2025年山東省鄒城市第一中學高考仿真卷（生物試題）（三）考生須知：1．全卷分選擇題和非選擇題兩部分，全部在答題紙上作答。選擇題必須用2B鉛筆填涂；非選擇題的答案必須用黑色字跡的鋼筆或答字筆寫在“答題紙”相應位置上。2．請用黑色字跡的鋼筆或答字筆在“答題紙”上先填寫姓名和準考證號。3．保持卡面清潔，不要折疊，不要弄破、弄皺，在草稿紙、試題卷上答題無效。一、選擇題(本大題共7小題,每小題6分,共42分。)1．下列對內環境穩態的表述錯誤的是（）A．高等動物體內絕大多數組織細胞與組織液進行物質交換B．組織液可以通過毛細血管壁與血漿進行物質交換C．高等動物可以依賴血清中的血紅蛋白為全身細胞運送氧D．肝臟的活動除了可以維持血糖濃度穩定，還可維持整個組織液中糖濃度的穩定2．下列關于ATP的敘述，正確的是（）A．高能磷酸鍵的斷裂需要消耗水和能量B．吸能反應所需要的能量都由ATP直接提供C．ATP中的“A”與ATP徹底水解后生成的“A”不同D．ATP中的五碳糖也是參與DNA組成的重要成分3．血液中氧氣含量降低時，腎臟的某些細胞會加速分泌一種促進紅細胞生成的激素（EPO），紅細胞數量增多有利于機體適應低氧環境。下列相關敘述錯誤的是（）A．人從平原進入高海拔地區生活，EPO分泌增加B．EPO及其功能類似物可能是運動比賽的禁藥C．EPO參與體液調節，作用的靶細胞是腎臟細胞D．血氧含量的降低會引起腦干中呼吸中樞的興奮4．如圖表示?；~塘生態系統部分能量流動示意圖，圖中字母代表相應的能量。下列敘述錯誤的是（）A．b表示桑樹呼吸作用散失的能量B．d表示桑樹用于生長、發育、繁殖的能量C．如果g表示蠶傳遞給分解者的能量，則f表示未被利用的能量D．d/a×100%可以表示第一營養級到第二營養級的能量傳遞效率5．在細胞內，有許多由膜構成的囊泡就像深海中的潛艇，在細胞中穿梭往來，繁忙地運輸著“貨物”。下列有關囊泡的敘述，錯誤的是（）A．內質網可以“出芽”形成囊泡，其囊泡膜可以成為高爾基體膜的一部分B．內質網在囊泡運輸中起重要的交通樞紐作用C．高爾基體分泌的囊泡可能形成溶酶體D．突觸小體中的突觸小泡，可以是高爾基體分泌的囊泡形成的6．下列不符合生態工程基本原理的說法是（）A．超載放牧導致草地退化，主要違背協調與平衡原理B．礦區生態環境的恢復工程中，關鍵是土壤微生物群的構建和植被恢復C．城市生活垃圾實現廢物資源化利用依據的是物質循環再生原理D．退耕還濕地和建立自然保護區的主要目的是為了給人類提供游覽勝地7．圖甲中曲線a、b表示物質跨（穿）膜運輸的兩種方式，圖乙表示細胞對大分子物質“胞吞”和“胞吐”的過程。下列相關敘述中，錯誤的是（）A．甲圖中a表示自由擴散，b表示協助擴散或主動運輸B．甲圖中b曲線達到最大轉運速率后的限制因素可能是載體蛋白的數量C．被胞吞或胞吐的物質一定是大分子物質D．乙圖中的胞吞和胞吐過程都需要消耗ATP8．（10分）研究表明某些腫瘤細胞中MDR基因高度表達后，會使這些癌細胞對化療藥物的抗性增強。MDR(多耐藥基因1)的表達產物是P-糖蛋白(P-gp)，該蛋白有ATP依賴性跨膜轉運活性，可將藥物轉運至細胞外，使細胞獲得耐藥性。而P-gp轉運蛋白低水平表達的癌細胞內，某些化療藥物的濃度明顯升高。結合上述信息，分析下列敘述正確的是A．P-gp轉運蛋白轉運物質的方式屬于協助擴散B．P-gp轉運蛋白可將各種化療藥物轉運出癌細胞C．化療藥物可提高P-gp轉運蛋白基因高度表達的癌細胞比例D．提高癌細胞P-gp轉運蛋白的活性為癌癥治療開辟了新途徑二、非選擇題9．（10分）番茄紅素具有一定的藥用價值，但普通番茄合成的番茄紅素易發生轉化（如圖甲），科學家設計了一種重組DNA（質粒三），該DNA能表達出雙鏈RNA（發卡），番茄細胞能識別侵入的雙鏈RNA并將該雙鏈RNA及具有相同序列的單鏈RNA一起降解，從而提高果實中番茄紅素的含量（如圖乙）。請分析回答下列問題：（1）在體外快速大量獲得目的基因或含有目的基因的“片段A”可以采用___________技術，該技術的原理是________________________。

（2）根據圖甲推知，轉錄出“發卡”的DNA片段實際上是兩個反向連接的________________基因，上述過程通過阻止該基因在細胞內的_______________（填“轉錄”或“翻譯”），提高了果實中番茄紅素的含量。（3）為保證圖中的片段A反向連接，處理已開環質粒所用的兩種限制酶是______________________。（4）去磷酸化是去掉黏性末端最外側游離的磷酸基團。對已開環的質粒二兩端去磷酸化的主要作用是阻止其_____________，該DNA分子仍可以和目的基因連接，形成缺少___________個磷酸二酯鍵的重組質粒，隨后在細胞中被修復。（5）可利用___________________法將質粒三導入植物細胞。10．（14分）為提高糧食產量，科研工作者以作物甲為材料，探索采用生物工程技術提高光合作用效率的途徑。（1）圖1是葉肉細胞中部分碳代謝過程______________的模式圖。其中環形代謝途徑表示的是光合作用中的反應。（2）如圖1所示，在光合作用中R酶催化C5與CO2形成2分子3-磷酸甘油酸。在某些條件下，R酶還可以催化C5和O2反應生成1分子C3和1分子2-磷酸乙醇酸，后者在酶的催化作用下轉換為______后通過膜上的載體（T）離開葉綠體。再經過代謝途徑Ⅰ最終將2分子乙醇酸轉換為1分子甘油酸，并釋放1分子CO2。（3）為了減少葉綠體內碳的丟失，研究人員利用轉基因技術將編碼某種藻類C酶（乙醇酸脫氫酶）的基因和某種植物的M酶（蘋果酸合成酶）基因轉入作物甲，與原有的代謝途徑Ⅲ相連，人為地在葉綠體中建立一個新的乙醇酸代謝途徑（圖2中的途徑Ⅱ）。①將C酶和M酶的編碼基因轉入作物甲，能夠實現的目的是：利用途徑Ⅱ，通過_______，降低葉綠體基質中該物質的含量，減少其對葉綠體的毒害作用。②轉基因操作后，途徑Ⅲ能夠提高光合作用效率的原因是_______。（4）在圖2所述研究成果的基礎上，有人提出“通過敲除T蛋白基因來進一步提高光合作用效率”的設想。你認為該設想是否可行并闡述理由___________。11．（14分）回答下列與生態系統有關的問題：（1）西雙版納熱帶雨林是我國保存最完整的熱帶雨林之一。白天有各種蝶類、蜂類和蠅類活動，而到晚上只能看到夜蛾類和螟蛾類昆蟲，這是群落的__________隨時間發生變化，體現了群落的時間結構。該群落_______復雜，抵御外力干擾的能力強。該群落與當地氣候和土壤條件處于最終平衡狀態，此時群落稱為____________。（2）熱帶雨林中動植物種類多，營養級數目多，營養級的位置越高，歸屬于這個營養級的生物種類、數量和_____越少?？捎胈_______來表示各營養級之間的個體數量關系，通過計算動物的_______，可以推測各類動物在生態系統中的重要性。（3）南方的桑基魚塘生態工程，實現了桑葉養蠶、蠶沙養魚、塘泥作為桑樹的肥料回到桑園。這主要體現了農業生態工程的______技術。12．蘿卜的蛋白A具有廣泛的抗植物病菌作用，而且對人體沒有影響。我國科學家欲獲得高效表達蛋白A的轉基因大腸桿菌作為微生物農藥，做了相關研究。（1）研究者用相同的_________酶處理蛋白A基因和pET質粒，得到重組質粒，再將重組質粒置于經_________處理的大腸桿菌細胞懸液中，獲得轉基因大腸桿菌。（2）檢測發現，轉入的蛋白A基因在大腸桿菌細胞中表達效率很低，研究者推測不同生物對密碼子具有不同的偏好，因而設計了與蛋白A基因結合的兩對引物（引物B和C中都替換了一個堿基），并按圖2方式依次進行4次PCR擴增，以得到新的蛋白A基因。①這是一種定點的_________技術。②圖2所示的4次PCR應該分別如何選擇圖1中所示的引物？請填寫以下表格（若選用該引物劃“√”，若不選用該引物則劃“×”）。_____引物A引物B引物C引物DPCR1PCR2PCR3PCR4（3）研究者進一步將含有新蛋白A基因的重組質粒和_________分別導入大腸桿菌，提取培養液中的蛋白質，用_________方法檢測并比較三組受體菌蛋白A的表達產物，判斷新蛋白A基因表達效率是否提高。為檢測表達產物的生物活性，研究者將上述各組表達產物加入到長滿了植物病菌的培養基上，培養一段時間后，比較_________的大小，以確定表達產物的生物活性大小。（4）作為微生物農藥，使用時常噴灑蛋白A基因的發酵產物而不是轉蛋白A基因的大腸桿菌，其優點是_________。

參考答案一、選擇題(本大題共7小題,每小題6分,共42分。)1、C【解析】

內環境穩態是在神經系統和體液的調節下，通過各個器官、系統的協調活動，共同維持內環境相對穩定的狀態。【詳解】A、組織液是絕大多數組織細胞直接生活的內環境，高等動物體內絕大多數組織細胞與組織液進行物質交換，A正確；B、組織液與血漿被血管壁阻隔，故兩者要進行物質交換需通過毛細血管壁，B正確；C、高等動物可以依賴紅細胞中的血紅蛋白為全身細胞運送氧，C錯誤；D、肝臟可以通過合成或分解肝糖原來維持血糖濃度穩定，血漿和組織液可以進行過物質交換，故可組織液中血糖濃度的穩定，D正確。故選C。本題考查穩態的相關知識，要求考生識記內環境穩態的概念、調節機制及意義，能結合所學的知識準確判斷各選項。2、C【解析】

ATP的中文名稱叫三磷酸腺苷，其結構簡式為A-P～P～P，其中A代表腺苷，P代表磷酸基團，-代表普通磷酸鍵，～代表高能磷酸鍵。ATP為直接能源物質，在體內含量不高，可與ADP在體內迅速轉化，ATP與ADP的相互轉化的反應式為：ATP?ADP+Pi+能量，反應從左到右時能量代表釋放的能量，用于各種生命活動?！驹斀狻緼、高能磷酸鍵的水解斷裂需要消耗水，但釋放能量，A錯誤；B、吸能反應所需要的能量主要由ATP直接提供，B錯誤；C、ATP中的“A”是腺苷，ATP徹底水解后生成的“A”是腺嘌呤，二者不同，C正確；D、ATP中的五碳糖是核糖，而DNA的五碳糖是脫氧核糖，D錯誤。故選C。3、C【解析】

題意分析：血液中氧氣含量降低時，會刺激腎臟的某些細胞會分泌分泌一種促進紅細胞生成的激素（EPO），該激素會作用于骨髓造血干細胞，使得紅細胞數目增多，使氧氣運輸增多，以緩解機體缺氧的狀態，這是機體的自我調節性的適應?！驹斀狻緼、高海拔地區氧氣稀薄，致使體內EPO分泌增加，紅細胞數量增多有利于機體適應低氧環境，A正確；B、運動比賽會導致機體血氧濃度降低，使用EPO及其功能類似物會增加紅細胞數量，進而增強運動員耐受低血氧的能力，提高比賽成績，B正確；C、EPO作為激素，參與體液調節，其分泌細胞（而非靶細胞）是腎臟細胞，C錯誤；D、血氧含量的降低是引起腦干中呼吸中樞的有效刺激，會引起腦干中呼吸中樞的興奮，D正確。故選C。4、B【解析】

根據題意和圖示分析可知：圖示為桑基魚塘生態系統局部的能量流動，其中a為總光合作用量；b為生產者呼吸消耗量；c為凈光合作用量；d為蠶的同化量，且d=e+f+g+h；h為蠶流向下一個營養級的能量?！驹斀狻緼、總光合作用=凈光合作用+呼吸作用，因此圖中b表示桑樹呼吸作用散失的能量，A正確；B、各營養級同化的能量，一部分用于呼吸作用消耗，還有一部分用于該營養級生長、發育和繁殖等，即圖中的c可表示桑樹用于生長、發育、繁殖的能量，B錯誤；C、如果g表示蠶傳遞給分解者的能量，則f表示未被利用的能量，h為蠶流向下一個營養級的能量，C正確；D、蠶的同化量為d，桑樹的同化量為a，d/a×100%可以表示第一營養級到第二營養級的能量傳遞效率，D正確。故選B。5、B【解析】

分泌蛋白合成與分泌過程:核糖體合成蛋白質內質網進行粗加工內質網“出芽”形成囊泡高爾基體進行再加工形成成熟的蛋白質高爾基體“出芽”形成囊泡細胞膜。【詳解】A、內質網可以“出芽”形成囊泡，包裹著要運輸的蛋白質到高爾基體中進一步加工，囊泡膜與高爾基體膜融合，成為高爾基體膜的一部分，A正確；B、高爾基體起交通樞紐作用，而不是內質網，B錯誤；C、溶酶體是單層膜組成的、內含多種水解酶，初級溶酶體是高爾基體分泌形成的，C正確；D、突觸小泡是含有神經遞質的膜泡結構，是由高爾基體分泌的囊泡形成的，D正確。故選B。6、D【解析】

生態工程依據的基本原理：（1）物質循環再生原理：物質能在生態系統中循環往復，分層分級利用；（2）物種多樣性原理：物種繁多復雜的生態系統具有較高的抵抗力穩定性；（3）協調與平衡原理：生態系統的生物數量不能超過環境承載力（環境容納量）的限度；（4）整體性原理：生態系統建設要考慮自然、經濟、社會的整體影響；（5）系統學和工程學原理：系統的結構決定功能原理：要通過改善和優化系統結構改善功能；系統整體性原理：系統各組分間要有適當的比例關系，使得能量、物質、信息等的轉換和流通順利完成，并實現總體功能大于各部分之和的效果，即“1+1＞2”。【詳解】A、超載放牧導致草地退化，主要違背協調與平衡原理，A正確；B、土壤微生物群的構建和植被恢復是礦區生態環境的恢復工程中的關鍵的措施，B正確；C、城市生活垃圾實現廢物資源化利用依據的是物質循環再生原理，C正確；D、退耕還濕地和建立自然保護區的主要目的是為了保護野生動植物，D錯誤。故選D。7、C【解析】

分析曲線甲圖：方式a只與濃度有關，且與濃度呈正相關，屬于自由擴散；方式b除了與濃度相關外，還與載體數量有關，屬于協助擴散或主動運輸。圖乙是對胞吐和胞吞的過程的考查，分析題圖可以知道，a是細胞的胞吞過程，b是細胞的胞吐過程，不論是細胞的胞吞還是胞吐都伴隨著細胞膜的變化和具膜小泡的形成，因此胞吐與胞吞的結構基礎是膜的流動性?！驹斀狻緼、分析曲線甲圖：方式a只與濃度有關，且與濃度呈正相關，屬于自由擴散；方式b除了與濃度相關外，還與載體數量有關，屬于協助擴散或主動運輸，A正確；B、甲圖中方式b除了與濃度相關外，還與載體數量有關，其最大轉運速率與載體蛋白數量有關，B正確；C、被胞吞或胞吐的物質不一定是大分子物質，如神經遞質，C錯誤；D、胞吞和胞吐是耗能過程，需要細胞內部提供能量，D正確。故選C。8、C【解析】

根據題意該蛋白的轉運依賴于ATP，說明需要消耗能量。【詳解】由題意可知，P-gp轉運蛋白轉運化療藥藥物要消耗能量，不屬于協助擴散，A錯誤；P-gp轉運蛋白主要影響某些化療藥物的濃度，B錯誤；化療藥物會對癌細胞起到選擇作用，P-gp轉運蛋白基因高度表達的癌細胞的抗藥性強，生存下來的比例高，C正確；提高癌細胞P-gp轉運蛋白的活性即提高了癌細胞的抗藥性，不利于癌癥的治療，D錯誤本題的解題關鍵是分析出P-gp轉運蛋白于癌細胞之間的關系。二、非選擇題9、PCRDNA雙鏈復制番茄紅素環化酶翻譯Ecl和BamH1自身成環2農桿菌轉化（或基因槍、花粉管通道）【解析】

分析圖一：番茄紅素可以轉化為胡蘿卜素。分析圖二：圖二位重組DNA（質粒三）的構建過程，該質粒能表達出雙鏈RNA（發卡），番茄細胞可以識別侵入的雙鏈RNA并將該雙鏈RNA及具有相同序列的單鏈RNA一起降解，提高了果實中番茄紅素的含量?！驹斀狻浚?）在體外快速大量獲得目的基因或含有目的基因的“片段A”可以采用PCR技術，該技術的原理是DNA雙鏈復制。（2）根據圖二可知，目的基因是番茄紅素環化酶基因，因此表達出“發卡”的DNA片段實際上是兩個反向連接的番茄紅素環化酶基因；“發卡”能導致雙鏈RNA、mRNA被降解，而mRNA為翻譯的模板，因此“發卡”阻止了其在細胞內的翻譯過程，所以提高了果實中番茄紅素的含量。（3）為保證第二個目的基因片段反向連接，應該用兩種限制酶切割。由圖可知，第二個目的基因片段兩側的限制酶識別序列為Ecl和BamHⅠ，因此處理已開環質粒所用的兩種限制酶是Ecl和BamHⅠ。（4）去磷酸化是去掉黏性末端最外側游離的磷酸基團。對已開環的質粒二兩端去磷酸化的主要作用是阻止其自身成環（自身環化）；構建重組質粒三時，要用限制酶Ecl和BamHⅠ切割，這樣會去除黏性末端最外側缺少磷酸基團的脫氧核苷酸，因此形成的重組質粒缺少2個磷酸二酯鍵。（5）將目的基因導入植物細胞，采用最多的方法是農桿菌轉化法，因此可利用農桿菌轉化法將質粒三導入植物細胞。解答第（5）題，關鍵能理清將目的基因導入受體細胞的方法，總結如下：1、將目的基因導入植物細胞，采用最多的方法是農桿菌轉化法，其次還有基因槍法和花粉管通道法等。2、將目的基因導入動物細胞，最常用的方法是顯微注射技術。3、將目的基因導入微生物細胞，最常用的原核細胞是大腸桿菌，其轉化方法是：先用Ca2+處理細胞，使其成為

感受態細胞，再將重組表達載體DNA分子溶于緩沖液中與感受態細胞混合，在一定的溫度下促進感受態細胞吸收DNA分子，完成轉化過程。10、碳（暗）乙醇酸將乙醇酸轉換為蘋果酸由于途徑Ⅱ提高了蘋果酸的含量，使葉綠體基質內CO2的濃度增加，直接增加了碳（暗）反應的反應（底）物該設想可行。理由是：葉綠體膜上的載體T仍有可能輸出部分乙醇酸，造成葉綠體中碳的丟失。找到并敲除載體T的基因，即可減少這一部分碳的丟失，進一步提高光合作用效率。【解析】

1.葉綠體是進行光合作用的場所，光合作用分為光反應和暗反應，聯系見下表：項目光反應碳反應（暗反應）實質光能→化學能，釋放O2同化CO2形成（CH2O）（酶促反應）時間短促，以微秒計較緩慢條件需色素、光、ADP、和酶不需色素和光，需多種酶場所在葉綠體內囊狀結構薄膜上進行在葉綠體基質中進行物質轉化2H2O→4[H]+O2↑（在光和葉綠體中的色素的催化下）ADP+Pi+能量→ATP（在酶的催化下）CO2+C5→2C3（在酶的催化下）C3+【H】→（CH2O）+C5（在ATP供能和酶的催化下）能量轉化葉綠素把光能先轉化為電能再轉化為活躍的化學能并儲存在ATP中ATP中活躍的化學能轉化變為糖類等有機物中穩定的化學能2.根據題意和圖示可知，如圖1葉綠體中所示的環形反應的生理過程為卡爾文循環，該循環過程中發生的反應為：在光合作用中R酶催化C5與CO2形成2分子3-磷酸甘油酸，3-磷酸甘油酸轉化成C3，然后C3接受來自光反應產生的NADPH的還原劑氫以及酶的催化作用下形成有機物和C5。除外在某些條件下，R酶還可以催化C5和O2反應生成1分子C3和1分子2-磷酸乙醇酸，后者在酶的催化作用下轉換為乙醇酸后通過膜上的載體（T）離開葉綠體。再經過代謝途徑Ⅰ最終將2分子乙醇酸轉換為1分子甘油酸，并釋放1分子CO2。結合題意分析圖2可知，通過轉基因技術人為地在葉綠體中建立一個新的乙醇酸代謝途徑，即將乙醇酸通過C酶和M酶的催化作用轉化為蘋果酸的途徑Ⅱ，由于途徑Ⅱ提高了蘋果酸的含量，蘋果酸通過代謝途徑Ⅲ，使葉綠體基質內CO2的濃度增加，有利于提高光合速率?！驹斀狻浚?）根據以上分析可知，圖1是葉肉細胞中部分碳代謝過程表示暗反應的過程圖。（2）根據以上分析可知，圖1中在某些條件下，R酶還可以催化C5和O2反應生成1分子C3和1分子2-磷酸乙醇酸，后者在酶的催化作用下轉換為乙醇酸后通過膜上的載體（T）離開葉綠體。（3）①根據以上對圖2的分析可知，通過轉基因技術將C酶和M酶的編碼基因轉入作物甲，增加了途徑Ⅱ，通過該途徑將乙醇酸轉換為蘋果酸，降低葉綠體基質中乙醇酸的含量，減少其對葉綠體的毒害作用。②轉基因操作后，通過途徑Ⅱ提高了葉綠體中蘋果酸的含量，然后蘋果酸經過途徑Ⅲ代謝產生了CO2，從而使葉綠體基質內CO2的濃度增加，提高暗反應所需的底物濃度，有利于提高光合速率。（4）根據題意和識圖分析可知，T蛋白是膜上的將乙醇酸運出葉綠體的載體，乙醇酸運出葉綠體造成葉綠體中碳的丟失。因此找到并敲除載體T的基因，即可減少這一部分碳的丟失，進一步提高光合作用效率。所以“通過敲除T蛋白基因來進一步提高光合作用效率”的設想是可行的。本題考查光合作用的知識點，要求學生掌握光合作用的過程，特別是掌握光合作用中暗反應的過程以及物質變化。能夠正確識圖分析圖1和圖2中的代謝途徑以及與光合作用之間的關系，結合圖示獲取有效信息，結合光合作用的知識點解決問題，這是該題考查的重點。11、組成和外貌食物鏈/食物網/營養結構頂極群落能量數量金字塔生物量物質的良性循環技術【解析】

生態系統的結構包括生態系統的組成成分和營養結構，組成成分又包括非生物的物質和能量，生產者、消費者和分解者，營養結構就是指食物鏈和食物網；生態系統的功能包括物質循環、能量流動和信息傳遞?！驹斀狻浚?）白天有各種蝶類、蜂類和蠅類活動，而到晚上只能看到夜蛾類和螟蛾類昆蟲，這屬于自然環境因素的時間節律所引起的群落的組成和外貌在時間結構上相應的周期變化，屬于群落的時間結構；西雙版納熱帶雨林的動植物種類繁多，營養結構復雜，抵抗力穩定性高；該群落與當地氣候和土壤條件處于最終平衡狀態，為頂級群落。（2）生態系統中能量是單向傳遞、逐級遞減的，因此營養級越高，能量越少，生物種類和數量一般也越少；各營養級之間的個體數量關系可以用數量金字塔表示，通過計算動物的生物量，可以推測各類動物在生態系統中的重要性。（3）南方的?；~塘生態工程，實現了桑葉養蠶、蠶沙養魚、塘泥作為桑樹的肥料回到桑園，主要體現了農業生態工程的物質的良性循環技術。解答本題的關鍵是掌握生態系統的結構與功能的相關知識點，能夠識記時間結構、頂級群落等概念，明確能量流動的特點是單向傳遞、逐級遞減，進而利用所學知識結合題干要求分析答題。12、限制酶和DNA連接CaCl2基因突變引物A引物B引物C引物DPCR1√√××PCR2××√√PCR3××××PCR4√××√含有蛋白A基因的重組質粒、空質粒（pET質粒）抗原-抗體雜交抑菌圈對人、畜、農作物和自然環境安全；不會造成基因污染；有效成分純度較高【解析】

（一）基因工程的基本工具1、“分子手術刀”——限制性核酸內切酶（限制酶）（1）來源：主要是從原核生物中分離純化出來的。（2）功能：能夠識別雙鏈DNA分子的某種特定的核苷酸序列，并且使每一條鏈中特定部位的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷開，因此具有專一性。（3）結果：經限制酶切割產生的DNA片段末端通常有兩種形式：黏性末端和平末端。2、“分子縫合針”——DNA連接酶（1）兩種DNA連接酶（E?coliDNA連接酶和T4DNA連接酶）的比較：①相同點：都縫合磷酸二酯鍵。②區別：E?coliDNA連接酶來源于大腸桿菌，只能將雙鏈DNA片段互補的黏性末端之間的磷酸二酯鍵連接起來；而T4DNA連接酶來源于T4噬菌體，可用于連接粘性末端和平末端，但連接效率較低。（2）與DNA聚合酶作用的異同：DNA聚合酶只能將單個核苷酸加到已有的核苷酸片段的末端，形成磷酸二酯鍵．DNA連接酶是連接兩個DNA片段的末端，形成磷酸二酯鍵。3、“分子運輸車”——載體（1）載體具備的條件：①能在受體細胞中復制并穩定保存。②具有一至多個限制酶切點，供外源DNA片段插入。③具有標記基因，供重組DNA的鑒定和選擇。（2）最常用的載體是質粒，它是一種裸露的、結構簡單的、獨立于細菌擬核DNA之外，并具有自我復制能力的雙鏈環狀DNA分子。（3）其它載體：噬菌體的衍生物、動植物病毒。（二）基因工程的基本操作程序第一步：目的基因的獲取1、目的基因是指：編碼蛋白質的結構基因。2、原核基因采取直接分離獲得，真核基因是人工合成．人工合成目的基因的常用方法有反轉錄法和化學合成法。3、PCR技術擴增目的基因（1）原理：DNA雙鏈復制（2）過程：第一步：加熱至90～95℃DNA解鏈；第二步：冷卻到55～60℃，引物結合到互補DNA鏈；第三步：加熱至70～75℃，熱穩定DNA聚合酶從引物起始互補鏈的合成。第二步：基因表達載體的構建1、目的：使目的基因在受體細胞中穩定存在，并且可以遺傳至下一代，使目的基因能夠表達和發揮作用。2、組成：目的基因+啟動子+終止子+標記基因（1）啟動子：是一段有特殊結構的DNA片段，位于基因的首端，是RNA聚合酶識別和結合的部位，能驅動基因轉錄出mRNA，最終獲得所需的蛋白質。（2）終止子：也是一段有特殊結構的DNA片段，位于基因的尾端。（3）標記基因的作用：是為了鑒定受體細胞中是否含有目的基因，從而將含有目的基因的細胞篩選出來．常用的標記基因是抗生素抗性基因。第三步：將目的基因導入受體細胞1、轉化的概念：是目的基因進入受體細胞內，并且在受體細胞內維持穩定和表達的過程。2、常用的轉化方法：將目的基因導入植物細胞：采用最