3生物制品生產用生物安全柜本文件規定了生物制品生產用生物安全柜的術語和定義、分類、結構及性能的要求、試驗方法等內本文件適用于符合《藥品生產質量管理規范》要求，能夠提供A級潔凈環境的Ⅱ級生物安全柜(以下簡稱安全柜)。2規范性引用文件下列文件中的內容通過文中的規范性引用而構成本標準的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所有的修改單（不包括勘誤的內容）或修訂版均不適用于本標準，然而，鼓勵根據本標準達成協議的各方研究使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本標準。GB41918生物安全柜藥品生產質量管理規范(GoodManufacturePracticeofMedicalProducts，GMP)3術語和定義下列術語和定義適用于本文件。3.1空態as-bulit潔凈室（區）在凈化空氣調節系統已安裝完畢且功能完備的情況下，但是沒有生產設備、原材料或人員的狀態。3.2靜態at-rest靜態a：潔凈室（區）在凈化空氣調節系統已安裝完畢且功能完備的情況下，生產工藝設備已安裝、潔凈室（區）內沒有生產人員的狀態。靜態b：潔凈室（區）在生產操作全部結束，生產操作人員撤離現場并經過15～20min（指導值）自凈后的狀態。3.3動態operational潔凈室（區）已處于正常生產狀態，設備在指定的方式下進行，并且有指定的人員按照規范操作。3.4預警值alertlevel用戶設定的參數值,偏離正常條件時可提供早期預警，當超過該值時,宜加強關注或采取糾正措施。43.5干預值actionleve產品設定的參數值,當超過該值時,應要立即干預,查明原因并采取糾正措施。4安全柜的類型和特點4.1安全柜的類型II級生物安全柜按排放氣流占系統總流量的比例及內部設計結構分為A1、A2、B1、B2四種類型，參考GB41918生物安全柜。4.2安全柜的適用范圍根據使用要求宜選擇A2或B2安全柜。A2型安全柜不建議用于病毒、揮發性有毒化學品和放射性核素為輔助劑的微生物操作。B2型安全柜可以用于病毒、揮發性有毒化學品和放射性核素為輔助劑的微生物操作。5要求5.1外觀柜體表面無明顯劃傷、銹斑、壓痕，表面應光潔，無裸露的螺紋、縫隙、孔洞等，避免積塵；外形平整規矩，便于柜體的有效清潔。5.2結構5.2.1柜體安全柜裸露工作區內三面側壁板、操作平臺應為一體成型結構，不允許拼接，工作臺面的厚度不小于1.5mm。5.2.2前窗操作口5.2.2.1前窗操作口的高度宜為250mm，便于樣本操作；5.2.2.2前窗操作口的平衡設計宜采用配重塊方式，并手動開門和關門，若使用電動門，在電動門故障時，應具備應急方案，可手動打開和關閉前窗玻璃門，保證樣本及操作者的安全。5.2.2.3前窗可完全下滑到設備底部，便于清潔玻璃內表面和上部位置。5.2.3風機和風箱應使用2套獨立的風機系統分別控制下降氣流和流入氣流，風箱應為鋼板等硬質結構，無褶皺和堆疊的消殺死角。5.2.4風速監測5.2.4.1應通過風速傳感器分別監測下降氣流和排風氣流（流入氣流）的風速，單位m/s。5.2.4.2具有流向要求的風速傳感器，應有明確的流向標識。5.2.4.3風速傳感器的安裝位置應具有代表性，且不受到紊流或其他因素等的不良影響。5.2.4.4應設定下降風速和排風風速（流入風速）的預警值和干預值。5.2.5壓差監測5.2.5.1應在每個高效空氣過濾器前端安裝壓差計或壓差傳感器，并可以實時顯示當前的壓力值，單位Pa。5.2.5.2壓差監測點應固定，且遠離可能影響測點局部壓力的送風口和回風口。5.2.5.3應設定壓差的預警值和干預值。5.2.6攝像頭監測5.2.6.1產品操作區應配有監控攝像頭，并預留通訊接口，可連接至視頻追溯管理系統；5.2.6.2攝像頭的像素不低于400dpi，體積盡可能小，不得影響下降氣流的流向；5.2.6.3攝像頭應能監控到整個操作區域；5.2.6.4攝像頭若設置在柜內，與柜體的連接處應采用可靠的密封結構，密封處應圓滑過渡，易于清5.2.7支撐底座應有足夠強度的支撐底座保持安全柜的穩定運行，支撐底座無裸露的螺紋、孔和縫隙以保證安全柜的易清潔性。支撐底座的四周應預留足夠的通風空間，避免產生湍流或死角，以保證房間內部的空氣可以順暢流通。5.2.8集液槽安全柜應設集液槽，用于收集工作區的潑濺液體，集液槽下方不宜設置排污閥。注：若設置排污閥，應提供排污閥的清潔方法。5.2.9氣溶膠的導入及濃度采樣口安全柜應預留每個高效空氣過濾器氣溶膠濃度測試的導入口及濃度采樣口，并予以標識。5.2.10插座（若有）工作區域內安裝的插座應提供電路過載保護，并具有清晰的電壓和最大電流標識。5.3顯示和操作系統5.3.1面板顯示5.3.1.1安全柜應實時顯示工作區的下降氣流和流入氣流的流速，氣流流速顯示值應在實測值的土0.025m/s之間，顯示分辨率至少應為0.01m/s。5.3.1.2安全柜應實時顯示每個高效空氣過濾器的壓差，壓差顯示分辨率至少應為1Pa。5.3.2數據完整性（若有）5.3.2.1帶數據記錄或傳輸功能的安全柜，其數據記錄的準確性應當經過驗證；5.3.2.2所有記錄和傳輸數據均不可被修改。5.3.2.3用電子方法保存的批記錄，應當采用磁帶、縮微膠卷、紙質副本或其他方法進行備份，以確保記錄的安全，且數據資料在保存期內便于查閱。5.3.3審計追蹤（若有）5.3.3.1帶系統設置的安全柜，應具備審計追蹤功能。5.3.3.2當修改系統參數時，系統應對修改的日期、時間、修改人、舊值、新值、修改原因進行審計追蹤。5.3.3.3系統日期及時間的修改應設置權限管理和審計追蹤。5.3.3.4審計追蹤應記錄發生、修改或刪除電子記錄的任何事件。5.3.3.5所有審計追蹤的錄入應是電腦生成的日期時間和操作人員姓名。5.3.3.6所有權限的用戶均不得修改或刪除追蹤記錄。5.3.4權限管理（若有）5.3.4.1帶權限管理功能的安全柜，不同級別應具備不同的操作權限，只有經授權的人員方可輸入或更改數據，更改和刪除情況應當有記錄；在關鍵數據輸入后，應由他人獨立復核；5.3.4.2用戶登錄后的一定時間內沒有系統操作，賬戶可以自動退出，系統等待的時間能夠被設置。5.4過濾器壓差報警和紫外燈聯鎖5.4.1高效空氣過濾器壓差報警當高效空氣過濾器壓差超過或低于制造商設定的參數，視覺和聽覺報警器應報警。5.4.2紫外燈聯鎖當前窗玻璃門完全關閉后，才可以開啟紫外燈；當紫外燈工作時，前窗玻璃門打開，紫外燈應自動關閉，并提示滅菌失敗。5.5下降氣流流速5.5.1安全柜下降氣流平均流速應在0.36～0.54m/s之間。5.5.2安全柜的下降氣流最小值不得小于0.36m/s，最大值不得大于0.54m/s。5.6空氣潔凈度性能5.6.1應對柜內的空氣潔凈度進行靜態和動態下的性能驗證，驗證方法為通過確認懸浮粒子的濃度來確定潔凈等級，要求潔凈度級別為A級，懸浮粒子的濃度符合表1中的規定。表1懸浮微粒子的標準潔凈度級別懸浮粒子最大允許數（個/m3）靜態動態A級352035205.6.2應對柜內空氣潔凈度進行動態監測，要求如下：5.6.2.1通過監測懸浮粒子濃度確定空氣潔凈度，包括關鍵操作的全過程；5.6.2.2生產過程中的污染（如活生物、放射危害）可能損壞塵埃粒子計數器時，應當在設備調試操作和模擬操作期間進行測試；5.6.2.3生產操作全部結束、操作人員撤出生產現場并經15～20min（指導值）自凈后，潔凈區的懸浮粒子應當達到表1中的“靜態”標準。5.6.2.4動態監測采樣口5.6.2.4.1安全柜應預留懸浮粒子采樣口并予以標識。5.6.2.4.2采樣口宜放置在產品背部，數量不少于1個，當采樣口數量≥2個時，應對稱布置。5.6.2.4.3采樣口應使用等動力采樣頭，如圖1所示，以減少氣流偏差，從而減少取樣誤差和粒度分布偏差。5.6.2.4.4采樣口應垂直于氣流方向，傾斜角度不得大于20°。5.6.2.4.5采樣管應采用光滑內壁的不銹鋼或TPEE（熱塑性聚酯彈性體）等材質，宜設計為可拆卸結構，易于更換。5.6.2.4.6采樣管長度盡量小，長度不得大于1.5m；彎管半徑大于150mm，以減少粒子在傳輸過程中的損失或沉淀。5.6.2.4.7采樣管在穿過隔板、外殼面板或封閉的潔凈空氣裝置時所使用的連接接頭，其內部尺寸應與采樣管內徑保持一致，以保證氣流傳輸的平穩過渡；5.6.2.4.8采樣管與設備連接處均有密封結構，密封材料應圓滑過渡，易于清潔。圖1等動力采樣和實體變化1——等動力采樣2——超等動力采樣3——亞等動力采樣5.6.3空氣潔凈度的預警和干預5.6.3.1應制定適當的懸浮粒子預警值和干預值，當超過預警值時，應加強關注或采取糾正措施；當超出干預值時，應立即干預，查明原因并采取糾正措施；5.6.3.2當設立新的采樣位置時,采樣頭應重新定位,并制定新的預警值和干預值；5.6.3.3宜對監測系統的性能、所采集的數據、設定的標準值和趨勢等進行定期分析，根據其性能狀況,考慮修改（放寬或收緊）預警值和干預值。5.6.3.4當比較某個采樣時間段的值與下個時間段的值時，采樣位置及探頭的朝向應保持前后一致；5.6.3.5采樣時長需要考慮所允許的風險水平，時長設置的較長,雖可使數據平穩，并能防止可能的“騷擾報警”，但這可能掩蓋不尋常產塵事件所造成的懸浮粒子濃度短時間超標。5.6.3.6當同時監測兩個粒徑,且采樣間隔時間為1min,可參考如下兩種方法：a）以一系列較高的連續讀數觸發閾值，即在一段時間里讀數一直維持在較高的水平(例如,連續3個1min的讀數超過規定值)；8b）由高頻度出現的高讀數觸發閾值,該方法是將高于規定閾值的讀數記錄下來,如果一系列數據中高于規定值的讀數較多時,則觸發預警或干預。5.7微生物性能驗證5.7.1安全柜應對微生物進行靜態和動態下的性能驗證，驗證方法為通過確認浮游菌、沉降菌、表面微生物來確定柜內微生物濃度，要求潔凈度級別為A級，浮游菌、沉降菌、表面微生物符合表2中的規定。表2微生物的標準（1）cfu/4小時（2）單個沉降碟的暴露時間可以少于4小時，同一位置可使5.7.2微生物濃度動態監測5.7.2.1通過對微生物進行動態監測評估無菌生產的微生物狀況，監測方法有沉降菌法、定量空氣浮游菌采樣法和表面取樣法（如棉簽擦拭法和接觸碟法）等，測試方法同微生物濃度性能驗證。5.7.2.2動態取樣應當避免對潔凈區及人員操作造成不良影響。5.7.2.3對表面和操作人員的監測，應當在關鍵操作完成后進行。5.7.2.4微生物監測的動態應當達到表2中的要求。5.7.2.5浮游菌采樣口5.7.2.5.1安全柜應預留浮游菌采樣口并予以標識；5.7.2.5.2浮游菌采樣口數量不少于1個，當采樣口數量≥2個時，應對稱布置；5.7.2.5.3采樣口必須使用便于消毒及化學性能穩定的材料；5.7.2.5.4采樣管嚴謹滲漏，內壁應光滑；5.7.2.5.5采樣管的長度應根據測點的高度確定，盡量減少彎曲；5.7.2.5.6采樣管與設備連接處均有密封結構，密封材料應圓滑過渡，易于清潔。5.7.3微生物濃度預警和干預與5.6.3中的要求一致。5.8噪聲安全柜的噪聲應不超過67dB（A）。6試驗方法6.1外觀通過實際操作或目視檢查，判斷結果是否符合5.1中的要求。6.2結構通過實際操作檢查、通用量具測量或查驗相關文檔和設計資料，判斷結果是否符合5.2中的要求。6.3顯示和操作系統通過實際操作檢查，判斷結果是否符合5.3中的要求。6.4過濾器壓差報警和紫外燈聯鎖通過實際操作檢查，判斷結果是否符合5.4中的要求。6.5下降氣流流速6.5.1儀器6.5.1.1檢測安全柜下降氣流流速的儀器為熱風速儀。6.5.2.2風速儀探針夾具，可準確的定位風速儀探針并且不影響氣流模式(如環狀夾和鉗夾都可以使用)。6.5.2測試方法6.5.2.1安全柜宜在空態下進行，測試平面應垂直于送風氣流，距離高效空氣過濾器出風面150～300mm的水平面上確定測量點位置，測試面劃分為面積相等邊長不大于600×600mm的格柵，測點取在每個柵格的中心。6.5.2.2用夾具將風速儀探針準確定位在各測量點進行測量，在每一風速測點持續測試的有效時間不應少于10s，并應記錄最大值、最小值和平均值。6.5.2.3當生產裝置和工作臺安裝就位，應特別注意氣流的明顯改變情況。因此，風速均勻性的測點不應靠近這些障礙物。6.5.2.4所測數據可能無法表明安全柜本身的特性，用以判定風速均勻性即風速分布的數據，可由供需雙方議定。6.5.6結果應符合5.5的要求。6.6空氣潔凈度6.6.1采樣管6.6.1.1使用采樣管較短的便攜式塵埃粒子計數器，避免≥5.0μm懸浮粒子在遠程采樣系統的長采樣管中沉降，取樣頭應為等動力學的取樣頭。6.6.1.2采樣管必須干凈，嚴謹滲漏。6.6.1.3采樣管道的長度應根據儀器的允許長度，采樣管長度盡可能的短，除另有規定外，長度不得大于1.5米。6.6.1.4粒子計數器采樣口和儀器工作位置宜處于同一氣壓和溫度下，以免產生測量偏差。6.6.2采樣點數目及其布置懸浮粒子采樣點數目及其布置應力求均勻，并不得少于2個，居中對稱布置；在動態測試時，懸浮粒子采樣點數目及其位置應根據產品的生產及工藝關鍵操作區設置。采樣點一般在離地面0.8m高度的水平面上均勻布置。6.6.3采樣次數安全柜工作區內的采樣次數不得少于5次，每個采樣點的采樣次數可以多于1次，且不同采樣點的采樣次數可以不同。6.6.4采樣量每個采樣點的最少采樣時間應為1min，采樣量不應少于1立方米。6.6.5測試狀態和時間安全柜應分別在靜態（靜態a或靜態b）和動態下進行空氣潔凈度的確認。——在靜態a測試時,宜在安全柜正常運行10min后開始。——在靜態b測試時,宜在生產操作人員撒離現場并經過安全柜10min自凈后開始。——在動態測試時,應記錄生產開始的時間以及測試時間，動態測試可在常規操作、無菌工藝模擬試驗過程中進行，證明達到動態的潔凈度級別，但無菌工藝模擬試驗要求在“最差狀況”下進行動態測試。6.6.6測試方法6.6.6.1按照廠家說明書對粒子計數器進行設置，包括調零；6.6.6.2將粒子計數器采樣口迎著氣流方向垂直放置；6.6.6.3取樣前確保安全柜在指定狀態下（靜態、動態）穩定運行；6.6.6.4在每個采樣點進行采樣；6.6.6.5重復以上步驟至所需的采樣次數；6.6.6.6計算所采樣的懸浮粒子數量平均值。6.6.6.7如果確定是異常情況導致采樣點出現OOS（結果超標）計數，那么這個計數可以丟棄，在測試報告中如實備注，并重新采樣。6.6.6.8如果發現取樣點的OOS（結果超標）計數是由于安全柜或者設備的技術失敗造成的，那么要確定原因，采取補救行動，并且在失敗的采樣點上、緊鄰周邊位置和其它任何受影響的位置進行復測，并清晰的記錄和說明。6.6.7數據計算6.6.7.1記錄每一個采樣點的采樣數據，當在一個采樣點進行兩次或更多次采樣時，計算每個采樣點粒子濃度的平均值，單位：個/m3。6.6.7.2計算全部采樣點的粒子濃度平均值，單位：個/m3；6.6.8結果通過數據計算，結果應符合5.6.1的要求。6.6.9空氣潔凈度動態監測通過現場檢查，結果應符合5.6.2的要求。6.6.10空氣潔凈度的預警和干預通過現場檢查，結果應符合5.6.3的要求。6.7微生物性能6.7.1沉降菌法6.7.1.1儀器——培養皿：一般采用φ90×15mm規格；——培養基：大豆瓊脂培養基(TSA)或其他用戶認可并經驗證的品種；——恒溫培養箱：溫度要求為20～25℃、30～35℃。6.7.1.2采樣點位置采樣點均勻分布在工作區，可在關鍵設備或關鍵工作活動范圍處增加測點，盡量避開塵粒較集中的回風口。6.7.1.3采樣點數目培養皿數至少為14個，同一位置可使用多個沉降碟連續進行監測并累積計數。6.7.1.4采樣次數每個采樣點一般采樣一次。6.7.1.5測試狀態和時間安全柜應分別在靜態（靜態a或靜態b）和動態下進行沉降菌的確認。——在靜態a測試時，宜在安全柜系統正常運行時間不少于10min后開始。——在靜態b測試時，宜在生產操作人員撤離現場并經過安全柜正常運行10min后開始。——在動態測試時，應記錄生產開始的時間以及測試時間。6.7.1.6測試方法6.7.1.6.1將已制備好的培養皿按采樣點布置圖迎著氣流方向逐個放置；6.7.1.6.2從里到外逐個打開培養皿蓋，使培養基表面暴露在空氣中，靜態測試暴露時間為30min以上，動態測試暴露時間為4h以上，完成采樣；6.7.1.6.3全部采樣結束后，將培養皿倒置于恒溫培養箱中培養；6.7.1.6.4采用大豆酪蛋白瓊脂培養基（TSA）配制的培養皿，培養溫度30～35℃,培養時間不少于2天；使用沙氏培養基（SDA）配制的培養皿，培養溫度在20～25℃,培養時間不少于5天。6.7.1.6.5培養皿在用于檢測時，為避免培養皿運輸或搬動過程造成的影響，宜同時進行對照試驗，每次或每個區域取1個對照皿，與采樣皿同法操作但不需暴露采樣，然后與采樣后的培養皿(TSA或SDA)一起放入培養箱內培養，結果應無菌落生長；6.7.1.6.6用肉眼對培養皿上所有的菌落直接計數、標記或在菌落計數器上點計，然后用5～10倍放大鏡檢查，是否有遺漏；6.7.1.6.7若平板上有2個或2個以上的菌落重疊，可分辨時仍以2個或2個以上菌落計數。6.7.1.7數據計算6.7.1.7.16.7.1.7.2用計數法得出各個培養皿的菌落數；計算每個測點的平均菌落數；6.7.1.8測試結果6.7.1.8.1對照培養皿應無菌落生長；6.7.1.8.2每個測點的平均菌落數符合5.7.1中的要求；6.7.1.8.3在靜態測試時，若某測點的沉降菌平均菌落數超過評定標準，則應重新采樣兩次，兩次測試結果均合格才能判為合格。6.7.2定量空氣浮游菌采樣法6.7.2.1儀器——培養皿：一般采用φ90mm×15mm規格的培養皿，可根據所選用采樣器選擇合適的培養皿；離心式采樣器采用專用的固形培養條。——培養基：大豆瓊脂培養基(TSA)或沙氏培養基（SDA）或其他用戶認可并經驗證的品種；——恒溫培養箱：溫度要求為20～25℃、30～35℃。6.7.2.2采樣點位置采樣點位置離地0.8～1.5m左右（略高于工作面），均勻布置，可在關鍵設備或關鍵工作活動范圍處增加測點，盡量避開塵粒較集中的回風口。6.7.2.3采樣點數目與6.6.2的懸浮粒子采樣點數目一致。6.7.2.4采樣次數和采樣量每個采樣點一般采樣一次，每次最小采樣量為1000L。6.7.2.5測試狀態和時間安全柜應分別在靜態（靜態a或靜態b）和動態下進行浮游菌的確認。——在靜態a測試時，宜在安全柜系統正常運行時間不少于10min后開始。——在靜態b測試時，宜在生產操作人員撤離現場并經過安全柜正常運行10min后開始。——在動態測試時，應記錄生產開始的時間以及測試時間。6.7.2.6測試方法見6.7.1.6。6.7.2.7數據計算見6.7.1.7。6.7.2.8測試結果6.7.2.8.1對照培養皿應無菌落生長；6.7.2.8.2每個測點的浮游菌平均濃度必須符合5.7.1中的要求；6.7.2.8.3在靜態測試時，若某測點的浮游菌平均菌落數超過評定標準，則應重新采樣兩次，兩次測試結果均合格才能判為合格。6.7.3表面微生物采樣法6.7.3.1儀器——培養皿：一般采用φ55×15mm規格的培養皿，可根據所選用采樣器選擇合適的培養皿；離心式采樣器采用專用的固形培養條。——培養基：大豆瓊脂培養基(TSA)或沙氏培養基（SDA）或其他用戶認可并經驗證了的培養基；——恒溫培養箱：溫度要求為20～25℃、30～35℃。6.7.3.2采樣點位置采樣點應分布在關鍵設備或