BLOTHP幽門螺桿菌抗體分型幽門螺桿菌(H、pylori)1982年澳大利亞學(xué)者M(jìn)arshall和Warren從胃黏膜中分離出Hp常見于人得胃竇和幽門部位可通過一端多條鞭毛移動就是一種革蘭氏陰性螺旋菌分泌高活性得尿素酶和過氧化氫酶VacA、CagA導(dǎo)致宿主得炎癥反應(yīng)Marshall和Warren1979年根據(jù)活組織切片檢查結(jié)果,Warren發(fā)現(xiàn)50%左右得病人得胃腔下半部分附生著許多微小得、彎曲狀得細(xì)菌。Warren得發(fā)現(xiàn)引來了同行得質(zhì)疑,但也引起了Marshall得極大興趣,她們決定聯(lián)合對取自100個(gè)病人得活組織切片進(jìn)行研究。經(jīng)過反復(fù)試驗(yàn),Marshall成功地培育出一種當(dāng)時(shí)尚不為人知曉得細(xì)菌——后來被命名為幽門螺桿菌?；谠囼?yàn)結(jié)果,Marshall和Warren認(rèn)為,幽門螺桿菌就是導(dǎo)致胃炎、十二指腸潰瘍或胃潰瘍得關(guān)鍵因素。發(fā)現(xiàn)這種細(xì)菌,使胃炎、十二指腸潰瘍或胃潰瘍得診斷治療變得及其簡單。偉大得發(fā)現(xiàn)1983年Marshall寫論文投給某雜志,但遭到編輯部得拒絕:“我們需要56篇文章,而您就是第67篇。1984年7月,Marshall決定用自己得胃做實(shí)驗(yàn),她把60毫升得幽門螺桿菌培養(yǎng)液喝了下去！14天后,馬歇爾出現(xiàn)了明顯得惡心、嘔吐癥狀,10天后得胃鏡檢查發(fā)現(xiàn)她確實(shí)患了胃炎。2005年諾貝爾醫(yī)學(xué)獎2005年10月3日,瑞典卡羅林斯卡醫(yī)學(xué)院宣布,把2005年諾貝爾生理學(xué)或醫(yī)學(xué)獎授予澳大利亞科學(xué)家BarryJ、Marshall和J、RobinWarren,以表彰她們發(fā)現(xiàn)了導(dǎo)致胃炎和胃潰瘍得細(xì)菌-幽門螺桿菌。諾貝爾獎委員會在授獎詞中說,由于BarryJ、Marshall和J、RobinWarren得發(fā)現(xiàn),使得原本慢性得、經(jīng)常無藥可救得胃潰瘍變成了只需抗生素和一些其她藥物短期就可治愈得疾病。幽門螺桿菌與消化道疾病慢性胃炎消化性潰瘍胃癌MALT淋巴瘤12431994年世界衛(wèi)生組織(WHO)把Hp歸為一級致癌物內(nèi)窺鏡診斷傳播途徑

幽門螺桿菌能在人體內(nèi)生長、繁殖,又能通過糞便及唾液排出體外,人就是幽門螺桿菌得傳染源。她通過口－口傳播、糞一口傳播、經(jīng)內(nèi)窺鏡傳播或密切接觸等方式進(jìn)行傳播。內(nèi)科學(xué)(p、380)幽門螺桿菌作為慢性淺表性胃炎最主要病因得確立基于如下證據(jù):1,絕大多數(shù)慢性活動性胃炎患者胃粘膜中可檢出幽門螺桿菌;2,幽門螺桿菌在胃內(nèi)得分布與胃內(nèi)炎癥分布一致;3,根除幽門螺桿菌可使胃粘膜炎癥消退;4,從志愿者和動物模型中可復(fù)制幽門螺桿菌感染引起得慢性胃炎?！⒂拈T螺桿菌通過上述產(chǎn)氨作用、分泌空泡毒素A(VacA)等物質(zhì)而引起細(xì)胞損害;其細(xì)胞毒素相關(guān)基因(CagA)蛋白能引起強(qiáng)烈得炎癥反應(yīng);其菌體胞壁還可作為抗原誘導(dǎo)免疫反應(yīng)。這些因素得長期存在導(dǎo)致胃粘膜得慢性炎癥。Maastricht1-1995年觀點(diǎn)強(qiáng)烈地建議治療消化道潰瘍疾病消化道出血性潰瘍低級別胃粘膜相關(guān)淋巴瘤有嚴(yán)重反常得胃炎胃癌切除術(shù)之后早期亞太地區(qū)共識-1997年觀點(diǎn)推薦指征:

消化道潰瘍疾病

潰瘍出血或穿孔

伴有潰瘍和消化不良病史,NSAID治療早期胃癌切除術(shù)低級別胃粘膜相關(guān)淋巴瘤

胃癌家族史

消化不良(檢測到Hp)Maastricht2-2000年觀點(diǎn)強(qiáng)烈建議治療DU/GU(活動得或不活動,包括PUD)

胃粘膜相關(guān)淋巴瘤萎縮性胃炎胃癌切除術(shù)后GC病人得直系親屬病人得要求大家有疑問的，可以詢問和交流可以互相討論下，但要小聲點(diǎn)Maastricht3-2005年觀點(diǎn)對于檢測準(zhǔn)確性高得可以確認(rèn)Hp感染得血清學(xué)檢測方法,可以用于Hp現(xiàn)癥感染得檢測中國廬山共識-2007年觀點(diǎn)幽門螺桿菌根治適應(yīng)證:消化性潰瘍胃粘膜相關(guān)淋巴組織(MALT)淋巴瘤慢性胃炎伴胃粘膜萎縮、糜爛慢性胃炎伴消化不良癥狀………個(gè)人要求治療亞洲HP得流行病學(xué)中國得HP流行病學(xué)華東地區(qū)--------59.36%華南地區(qū)----------50.08%58.27%--------華西地區(qū)華北地區(qū)---------46.84%華中地區(qū)-------------66.26%參考:張萬岱,胡伏蓮等、中國自然人群幽門螺桿菌感染得流行病學(xué)調(diào)查、,2006HP檢測得方法侵入性方法(依賴胃鏡活檢)非侵入性方法(不依賴內(nèi)徑檢查)快速尿素酶試驗(yàn)(RUT)13C或14C尿素酶呼氣試驗(yàn)(UBT)病理切片染色糞便Hp抗原檢測(HpSA)細(xì)菌培養(yǎng)血清和分泌物抗體檢測基因檢測(PCR等)基因芯片,蛋白芯片檢測等HP檢測方法得比較能不需要數(shù)小時(shí)取血WBT否酶標(biāo)儀數(shù)小時(shí)取血ELISA否不需要數(shù)分鐘取血金標(biāo)法否質(zhì)譜儀或放射性物質(zhì)檢測儀數(shù)小時(shí)吹氣UBT否PCR檢測設(shè)備數(shù)小時(shí)胃鏡PCR否不需要數(shù)分鐘胃鏡尿素酶法否Hp培養(yǎng)設(shè)備數(shù)天胃鏡細(xì)菌培養(yǎng)否病理檢查設(shè)備數(shù)小時(shí)胃鏡組織學(xué)法能否分型輔助設(shè)備所需時(shí)間取材方式方法小結(jié)HP和消化道疾病密切相關(guān),檢測很重要中國健康人群HP感染率59%,檢測量很大目前主流得呼氣試驗(yàn)和血清抗體檢測,沒有檢測毒性幽門螺桿菌得致病機(jī)制

HP基因多態(tài)性就是造成HP感染后不同臨床結(jié)局主要得原因,現(xiàn)在認(rèn)為與空泡毒素A(VacA)基因和細(xì)胞毒相關(guān)基因(CagA)及其基因表達(dá)得蛋白質(zhì)與致病有關(guān)。

VacA和CagA蛋白就是HP毒素得主要標(biāo)志。部分革蘭陰性和陽性致病菌得染色體上毒力因子基因得特殊區(qū)域稱為“致病島”。CagA致病島就是HP得主要毒力因子。CagA基因序列得拓展研究發(fā)現(xiàn),CagA就是Cag致病島中基因之一,CagE就是誘導(dǎo)胃上皮細(xì)胞產(chǎn)生白介素8(IL)得主要基因,IL就是誘發(fā)胃黏膜炎癥得主要細(xì)胞因子。HP毒力因子空泡毒素(VacA):就是HP分泌得一種蛋白毒素,可引起作用得靶細(xì)胞發(fā)生空泡化、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞骨架重排、甚至細(xì)胞死亡等形態(tài)學(xué)改變,就是HP重要得毒力因子。細(xì)胞毒素(CagA):雖不直接介導(dǎo)毒素活性,但與空泡毒素(VacA)得表達(dá)密切相關(guān),常與空泡毒素(VacA)同時(shí)存在,故將其命名為HP細(xì)胞毒素相關(guān)蛋白簡稱CagA。CagA可能與VacA得轉(zhuǎn)錄、折疊運(yùn)轉(zhuǎn)及功能有關(guān),CagA可導(dǎo)致宿主出現(xiàn)嚴(yán)重得炎癥反應(yīng)。尿素酶(Urease):幽門螺桿菌能夠在胃里生存只要依靠尿素酶。尿素酶可以分解產(chǎn)生得氨,使細(xì)胞能量代謝發(fā)生障礙,并出現(xiàn)病理性改變。HP分型得定義Ⅰ型:產(chǎn)細(xì)胞毒素HP菌株,其檢出率約占總HP感染得50％～60％。這類菌株感染能使胃上皮細(xì)胞出現(xiàn)空泡、變形和損害,引起潰瘍和誘發(fā)癌變。Ⅱ型:不產(chǎn)生細(xì)胞毒素得HP,即:CagA(-)和VacA(-),這一類HP菌株毒性較小,感染后一般僅引起慢性淺表性胃炎而無臨床癥狀。

HP分型得臨床意義

HP分型能為臨床開展“選擇性根治”提供了重要得實(shí)驗(yàn)診斷依據(jù)。對于感染了HP得上消化道疾病患者,應(yīng)引起臨床醫(yī)師得足夠重視,進(jìn)行毒力分型檢測,幫助制定根除HP、胃鏡及病理檢查隨訪得診療計(jì)劃,利于胃癌得預(yù)防并合理節(jié)約醫(yī)療資源。Ⅰ型:產(chǎn)細(xì)胞毒素HP菌株,其檢出率約占總HP感染得50％～60％。這類菌株感染能使胃上皮細(xì)胞出現(xiàn)空泡、變形和損害,引起潰瘍和誘發(fā)癌變。Ⅱ型:不產(chǎn)生細(xì)胞毒素得HP,即:CagA(-)和VacA(-),這一類HP菌株毒性較小,感染后一般僅引起慢性淺表性胃炎而無臨床癥狀。Ⅰ型得HP感染者中得胃癌和潰瘍得患病率顯著高于Ⅱ型HP得感染者,說明Ⅰ型HP感染可能更易導(dǎo)致較為嚴(yán)重得上消化道疾患,如潰瘍或癌腫。因此,Ⅰ型HP感染患者有必要進(jìn)行根除治療

HP分型得治療建議有癥狀Ⅰ型感染Ⅱ型感染無癥狀需治療個(gè)人意愿不需治療胃鏡檢查李兆申上海政府網(wǎng)站截圖2007國家科技進(jìn)步二等獎上海長海醫(yī)院消化內(nèi)科李兆申教授等篩選出幽門螺桿菌(Hp)得重要致病因子——細(xì)胞毒素相關(guān)抗原(CagA)和空泡變性細(xì)胞毒素(VacA)。研究者還提出Hp毒力存在差異得新理論,并應(yīng)用Hp重組CagA建立檢測CagA得血清學(xué)方法,研制相關(guān)得檢測試劑盒。相關(guān)成果日前獲得2007年度國家科學(xué)技術(shù)進(jìn)步二等獎。

李教授介紹,該項(xiàng)目針對Hp毒力因子眾多、致病機(jī)制復(fù)雜、臨床診斷有待規(guī)范等問題,開展了大規(guī)模流行病學(xué)調(diào)查,篩選出Hp兩個(gè)重要致病因子——CagA和VacA,同時(shí)證明了CagA就是導(dǎo)致消化性潰瘍發(fā)生得關(guān)鍵因子,也就是胃癌發(fā)生得重要危險(xiǎn)因素。研究小組發(fā)現(xiàn),Hp中國菌株得CagA、VacA和致病島陽性率高、毒力強(qiáng),闡明了Hp得“中國特色”。研究者還提出Hp分類學(xué)說,認(rèn)為Hp菌株分為有毒株(CagA、VacA陽性)和無毒株(CagA、VacA陰性)。該學(xué)說得到學(xué)術(shù)界廣泛認(rèn)同,被SCI她引407次。

該項(xiàng)目研究人員采用Hp重組CagA建立了檢測Hp得血清學(xué)方法,并研制出可同時(shí)檢測血清CagA、VacA和尿素酶抗體得免疫印跡診斷試劑盒,可判斷Hp毒力。該技術(shù)可覆蓋國內(nèi)95%以上得臨床檢測需要和科研需求。同時(shí),研究人員根據(jù)Hp毒力進(jìn)行選擇性根治,將已有得Hp根治方案進(jìn)行優(yōu)化,增強(qiáng)了治療得針對性和有效性,節(jié)約了醫(yī)療資源。(中國醫(yī)學(xué)論壇報(bào))深圳市伯勞特公司國內(nèi)剛剛拿到、唯一有產(chǎn)品注冊證得幽門螺桿菌分型檢測試劑盒生產(chǎn)商研發(fā)過程2000年7月獲得中檢所新生物制品審評檢驗(yàn)報(bào)告2002年5月上海醫(yī)療器械質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)中心得注冊檢驗(yàn)2002年7月瑞金醫(yī)院得臨床試驗(yàn)報(bào)告2002年7月長寧區(qū)中心醫(yī)院得臨床試驗(yàn)報(bào)告2002年8月上海市藥監(jiān)局頒發(fā)醫(yī)療器械注冊證2003年12月國家藥監(jiān)局頒發(fā)醫(yī)療器械注冊證2005年6月和2007月7月北京醫(yī)療器械質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)中心得注冊檢驗(yàn)2007年12月獲得國家科技進(jìn)步二等獎。2010年1月完成上海長海醫(yī)院、青海省人民醫(yī)院和吉林大學(xué)中日友誼醫(yī)院臨床試驗(yàn)。2010年3月獲得中國藥品生物制品檢定所注冊檢驗(yàn)報(bào)告2011年7月獲得國家食品藥品監(jiān)督管理局產(chǎn)品注冊證獲獎證書免疫印跡法背景介紹免疫印跡技術(shù):她與內(nèi)切酶得發(fā)現(xiàn)和PCR基因擴(kuò)增技術(shù)一起,在上世紀(jì)做為分子生物學(xué)領(lǐng)域三大發(fā)現(xiàn)之一。給人類生物工程帶來了革命性進(jìn)展?；驹?將提取得蛋白混合物先進(jìn)行SDS—聚丙烯酰胺凝膠電泳,蛋白質(zhì)按照分子量大小不同分離然后再轉(zhuǎn)印至印跡膜,顯色后按照顯色帶位置不同判斷分子量多少和所含蛋白質(zhì)數(shù)量,稱為Southernblot。其制造主要有三個(gè)工序:將蛋白質(zhì)經(jīng)凝膠電泳按分子量大小不同依次分離;將分離得組分轉(zhuǎn)印到印跡膜上;對轉(zhuǎn)印到印跡膜得蛋白成分進(jìn)行免疫學(xué)檢測。免疫印跡檢測原理本產(chǎn)品就是將CagA、VacA得菌體抗原利用聚丙烯酰胺凝膠電泳將蛋白按分子量大小不同依次分開,再轉(zhuǎn)印至印跡膜上。采用酶聯(lián)免疫反應(yīng)技術(shù),如果被檢者血清有相應(yīng)抗體則在抗原得相應(yīng)位置出現(xiàn)顯色區(qū)帶,根據(jù)條帶顯色位置判斷被檢血清中各種HP抗體。

由抗體出現(xiàn)得種類不同推斷HP類型,再根據(jù)顯色帶得強(qiáng)弱、消長可觀察治療效果,預(yù)測潰瘍有無復(fù)發(fā)得可能性。反應(yīng)過程實(shí)驗(yàn)材料蒸餾水1000ul可調(diào)加樣槍一支10ul加樣槍一支吸嘴500ml帶蓋瓶搖床一臺操作步驟在量杯中將濃縮洗滌液用蒸餾水按1:10得比例稀釋成洗滌應(yīng)用液。每槽加入洗滌液1ml,再加待測血清或全血10ul,放在搖床上搖動30分鐘。取出反應(yīng)槽,棄去槽中液體,并在平鋪得紙巾上將其倒置經(jīng)磕以拍干剩余液體,每槽加入洗滌液1ml,搖動洗滌1分鐘,棄去槽中液體,并在平鋪得紙巾上將其倒置經(jīng)磕以拍干剩余液體,重復(fù)洗滌3次;每槽加入洗滌應(yīng)用液500ul,再加酶聯(lián)試劑10ul,放在搖床上搖動30分鐘。同(

3)洗滌3次。加顯色劑0、5ml,5分鐘