第2節(jié)微生物的培養(yǎng)技術(shù)及二、微生物的選擇培養(yǎng)和計數(shù)（導(dǎo)學(xué)案）學(xué)習(xí)目標(biāo)闡明微生物選擇培養(yǎng)的原理2.進(jìn)行土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離和計數(shù)一、選擇培養(yǎng)基1.概念：在微生物學(xué)中，將允許__________的微生物生長，同時_____或_____其他種類微生物生長的培養(yǎng)基。2.實(shí)驗(yàn)室中微生物的篩選原理人為提供有利于生長的條件（包括、和），同時或其他微生物的生長。二、微生物的選擇培養(yǎng)(1)稀釋涂布平板法分離分解尿素的細(xì)菌

土壤中細(xì)菌的數(shù)量龐大，要想得到能分解尿素的細(xì)菌的純培養(yǎng)物，必須要對土樣進(jìn)行________，然后再將菌液______到制備好的________________，操作過程如下。

①取樣：鏟取土樣，將樣品裝入紙袋中。

②稀釋涂布平板法A．系列稀釋操作：將10g土樣加入盛有90mL無菌水的錐形瓶中，充分搖勻。取1mL上清液加入盛有9mL無菌水的試管中，依次等比稀釋。B．涂布平板操作

C．培養(yǎng)與觀察待涂布的菌液被培養(yǎng)基吸收后，將平板________，放入30℃～37℃的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)1～2d。在涂布有合適濃度菌液的平板上就可以觀察到分離的________菌落。三、微生物的數(shù)量測定1.稀釋涂布平板法計數(shù)的原理：稀釋涂布平板法除可以用于外，也常用來統(tǒng)計樣品中的數(shù)目，當(dāng)樣品的稀釋足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個單菌落，來源于來源于樣品稀釋液中的。2.稀釋涂布平板計數(shù)法統(tǒng)計的平板菌落數(shù)范圍：3.稀釋涂布平板法的統(tǒng)計方法：在同一稀釋度下，應(yīng)至少對個平板進(jìn)行重復(fù)計數(shù)，然后求出平均值4.稀釋涂布平板計數(shù)的特點(diǎn)及原因分析：統(tǒng)計的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目，這是因?yàn)閮蓚€或多個細(xì)胞連在一起時，平板上觀察到的只是。因此。統(tǒng)計結(jié)果一般用而不是用來表示。5.除上述的活菌計數(shù)外，利用進(jìn)行直接計數(shù)，也是一種常用的、的測定微生物數(shù)量的方法。該方法利用特定的或，在顯微鏡下觀察、計數(shù)，然后再計算一定體積的樣品中的微生物數(shù)量，統(tǒng)計的結(jié)果一般是和的總和。四、與高考鏈接1.2023·遼寧·統(tǒng)考高考真題）細(xì)菌氣溶膠是由懸浮于大氣或附著于顆粒物表面的細(xì)菌形成的。利用空氣微生物采樣器對某市人員密集型公共場所采樣并檢測細(xì)菌氣溶膠的濃度（菌落數(shù)/m3）。下列敘述錯誤的是（

）A．采樣前需對空氣微生物采樣器進(jìn)行無菌處理B．細(xì)菌氣溶膠樣品恒溫培養(yǎng)時需將平板倒置C．同一稀釋度下至少對3個平板計數(shù)并取平均值D．稀釋涂布平板法檢測的細(xì)菌氣溶膠濃度比實(shí)際值高2.（2023·江蘇·統(tǒng)考高考真題）下列關(guān)于細(xì)菌和酵母菌實(shí)驗(yàn)的敘述正確的是（）A．通常酵母菌培養(yǎng)基比細(xì)菌培養(yǎng)基有更高的碳氮比B．通常細(xì)菌的生長速度比酵母菌快，菌落比酵母菌落大C．通常細(xì)菌培養(yǎng)基用高壓蒸汽滅菌法滅菌，酵母菌培養(yǎng)基用過濾除菌法除菌D．血細(xì)胞計數(shù)板既可用于酵母菌的數(shù)量測定，也可用于細(xì)菌的數(shù)量測定3.（2023·廣東·統(tǒng)考高考真題）研究者擬從堆肥中取樣并篩選能高效降解羽毛、蹄角等廢棄物中角蛋白的嗜熱菌。根據(jù)堆肥溫度變化曲線（如圖）和選擇培養(yǎng)基篩選原理來判斷，下列最可能篩選到目標(biāo)菌的條件組合是（

）A．a(chǎn)點(diǎn)時取樣、尿素氮源培養(yǎng)基B．b點(diǎn)時取樣、角蛋白氮源培養(yǎng)基C．b點(diǎn)時取樣、蛋白胨氮源培養(yǎng)基D．c點(diǎn)時取樣、角蛋白氮源培養(yǎng)基4.（2023·山東·高考真題）平板接種常用在微生物培養(yǎng)中。下列說法正確的是（

）A．不含氮源的平板不能用于微生物培養(yǎng)B．平板涂布時涂布器使用前必須進(jìn)行消毒C．接種后未長出菌落的培養(yǎng)基可以直接丟棄D．利用以尿素為唯一氮源的平板能分離出合成脲酶的微生物5.（2022·江蘇·統(tǒng)考高考真題）下列是某同學(xué)分離高產(chǎn)脲酶菌的實(shí)驗(yàn)設(shè)計，不合理的是（

）A．選擇農(nóng)田或公園土壤作為樣品分離目的菌株B．在選擇培養(yǎng)基中需添加尿素作為唯一氮源C．適當(dāng)稀釋樣品是為了在平板上形成單菌落D．可分解酚紅指示劑使其褪色的菌株是產(chǎn)脲酶菌6.（2022·湖南·高考真題）黃酒源于中國，與啤酒、葡萄酒并稱世界三大發(fā)酵酒。發(fā)酵酒的釀造過程中除了產(chǎn)生乙醇外，也產(chǎn)生不利于人體健康的氨基甲酸乙酯（EC）。EC主要由尿素與乙醇反應(yīng)形成，各國對酒中的EC含量有嚴(yán)格的限量標(biāo)準(zhǔn)。回答下列問題:(1)某黃酒釀制工藝流程如圖所示，圖中加入的菌種a是，工藝b是（填“消毒”或“滅菌”），采用工藝b的目的是。(2)以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入指示劑，根據(jù)顏色變化，可以初步鑒定分解尿素的細(xì)菌。尿素分解菌產(chǎn)生的脲酶可用于降解黃酒中的尿素，脲酶固定化后穩(wěn)定性和利用效率提高，固定化方法有（答出兩種即可）。(3)研究人員利用脲酶基因構(gòu)建基因工程菌L，在不同條件下分批發(fā)酵生產(chǎn)脲酶，結(jié)果如圖所示。推測是決定工程菌L高脲酶活力的關(guān)鍵因素，理由是。(4)某公司開發(fā)了一種新的黃酒產(chǎn)品，發(fā)現(xiàn)EC含量超標(biāo)。簡要寫出利用微生物降低該黃酒中EC含量的思路。答案一、選擇培養(yǎng)基特定種類，抑制、阻止2.目的菌（營養(yǎng)、溫度和PH），抑制、阻止。二、微生物的選擇培養(yǎng)(1)充分稀釋，涂布、選擇培養(yǎng)基，倒置，單。三、微生物的數(shù)量測定1.分離微生物，活菌，一個活菌。2.30300。3.3個4.少，一個菌落。菌落數(shù)、活菌數(shù)。5.顯微鏡、快速直觀。細(xì)菌計數(shù)板或血細(xì)胞計數(shù)板，活菌數(shù)和死菌數(shù)四、1【答案】D2、【答案】A3、【答案】D4.【答案】D5、【答案】D6【答案】(1)酵母菌消毒目的是殺死啤酒的中大多數(shù)微生物，并延長其保存期(2)酚紅化學(xué)結(jié)合法、包埋法、物理吸附法(3)pH兩圖中脲酶活力隨時間變化的曲線基本一致，而維持pH在6.5不變與pH從6.5降為4.5相比較而言，