上海國際旅行衛生保健中心實驗室

章琪方筠王家棟

Telmail:第一局部：食源性急性胃腸炎綜述食源性急性胃腸炎流行現狀Source:FoodborneOutbreakReportingSystem:///主要病原體：毒素介導〔Toxin-mediated):水樣便病毒：諾如，輪狀，星狀，腺病毒細菌：蠟樣芽孢桿菌，產氣莢膜梭菌，金黃色葡萄球菌，產腸毒素型大腸桿菌侵襲性病原體〔Invasivemicrobes):膿血便細菌：大腸桿菌〔侵襲性、致病性、出血性〕，沙門氏菌，空腸彎曲桿菌，志賀氏菌，艱難梭菌原蟲：賈第鞭毛蟲，溶組織內阿米巴滲透性病原體〔Penetratingmicrobes):系統感染細菌：傷寒、副傷寒沙門氏菌，鼠疫桿菌感染途徑：病人接觸：諾如病毒、志賀氏菌、出血性大腸桿菌旅行：大腸桿菌、沙門氏菌、賈第鞭毛蟲郵輪：諾如病毒〔Cruise-shipvirus〕動物接觸：沙門氏菌，出血性大腸桿菌，賈第鞭毛蟲疫水：隱孢子蟲，出血性大腸桿菌污染的食物：沙門氏菌致病性：感染劑量：〔病原體顆粒數〕隱孢子蟲：10-100志賀氏菌：10-100出血性大腸桿菌：10-100空腸彎曲桿菌：104–106沙門氏菌：105–108霍亂弧菌：105–108產腸毒素型大腸桿菌：108鼠疫桿菌：109SlutskerL,etal.AnnInternMed1997;126:505-13食源性急性胃腸炎的防控仍然是很大的挑戰！諾如病毒：10-100第二局部：諾如病毒介紹歷史：In1929,Zahorskyproposedthename“wintervomitingdisease〞todescribesoutbreaksofpresumedviralgastroenteritisInthe1940s,GordondemonstratedthatpooledstoolfiltratesobtainedfrompatientsinaninstitutionaloutbreakofnonbacterialgastroenteritiscouldinfectinoculatedvolunteersIn1968,CDCinvestigatedanoutbreakofvomitingdiseaseinanelementaryschoolinNorwalkOH:50%ofstudentsandteachersdevelopedgastroenteritisKaplanusedimmuneelectronmicroscopytoidentifyviralparticlesinthestoolsofvolunteersinfectedwiththe“Norwalk〞strainVirusinitiallyclassifiedassmallroundviruses,laterreclassifiedascaliciviruseswhengenomeclonedDr.AlbertKapikian1972,electronmicroscopySmallRound-StructuredVirus(SRSV)27nmKapikianAZ,etal.Visualizationbyimmuneelectronmicroscopyofa27-nmparticleassociatedwithacuteinfectiousnonbacterialgastroenteritis.JVirol,1972,10(5):1075-1081.美國2006年諾如病毒引起的急性胃腸炎數量發生場所疫情數量郵輪37養老院37餐館13醫院7學校3聚會3其它26總計

126流行現狀：我國流行現狀1996年和1997年分別在北京和太原開展的人群血清標本中的諾瓦克樣病毒特異性IgG抗體檢測說明，北京市諾瓦克樣病毒抗體總檢出率為88.8％以上。太原市總檢出率在78.6％以上。1998-2002在福州地區用RT-PCR方法對288份腹瀉患者糞便標本諾瓦克樣病毒病原檢測顯示，諾瓦克樣病毒基因組I的陽性率為11.1％，主要是7歲以上兒童及成人；諾瓦克樣病毒基因組Ⅱ的陽性率為28.8％，主要是6月齡至3歲嬰幼兒。我國流行現狀根本特征：發病率高、致病劑量低、抵抗力強，被WHO定為B類病原體；對加熱、低溫具有較強抵抗性〔能耐受零度以下到60℃〕；對酸堿和去污劑等具有較強的抵抗性(通常10ppm或10mg/L含氯去污劑處理30分鐘不能有效殺滅病原體〕；無法培養，無有效小動物模型；型別眾多，無有效保護性抗體，常引起重復感染；復制機制還不清楚，無有效治療藥物及疫苗病原學：

TaxonomyFamilyCaliciviridaeGenus: 1.Norwalk-LikeViruses(NLVs) 2.Sapporo-LikeViruses(SLVs)GenusNoroviruses (formerlyNorwalk-LikeViruses)GenusLagovirus(rabbit,hare)GenusVesivirus(cat,pig,sealion,other)GenusNorovirus(human,bovine,swine,mouse)GenusSapovirus(human,swine)Virions(35-40nm)nonenvelopedandicosahedral

Genomestructure：LinearpositivesenseRNAof7.4-7.7kb5'3'HelProPolORF1ORF2ORF3155358537469506950758876541789530212CapsidSource:GenBankM87661GIII.1_JenaGIII.2_CH126GI.3_DesertShieldGI.7_WinchesterGI.8_BoxerGI.4_ChibaGI.5_MusgroveGI.2_SouthamptonGI.6_HesseGI.1_NorwalkGV.1_MurineGIV.1_AlphatronGII.15_J23GII.4_BristolGII.11_SW918GII.8_AmsterdamGII.9_VirginiaBeachGII.14_M7GII.7_LeedsGII.12_WortleyGII.1_HawaiiGII.16_TiffinGII.2_MelkshamGII.5_HillingdonGII.10_ErfurtGII.13_FayettevilleGII.17_CS-E1GII.3_TorontoGII.6_Seacroft.10GVGIVGIIIGIIGIClustersdifferby≥20%aminoacidpairwisedistanceGenogroupsdifferby44-55%aminoacidpairwisedistance病毒的分型〔Capsidprotein)1病毒培養：Cellculture:no(humanstrains)Animalmodel:no(chimpanzees)流行現狀：Causesanestimated23millioninfectionsperyearintheUSCauses~60%ofillnessduetoknownAccountsfor70-95%ofgastroenteritisoutbreaks感染劑量:10-100viruses：傳播途徑：Fecal-oraltransmission(sheddingforupto2-3weeks)Droplettransmission?(viaingestionofairbornedropletsofviruscontainingparticles)

Commoncauseoftraveler’sdiarrheaMaycausechronicinfectionintransplantrecipients流行病學：傳播途徑：糞-口傳播

Person-to-personFoodborneWaterborneMixed空氣傳播

Vomitus污染物

傳播途徑分類：臨床病癥： 腹瀉 86% 嘔吐 78% 腹部疼痛或絞痛 30% 惡心〔無嘔吐〕 15% 嗜睡 8% 發熱 7% 肌肉疼痛 7% 頭痛 6% 頭暈 4% 脫水 4% 寒顫 3% 喉嚨疼痛 1% 鼻出血 1% 感染持續過程：病毒顆粒持續釋放過程：診斷：實驗室檢測

(一)抗原檢測

1972年首先通過免疫電鏡的方法發現NVs，因此該方法在很長一段時間內成為檢測NVs的經典方法。電鏡法包括常規電鏡〔EM〕、免疫電鏡〔IEM〕以及固相免疫電鏡〔SPIEM〕三種。直接電鏡法通過將糞便標本重懸后離心，負染病毒顆粒后直接在鏡下觀察來尋找病毒。由于NVs病毒顆粒并不具備典型的杯狀病毒特征，且糞便中病毒滴度通常較低，給直接電鏡觀察帶來了很大困難，通常要求病毒的滴度到達106/g才能到達檢測要求。免疫電鏡的方法是將重懸離心別離得到的病毒顆粒與標準血清共孵育后再經負染后在鏡下觀察來檢測病毒。盡管這種方法可以較好地濃縮病毒顆粒，但靈敏度仍然較低，對NVs檢測的陽性率只有20%左右。固相免疫電鏡的方法是將特異性抗體直接包被載網，同時參加蛋白A增加抗體與標本中抗原結合的時機，從而提高檢測的靈敏度。上述三種方法都要求觀察者具有豐富的經驗，同時，精密的檢測儀器、較大的勞動強度，都制約了該方法在NVs檢測中的應用。免疫學檢測〔EIA〕主要通過檢測標本中的抗原來確認諾如病毒。該方法操作簡單，實用性較強，便于推廣。然而同樣由于NVs型別的多樣性，對該方法的應用產生了限制。Bruin等在2006年首次報告了對兩種新上市的商品化NVsEIA檢測試劑盒的評估結果。結果說明，與傳統的RT-PCR方法相比，IDEIA和Ridascreen這兩個品牌的試劑盒對NVs的檢測靈敏度分別為38%和36%，特異性為96%和88%。之后的兩項評估結果雖然有提高，但靈敏度也僅在60.%76.9%和59%80.3%之間。說明盡管對單個樣品的診斷可能還存在問題，但可應用于NVs大規模爆發后的篩查。(二)核酸檢測逆轉錄聚合酶鏈反響(RT-PCR)：除了能更準確、靈敏地檢測標本中的諾瓦克病毒，尤其是低濃度的諾瓦克病毒感染外，最大的優點在于可以進一步對病毒進行血清型和基因型的研究，不會受到獲得分型單克隆抗體的限制，對流行病學研究具有重要意義，是諾如病毒檢測的“金標準〞。SpecimenProcessing(Faeces)ViralRecovery&RNAextractionGeneratecDNAfromRNAbyreversetranscriptionPCRNorovirusGenogroupIorIIidentified

SequencingGenotyping實驗流程：第三局部一起郵輪諾如病毒感染疫

情的實驗室檢測根本情況介紹UnpublishedresultsbyWangJ.andZhangZ.實驗室診斷處置依據：?上海國際旅行衛生保健中心腹瀉病處置預案?診斷原那么首先排除檢疫傳染病〔霍亂〕流行病學調查資料臨床病癥其它相關資料確定檢測工程，檢測方法排查方案〔一〕〔一〕輪狀病毒：1．金標法檢測輪狀病毒抗原試劑：糞便輪狀病毒檢測試劑盒；試劑廠家：法國VEDA公司；樣本：糞便；時間：30分鐘。2．ELISA法試劑：輪狀病毒酶免檢測試劑盒；供給商：上海軒昊科技開展樣本：糞便；時間：2小時。3．熒光定量RT-PCR法試劑：輪狀病毒熒光定量RT-PCR檢測試劑盒；單位：中國疾病預防控制中心病毒病預防控制所；樣本：糞便；時間：4小時。〔二〕諾如病毒1．ELISA法檢測病毒抗原試劑：EnzymeimmunoassayforthedetectionofNorovirusinstoolsamples；廠家：R-BiopharmAG；樣本：糞便；時間：4小時。2．半定量RT-PCR法〔本實驗室〕樣本：糞便；時間：6小時。排查方案〔二〕結果：E