自動分析儀進行測定。9.3細胞遺傳學特性分析根據GB/T18654.12的相關規定進行。9.4生化遺傳學特性分析9.4.1樣品制備樣品加3%輔酶I液勻漿，低溫離心，至上清液澄清。整個制備過程均在低溫下操作。9.4.2電泳分析使用水平淀粉凝膠電泳儀。淀粉膠濃度為10%，酯酶（EST）電泳緩沖液為三羥甲基氨基甲烷（Tris）-硼酸-乙二胺四乙酸四鈉鹽；乳酸脫氫酶（LDH）電泳緩沖液為甲基氨基甲烷（Tris）-檸檬酸，pH值7.0。將10%濃度水解淀粉煮好后倒入制膠模內，待凝固后，切一橫裂縫，用濾紙片吸取樣品的上清液插入裂縫中。電泳電壓為250V，電泳8h-10h，電泳恒溫4℃,電泳后橫切成0.2cm左右的薄片，浸入染色液中保溫染色。同工酶染色液配方見附錄A。9.4.3結果判定將測定結果對照圖5、6譜帶確定該種同工酶的編碼座位數和多態座位的基因數。9.5分子遺傳學特性分析9.5.1基因組DNA的提取純化取肌肉剪碎用組織列解液（0.5molEDTA，PH值8.0；200μg/mLProteinnseK；0.5%Snrcosyl）于55℃消化過夜，次日用酚、氯仿、異戊醇（24：24：1）抽提三次，RnaseA消化去除RNA后再抽提一次，然后用2150mmol/LTris.HCl(pH8.0)、10mmolEDTA（pH8.0），透析至OD270＜0.05，檢測DNA濃度，置4℃保存備用。7DB11/T373—20069.5.2RAPD引物及擴增條件用PE-9600型PCR擴增儀，RAPD擴50mmol/LKCl，2.0mmol/LMgCl2，0.001%明膠；Dapt.dGTP、Dctp，dTTP各為0.1mmol/L:引物15μg，基因組DNA20μg，1單位Tag聚合酶。于93.5℃變性1min，36℃退火1min，72℃延伸2min，計45個循環，循環結束后延伸5min，擴增產物用1.5%瓊脂糖凝膠電泳檢測。9.5.3瓊脂糖凝膠電泳凝膠濃度為1.5%的瓊脂糖，膠中含0.5g/mL溴化乙錠。電泳緩沖液為TBE，電泳在室溫下進行，電壓為15V/cm，電泳時間為16h。電泳畢在紫外燈下觀察拍照。10檢測規則10.1檢測分類檢測分為鑒定檢測和質量一致性檢測。10.2檢測項目鑒定檢測項目包括外部形態特征、可量性狀、可數性狀。質量一致性檢測項目包括細胞遺傳學特性、生化遺傳學特性、分子遺傳學特性。樣品龜的抽樣按GB/T1