22Technicalcodeofexperimentalminkembryocollectionandtransfer2024-12-31發布DB22/T3680—2024I請注意本文件中的某些內容可能涉及專利。本文件的本文件主要起草人：刁云飛、李曉霞、許保增DB22/T3680—20241實驗用水貂胚胎采集及移植技術規程沖胚液embryoflushingm用于采集胚胎時，將胚胎從輸卵管或子宮角中沖洗出體外并提供保護的化胚胎保存液embryopreservationme用于暫時保存采集到的胚胎，提供營養、保護的4技術流程沖胚、胚胎收集、胚胎質量鑒定、胚胎移植。實驗用水貂胚胎采集及移植技術流程見圖2(見第5章)(見第7章)(見第8章)(見第9章)(見第10章)(見第11章)(見第6章)(見9.1)(見9.2)(見9.3)體況健康良好，生殖機能正常，且處于發情期。6.1.2水貂手術前應禁食6h~12h。丸及輸精管暴露。36.2.3將睪丸放回陰囊內，使用可吸收外科縫合線將切口進行縫合，用5%碘酊消毒。將供體水貂與種公貂同籠配種，交配完成后及時將供體水貂放回原籠內。每天1次，連續交配2d。8.1.1藥品及試劑包括麻醉藥、蘇醒藥，器材的選擇參見表A.1。8.1.2供體水貂第二次交配后第2d進行輸卵管采集。8.1.3術前禁食6h~12h。8.1.4供體水貂麻醉按6.1.3執行。8.1.5對麻醉后的水貂腹中線倒數第二乳頭處進行備皮，先用5%碘酊進行消毒，再用75%酒精脫碘。8.2.1在腹中線倒數第二乳頭處做一個2cm左右切口，將兩側子宮角、輸卵管、卵巢暴露，觀察左用5%碘酊消毒。9.1沖胚將8.2.1采集到的輸卵管放在平皿里進行沖胚。使用無針頭注射器吸入5mL沖胚液(沖胚液配制方法參見表B.1),安裝沖胚針從輸卵管傘口處插入，用鑷子將包裹沖胚針處的輸卵管夾緊，將5mL在體式顯微鏡下收集沖胚液中的胚胎。將收集到的胚胎放入胚胎保存液中(胚見表B.2)。在無菌操作室內，將存放胚胎的平皿放在37℃恒溫板上，體視顯微鏡下檢查、對胚胎質量進行分級、鑒定胚胎發育階段并記錄，記錄表見C.1。放入38.5℃、5%CO?濃度的飽和濕度培養箱中保存DB22/T3680—202449.3.2胚胎質量分級9.3.2.2胚胎可分為A、B、C、D四個等級，A級、Ba)A級：胚胎發育階段與胚齡一致，輪廓清晰，卵周隙適中，若2細胞期則分裂球大小均勻、c)C級：胚胎發育階段與胚齡不太一致，輪廓尚清晰，細胞球收縮較大或膨脹過大，卵周隙大d)D級：胚胎發育階段與胚齡不一致，輪廓不清晰，細胞膜破10.1.2將與供體水貂同期發情的受體水貂與結扎公貂同籠交配刺激排卵，10.1.3受體水貂麻醉操作方法按6.1.3執行，備皮、消后將胚胎移植針緩慢拔出。按照同樣方法將5枚胚胎移植入另一側輸DB22/T3680—20245公貂結扎、供體輸卵管采集、胚胎收集、受體胚胎移植----針口外徑不能大于1.5mm，內徑不能小于DB22/T3680—20246B.1沖胚液的推薦配方及配制方法見表B.2胚胎保存液的推薦配方級配制方法見表DB22/T36