ICS?FORMTEXT點擊此處添加ICS號FORMTEXT點擊此處添加中國標準文獻分類號FORMTEXT?????DBFORMTEXT??DBFORMTEXTXX/FORMTEXTXXXXX—FORMTEXTXXXXFORMTEXT?????FORMTEXT動物源性食品中金剛烷胺的檢測量子點微球熒光免疫層析法FORMTEXTDeterminationofamantadineresidueinanimalderivedfoodQuantumdotmicrospherelateralflowimmunoassayFORMTEXT點擊此處添加與國際標準一致性程度的標識FORMDROPDOWNFORMTEXT?????FORMTEXTXXXX-FORMTEXTXX-FORMTEXTXX發布FORMTEXTXXXX-FORMTEXTXX-FORMTEXTXX實施FORMTEXT????????發布DBXX/XXXXX—XXXX前言 II1范圍 12規范性引用文件 13術語和定義 14原理 15試劑和材料 16儀器和設備 27試樣制備 28檢測步驟 39結果表述 310其他 4前??言本文件按照GB/T1.1-2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結構和起草規則》的規定起草。請注意本文件的某些內容可能涉及專利。本文件的發布機構不承擔識別專利的責任。本文件由江西省市場監督管理局提出并歸口。本文件起草單位：南昌大學、江西省市場監督管理局、江西省檢驗檢測認證總院、江西維邦生物科技有限公司本文件主要起草人：動物源性食品中金剛烷胺的檢測量子點微球熒光免疫層析法范圍本文件規定了動物源性食品中金剛烷胺殘留量的量子點微球熒光免疫層析檢測方法。本文件適用于雞肉、雞蛋和豬肉中金剛烷胺的快速檢測。本方法檢測金剛烷胺的檢出限為0.1μg/kg，定量限為0.3μg/kg。規范性引用文件下列文件對于本文件的應用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB31650食品安全國家標準食品中獸藥最大殘留限量GB/T6682分析實驗室用水規格和試驗方法GB/T27417合格評定化學分析方法確認和驗證指南術語和定義本文件沒有需要界定的術語和定義。原理本方法以量子點微球為熒光標記物，基于競爭抑制免疫層析技術原理，通過熒光信號讀取儀進行數據讀取和分析，根據已設定的標準曲線計算樣品中待測物質的含量，對動物源性食品中金剛烷胺進行半定量或定量檢測。試劑和材料除另有說明外，所用試劑均為分析純水：應符合GB/T6682，二級水。金剛烷胺標準物質：純度≥99%，或經國家認證并授予標準物質證書的標準物質。甲醇（CH3OH）。乙酸乙酯(CH3COOC2H5)。正己烷(C6H14)。二水合磷酸二氫鈉（NaH2PO4·2H2O）。十二水合磷酸氫二鈉（Na2HPO4·12H2O）。氯化鈉（NaCl）。磷酸二氫鉀（KH2PO4）。氯化鉀（KCl）。鹽酸（HCl）。氫氧化鈉（NaOH）。樣本提取劑A：稱取8.0g氯化鈉（5.8）、0.2g磷酸二氫鉀（5.9）、0.2g氯化鉀（5.10）、2.9g十二水合磷酸氫二鈉（5.7），加入約500mL水（5.1）溶解，再加入鹽酸（5.11）溶液0.5mL，加水（5.1）定容至1L。樣本提取劑B：稱取20.0g氫氧化鈉（5.12），加入約900mL水（5.1）溶解混勻，定容至1L。樣本復溶液磷酸鹽緩沖液（10mmol/L，pH7.4）：稱取8.0g氯化鈉（5.8）、2.77g十二水合磷酸氫二鈉（5.7）、0.352g二水合磷酸二氫鈉（5.6），用水（5.1）溶解并定容至1L。金剛烷胺標準品儲備液（100μg/mL）：準確稱取10mg（精確至0.01mg）金剛烷胺（5.2）于燒杯中，用甲醇（5.3）溶解后轉移至100mL容量瓶中，用甲醇（5.3）稀釋至刻度，搖勻。-20℃冷凍避光保存，有效期3個月。儀器和設備分析天平：感量分別為0.01g和0.01mg。微量移液器：20～200μL、100～1000μL和1～10mL。旋渦混合器：轉速≥2500r/min。恒溫孵育器：設定溫度誤差不超過±1度。熒光免疫分析儀：激發波長為365±5nm，發射波長為610±5nm。樣品濃縮儀：設定溫度誤差不超過±1度。攪碎機：轉速≥5000r/min。離心管：1.5mL和50mL。金剛烷胺量子點微球熒光免疫層析快速檢測試劑盒（一般含檢測卡和ID卡，內設對應批次標準曲線）。試樣制備試樣準備稱取約200g具有代表性的禽肉組織樣品，充分均質混勻，分別裝入潔凈容器作為試樣和留樣，密封，標記。留樣置于-20℃保存。試樣前處理準確稱取試樣2g（精確至0.01g）均質樣本于50mL離心管中。加入2mL樣本提取劑A（5.13），渦旋振蕩2min，加入1mL樣本提取劑B（5.14），渦旋振蕩30s，最后加入4mL乙酸乙酯（5.4），手動振蕩混勻30s，靜置1min，待溶液分層。準確吸取2mL上清液于10mL離心管中，于65℃用樣品濃縮儀（6.6）吹干。加入1mL正己烷（5.5），完全溶解后再加入500μL樣本復溶液（5.15），輕輕顛倒混勻，確保離心管壁上的殘留均能被樣本復溶液混勻（請勿振蕩）。靜置1min，溶液分層后吸取下層液體用于檢測。注：不同廠家檢測卡所用的樣品前處理方法可能不同，應按照產品使用說明中規定方法進行操作。檢測步驟測試前打開熒光免疫分析儀（6.5），確認試劑盒中的ID卡與試劑盒的批號是否匹配后插入ID卡，在儀器測試界面點擊“讀ID卡/讀項目”，界面出現“讀取完成”，點擊“確認”即可使用。將恒溫孵育器（6.4）開機，待溫度升至37℃即可使用。從包裝鋁箔袋中取出檢測卡，在半小時內使用。將檢測卡平放，用微量移液器吸取90μL稀釋后的待測液于檢測卡的加樣孔（S）中，在恒溫孵育器中37℃孵育反應10min。反應時間結束后立即將檢測卡插入讀取儀中，點擊儀器界面的“測試”，儀器會自動給出定量測試結果，15min后測試無效。注：不同廠家讀卡儀所用儀器界面設置可能不同，應按照儀器使用說明中規定方法進行。結果表述樣品中金剛烷胺的含量由熒光分析儀自動計算并顯示，單位為微克/千克（μg/kg）。其他本方法參比標準為GB31660.5《食品安全國家標準動物性食品中金剛烷胺殘留量的測定液相色譜-串聯質譜法》。注：性能指標計算方法見附錄A。附錄A（資料性）產品性能指標計算A.1檢出限和定量限通過對20個獨立的空白樣品進行測定，檢出限以空白樣品20次測定結果的均值加3倍標準偏差計算；定量限以空白樣品20次測定結果的均值加10倍標準偏差計算。A.2準確度綜合考慮目標分析物國家標準限量值或禁用目標分析物的參比方法定量限，制備低、中、高三個濃度水平的盲樣，每個濃度水平進行至少6次重復實驗。三個濃度水平的平均加標回收率應在70-130%（需討論確定）。A.3重復性采用三批驗證產品進行檢測，每批至少6次重復測定中等濃度水平的樣品，相對標準偏差（RSD）應小于15%。A.4特異性目標分析物及其結構類似物的標準品用緩沖液配制成系列梯度濃度，做出標準曲線，得出I