ICS67.060CCSB22DB36糧食中黃曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮、脫DeterminationofaflatoxinB1,zearalenoneanddeoxynivalenolingrain——Quantumdotmicrospherelateralflowi江西省市場監督管理局發布IDB36/Z003—2022 12規范性引用文件 13術語和定義 14原理 15試劑和材料 16儀器和設備 27試樣制備 28測定步驟 29結果表述 3 3DB36/Z003—2022本文件按照GB/T1.1-2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結構和起草規則》的規定起請注意本文件的某些內容可能涉及專利。本文件的發布機構不承擔識別專利的責任。本文件由江西省市場監督管理局提出并歸口。本文件起草單位：南昌大學、江西省市場監督管理局、江西省檢驗檢測認證總院、江西維邦生物科技有限公司。本文件主要起草人：賴衛華、李越凡、余頤、劉文娟、羅凱、張威、郭平、熊華亮、熊勇華、陳媛、李響敏、彭娟、黃小林、唐麗君、肖小月、吳夢云、唐艷艷、李雯、蔣峰華。DB36/Z003—20221食中黃曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮、脫氧雪腐鐮刀菌烯醇的檢測量子點微球熒光免疫層析法本文件規定了糧食中黃曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮和脫氧雪腐鐮刀菌烯醇的量子點微球熒光免疫層析檢測方法。本文件適用于大米、玉米、小麥中黃曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮和脫氧雪腐鐮刀菌烯醇的快速檢測。本方法檢測黃曲霉毒素B1的檢出限為1μg/kg，定量限為2μg/kg；檢測玉米赤霉烯酮的檢出限為10μg/kg，定量限為20μg/kg；檢測脫氧雪腐鐮刀菌烯醇的檢出限為50μg/kg，定量限為150μg/kg。2規范性引用文件下列文件對于本文件的應用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB5009.22食品安全國家標準食品中黃曲霉毒素B族和G族的測定GB5009.111食品安全國家標準食品中脫氧雪腐鐮刀菌烯醇及其乙?；苌锏臏y定GB5009.209食品安全國家標準食品中玉米赤霉烯酮的測定GB/T5491糧食、油料檢驗扦樣、分樣法GB/T6682分析實驗室用水規格和試驗方法3術語和定義本文件沒有需要界定的術語和定義。4原理本方法以量子點微球為熒光標記物，基于競爭抑制免疫層析技術原理，通過熒光免疫分析儀進行數據讀取和分析，根據已設定的標準曲線計算樣品中待測物質的含量，對黃曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮和脫氧雪腐鐮刀菌烯醇進行定量檢測。5試劑和材料除另有說明外，本方法所用試劑均為分析純，水為GB/T6682規定的二級水。5.1乙腈（C2H3N）。5.2氯化鈉（NaCl）。5.3氯化鉀（KCl）。5.4磷酸氫二鈉（Na2HPO4）。DB36/Z003—202225.5磷酸二氫鉀（KH2PO4）。5.6試樣提取液（84%乙腈-水溶液）：吸取84mL乙腈（5.1），用水定容至100mL，混勻。5.7試樣稀釋液：分別稱取氯化鈉（5.2）8g、氯化鉀（5.3）0.2g5.8磷酸氫二鈉（5.4）1.44g、磷酸二氫鉀（5.5）0.2g于1000mL燒杯中，加水充分攪拌溶解后定容至1000mL。6儀器和設備6.1分析天平：感量為0.01g。6.2微量移液器：量程為20μL～200μL、100μL～1000μL和1mL～10mL。6.3旋渦混合器：轉速≥2500r/min。6.4恒溫孵育器：設定溫度為37℃,誤差不超過±1℃。6.5熒光免疫分析儀：激發波長為360nm±5nm，發射波長為610nm±5nm。6.6離心機：轉速≥4000r/min。6.7離心管：1.5mL和50mL。6.8高速粉碎機：轉速≥30000r/min6.9分樣篩：20目。6.10黃曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮和脫氧雪腐鐮刀菌烯醇量子點微球免疫層析包裝盒：含量子點微球免疫層析試紙條和標準曲線內置卡（ID卡），ID卡內設對應批次標準曲線。7試樣制備7.1分樣和粉碎將原始樣品充分混勻，按照GB/T5491方法中的四分樣方法進行分樣，用高速粉碎機（6.8）粉碎后過20目分樣篩。7.2試樣前處理7.2.1稱取5g±0.05g粉碎試樣于50mL離心管中，加入25mL樣品提取液（5.6漩渦震蕩混勻2min，4000rpm離心2min，如無離心機可靜置2min。7.2.2檢測黃曲霉毒素B1：取50μL離心后上清液加入950μL試樣稀釋液（5.7）混勻后用于檢測。7.2.3檢測玉米赤霉烯酮：取50μL離心后上清液加入700μL試樣稀釋液（5.7）混勻后用于檢測。7.2.4檢測脫氧雪腐鐮刀菌烯醇：取50μL離心后上清液加入700μL試樣稀釋液（5.7）混勻后用于檢測。注：不同廠家量子點微球免疫層析試紙條所用的樣品前處理方法可能不同，應按照產品使用說明中規定方法進8測定步驟8.1測試前打開熒光免疫分析儀（6.5），確認包裝盒中的ID卡與產品批號是否匹配，插入ID卡，在儀器測試界面點擊“讀卡/讀項目”，界面出現“讀取完成”，點擊“確認”即可使用。8.2將恒溫孵育器（6.4）開機，待溫度升至37℃即可使用。8.3從密封包裝袋中取出量子點微球免疫層析試紙條，在30min內使用。DB36/Z003—202238.4將檢測卡平放，用微量移液器吸取90μL稀釋后的待測液于量子點微球免疫層析試紙條的加樣孔（S）中，在恒溫孵育器中37℃孵育反應10min。8.5反應時間結束后立即將量子點微球免疫層析試紙條插入熒光免疫分析儀中，點擊儀器界面的“測試”，儀器會自動給出定量測試結果，15min內測試，結果有效。注：不同廠家熒光免疫分析儀所用儀器界面設置可能不同，應按照儀器使用說明中規定方法進行。9結果表述樣品中黃曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮和脫氧雪腐鐮刀菌烯醇的含量由熒光免疫分析儀自動計算并顯示，單位為微克/千克(μg/kg）。10.1注意事項：使用前請仔細閱讀說明書，儀器的具體操作詳見儀器操作說明書；檢