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13一、申請人名稱鄭州安圖生物工程股份有限公司二、申請人住所鄭州經濟技術開發區經北一路87號三、生產地址鄭州經濟技術開發區經開第十五大街199號一、產品概述（一）產品主要組成成分表1.產品主要組成成分123具體內容詳見產品說明書。（二）產品預期用途本試劑盒用于體外定性檢測痰液樣本中的鮑曼不動桿菌/嗜麥芽窄食單胞菌/洋蔥伯克霍爾德菌核酸。用于臨床呼吸系統感染重癥、結構性肺病等人群的輔助診斷，檢測結果不直接用于指導抗生素的使用。臨床診斷應結合病原體培養鑒定。（三）產品包裝規格24測試/盒(A)，48測試/盒(A)，96測試/盒(A)。（四）產品檢驗原理本試劑盒分別針對Aba/Sma/Bcc的核酸保守區設計特異性引物和探針，應用實時熒光PCR技術分別對Aba/Sma/BccDNA進行擴增，并使用適用儀器全自動完成Aba/Sma/BccDNA的定性檢測。試劑盒設置人β-珠蛋白基因作為內標，在采集的痰液樣本中含有人β-珠蛋白基因，通過內標監測提取和擴增過程，二、臨床前研究概述（一）主要原材料1.主要原材料的選擇本產品的主要原材料包括引物、探針、dNT聚合酶、尿嘧啶糖基化酶、蛋白酶K。主要原材料均為外購方式獲得，申請人通過功能性試驗，確定了最佳原材料和供應商，制定了各主要原材料質量要求并經檢驗合格。2.企業參考品設置情況本產品企業參考品包括陽性參考品、陰性參考品、精密度參考品、最低檢出限參考品。陽性參考品10份，由試劑盒可檢出的各病原體主要型別陰性參考品10份，由試劑盒檢測范圍外的病原體培養物精密度參考品3份，由中強陽性、臨界陽性濃度水平的病原體培養物和陰性臨床樣本組成。最低檢出限參考品4份，由試劑盒可檢出的病原體主要型別的培養物和陰性臨床樣本組成。（二）生產工藝及反應體系研究申請人通過對試劑主要生產工藝的研究，確定了最佳生申請人對反應體系中的引物探針濃度、dNTP濃度、雙功能DNA聚合酶濃度、尿嘧啶糖基化酶濃度、Mg2+濃度、反應體積、反應條件、各組分加樣量、樣本用量等進行篩選和優化驗證，最終確定了最佳反應體系。（三）分析性能評估分析性能評估主要包括：企業參考品符合率、最低檢出核酸提取純化性能等。申請人提交了質量管理體系下生產的三批產品在適用機型上的性能評估資料。申請人采用3批試劑盒對企業參考品在所有適用機型上進行檢驗，結果均符合相應企業參考品的要求。在最低檢出限研究中，申請人使用3批試劑盒對試劑盒檢測范圍內的三種病原體不同型別梯度稀釋的臨床樣本進行檢測，以檢出率≥95%時所對應的濃度水平作為本試劑盒的最低檢出限；然后采用3批成品試劑盒對稀釋至最低檢出限水平的各亞型樣本進行最低檢出限驗證。最終確定本試劑盒的最低檢出限為：鮑曼不動桿菌為500CFU/mL，嗜麥芽窄食單胞菌為500CFU/mL，洋蔥伯克霍爾德菌為500CFU/mL。在精密度研究中，申請人使用三批試劑盒，由不同操作者分別在不同實驗室對檢測范圍內的三種病原體不同濃度（強陽性、中陽性、弱陽性）臨床陽性樣本和陰性樣本進行20天的試驗。結果表明，強陽性、中陽性、弱陽性樣本檢測結果均為對應病原體陽性且檢測結果的Ct值的CV≤5.0%，陰性樣本檢測結果均為陰性。分析特異性研究包含交叉反應研究和干擾研究。在交叉呼吸道常見病原體、近源病原體等檢測范圍外的41種病原體，包括大腸埃希菌、粘質沙雷氏菌、糞腸球菌、白色念珠菌、化膿鏈球菌、滕黃微球菌、馬紅球菌、瓊氏不動桿菌、產氣腸桿菌、溶血嗜血桿菌、肺炎支原體、肺炎衣原體、腦膜炎奈瑟菌、光滑念珠菌、熱帶念珠菌、魯氏不動桿菌、溶白喉棒狀桿菌、唾液鏈球菌、嗜酸乳桿菌、百日咳桿菌、甲型流感病毒、乙型流感病毒、新型冠狀病毒、副流感病毒、白假絲酵母菌、黃曲霉菌、土曲霉菌、煙曲霉菌、結核分枝桿菌、肺孢子菌進行交叉反應評價，結果表明無交叉反應。在競爭性干擾研究中，申請人使用3批試劑盒對試劑盒檢測范圍內的三種病原體間的競爭性干擾進行評估，研究高濃度靶病原體對低濃度靶病原體的檢測干擾情況，結果顯示試劑盒檢測范圍內各病原體間不存在競爭干擾。在干擾研究中，申請人使用3批試劑盒對內外源干擾物質進行研究。結果表明，使用臨界陽性水平進行檢測，粘蛋白、1%(v/v)血液、氯化鈉、血紅素、美羅培南、亞胺培南、頭孢哌酮舒巴坦、莫西沙星、阿米卡星、利奈唑胺、萬古霉素、地塞米松、鹽酸組胺、薄荷腦、奧司他韋、莫匹羅星、妥布霉素等不會影響試劑盒檢測結果的判定。在包容性研究中，申請人對不同來源、不同分型、不同耐藥的臨床樣本進行了包容性研究。臨床樣本包括鮑曼不動和10種耐藥分離株（哌拉西林、哌拉西林-他唑巴坦、環丙沙星、頭孢他啶、美羅培南、亞胺培南、慶大霉素、氨芐西林-舒巴坦、頭孢吡肟、左氧氟沙星）、嗜麥芽窄食單胞菌9種ST型別（ST4、ST25、ST29、ST31、ST233、ST23、ST5、ST15、ST24）和4種耐藥分離株（頭孢他啶、頭孢哌酮-舒巴坦、氯霉素、左氧氟沙星）、洋蔥伯克霍爾德菌7種ST型別（ST363、ST258、ST309、ST102、ST10、ST608、ST450）和4種耐藥分離株（替卡西林/克拉維酸、左氧氟沙星、美羅培南、氯霉素）。結果表明試劑盒包容性滿足要求。申請人進行了核酸提取純化性能的研究，確定配合使用的核酸提取或純化試劑盒符合要求。（四）陽性判斷值研究申請人收集不同來源的痰液樣本進行陽性判斷值的建立和驗證研究。其中陽性判斷值建立共納入已確認三種病原體陰陽性性質的344例臨床樣本，采用ROC曲線法進行統計分析。通過分析，確定鮑曼不動桿菌陽性判斷值為35，嗜麥芽窄食單胞菌陽性判斷值為34，洋蔥伯克霍爾德菌陽性判斷值為34。同時納入與建立過程不同的鮑曼不動桿菌、嗜麥芽窄食單胞菌和洋蔥伯克霍爾德菌臨床樣本，采用與對比方法比對的方式進行陽性判斷值的驗證，結果顯示本試劑盒陽性判斷值建立合理。（五）穩定性研究申請人對本產品實時穩定性、運輸穩定性、使用穩定性和樣本穩定性進行了系統的研究，確定了在各種條件下本產品及樣本的有效保存時間。分別在0、3、6、8、10、12、14個月進行穩定性考察，各項性能指標均符合要求，確定產品在2～8℃條件下有效期為12此外，申請人對產品的使用穩定性、運輸穩定性和樣本穩定性分別進行了研究。結果顯示，產品性能均能滿足產品說明書聲稱。三、臨床評價概述申請人在河南省人民醫院、河南省兒童醫院鄭州兒童醫院、寧波市醫療中心李惠利醫院和南陽市中心醫院共4家機構完成了臨床試驗。采用試驗體外診斷試劑與已上市同類產品或臨床參考方法一代測序進行比較研究，確認本產品的臨床性能。樣本類型為痰液。針對鮑曼不動桿菌檢測，采用試驗體外診斷試劑與已上市同類產品進行比較研究，確認本產品的臨床性能。對比試劑為寧波基內生物技術有限公司生產的鮑曼不動桿菌耐碳青霉烯類抗生素基因（OXA23）檢測試劑盒（熒光PCR法）。共納入病例993例，其中陽性病例204例，陰性病例789例，試驗結果顯示，陽性符合率為99.02%（95%CI：96.50%，針對嗜麥芽窄食單胞菌的檢測，采用試驗體外診斷試劑與一代測序方法進行比較研究，共納入993例，其中陽性病例191例，陰性病例802例；試驗結果顯示，陽性符合率為99.48%（95%CI：97.09%，99.91%），陰性符合率為99.38%（95%CI：98.55%，99.73%）。同時進行了與已上市產品的比較研究，對比試劑為成都博奧晶芯生物科技有限公司的呼吸道病原菌核酸檢測試劑盒（恒溫擴增芯片法），共納入30098.48%（95%CI：95.64%，99.48%）。針對洋蔥伯克霍爾德菌的檢測，采用試驗體外診斷試劑與一代測序方法進行比較研究，共納入993例，其中陽性病例165例，陰性病例828例；試驗結果顯示，陽性符合率為99.39%（95%CI：96.65%，99.89%），陰性符合率為99.28%（95%CI：98.43%，99.67%）。同時申請人開展了與培養鑒定的比較研究，共納入陽性121例，陰性996例，試驗結果顯（95%CI：92.99%，95.82%）。以上結果顯示，試驗體外診斷試劑與對比方法一致性較好，臨床試驗資料符合技術審評要求。四、產品受益風險判定申請人對已知危險（源）進行風險評價，按照風險可接受準則判斷每個危險（源）的風險是否達到可接受水平，對合理可行降低的風險、不經過風險/收益分析既判定為不可接受的風險采取控制措施，并對具體措施進行實施驗證，同時重新對采取措施后的風險進行估計，確認其風險水平是否可接受。但為保證用械安全，基于對主要剩余風險的規避，需要在說明書中提示以下信息：1.本產品檢測結果僅供臨床參考，不應作為臨床診治的唯一依據，對患者的臨床管理應結合其癥狀/體征、病史、其他實驗室檢查、治療反應等信息綜合考慮。2.本產品使用尿嘧啶糖基化酶，減少了擴增污染的概率。但是樣本間的交叉污染只能通過良好的實驗室管理和嚴格遵守本說明書的操作來避免。3.檢測結果可能受樣本收集、處理、運送及保存質量的《體外診斷試劑注冊與備案管理辦法》（國家市場監督管理總局令第48號）等相關醫療器械法規與配套規章，經對申請人提交的注冊申報資料進行系統評價，申報產品符合安全性、有效性的要求，符合現有認知水平，建議準予注冊。附件：產品說明書鮑曼不動桿菌/嗜麥芽窄食單胞菌/洋蔥伯克霍爾德菌核酸檢測試劑盒（PCR-熒光探針法）說明書【產品名稱】【包裝規格】【預期用途】本試劑盒用于體外定性檢測痰液樣本中的鮑曼不動桿菌/嗜麥芽窄食單胞菌/洋蔥伯克霍爾德菌核酸。用于臨床呼吸系統感染重癥、結構性肺病等人群的輔助診斷，檢測結果不直接用于指導抗生素的鮑曼不動桿菌（Acinetobacterbauma引起呼吸道、血液、尿路、皮膚軟組織和中樞神經系統等部位的感染。孢的革蘭陰性桿菌，已成為目前重要的機會致病菌。該菌可以引起下呼吸道感染、慢性阻塞性肺疾病的急性加重并能推動某些癌癥的發生發展，如阻塞性肺癌。洋蔥伯克霍爾德菌（Burkholderiacepacia,Bcc）是一種革蘭氏陰性、運動性和需氧菌，具有非發酵特性，是一種機會性病原體，主要在免疫低下人群中引起疾病。由其引起的較嚴重的疾病包括肺炎或其他細菌感染疾病?！緳z驗原理】【主要組成成分】編號組分名稱主要成分24測試/盒(A)/盒(A)/盒(A)1試劑條（含有探針、引物、雙功能DNA聚合2（含有鎂離子、引物）3蛋白酶K（含有蛋白酶K）1.不同批號試劑盒中各組分不可以互換，組分所標示試劑量為【儲存條件及有效期】2.試劑盒應避免強光照射。3.本試劑盒應2℃~8℃運輸。也可以8℃~30℃運輸不超過4天。4.試劑盒開瓶后，在2℃~8℃儲存的有效期為21天；8℃~5.試劑盒生產日期及失效日期：見產品外包裝?！具m用儀器】【樣本要求】1.樣本類型：痰液。2.樣本采集：以清晨第一口痰為宜，先用清水漱口，患者用力咳出深部的痰于無菌樣本保存管，密封，即可送檢。采集3.樣本處理：按照痰液樣本處理試劑說明書對樣本進行前處理。4.樣本保存：采集后樣本可立即進行處理，如不能及時檢測，可在2℃~8℃保存不超過48小時，可于-20℃及以下保存【檢驗方法】本節列出了運行檢測的基本步驟，詳細說明請參見適用儀1.樣本處理使用痰液樣本處理試劑對樣本進行前處理：取痰液樣本，加入4倍痰3.錄入樣本或質控品信息以及裝載樣本:4.開始檢測：步驟溫度(℃)時間循環數1尿嘧啶糖基化酶處理50.012預變性95.013擴增循環95.060.022s（采集熒光）擴增檢測階段，儀器運行至靶標通道陽性判斷值循環后，如該靶標通道未檢測到明顯擴增信號，可直接報該靶標陰5.結果分析：【陽性判斷值】【檢驗結果的解釋】通道檢測標準結果判定Ct值≤35，且檢測到典型的S型擴增曲線Ct值≤34，且檢測到典型的S型擴增曲線Ct值≤34，且檢測到典型的S型擴增曲線（內標）Ct值≤35，且檢測到典型的S型擴增曲線內標陽性內標陰性【檢驗方法的局限性】2.本產品使用尿嘧啶糖基化酶，減少了擴增污染的概率。但是樣本間的交叉污染只能通過良好的實驗室管理和嚴格遵守3.檢測結果可能受樣本收集、處理、運送及保存質量的影響?！井a品性能指標】）；）；4.精密度：檢測鮑曼不動桿菌國家重復性參考品，符合要求；檢測鮑曼不動桿菌/嗜麥芽窄食單胞菌/洋蔥伯克霍爾德菌企業精密度瓊氏不動桿菌、產氣腸桿菌、溶血嗜血桿菌、肺炎支原體、肺炎衣原體、腦膜炎奈瑟菌、光滑念珠菌、熱帶念珠菌、魯氏不動桿菌、溶血不動桿菌、金黃色葡萄球菌、耐甲氧西林金黃色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌、銅綠假單胞菌、流感嗜血桿菌、肺炎鏈球菌、嗜肺軍團菌、卡他莫拉菌、表皮葡萄球菌、假白喉棒狀桿菌、白喉棒狀桿菌、唾液鏈球菌、嗜酸乳【注意事項】下呼吸道病原體核酸檢測質控品對實驗室擴4.本試劑盒組分內含有化學試劑及防腐劑等，具有一定的化學危害，不應接觸皮膚或粘膜。如有任何試劑接觸到皮膚或粘膜，需立即使用大量清水對該部位擴大清洗后消毒。所有樣本及使用后的試劑盒應視為潛在的傳染性物質，廢棄處理時，按照當地政府和國家有關規定進行。5.試劑盒請在外包裝標示的有效期內使用。剩余試劑要及時密封，2℃~8℃條件下保存。6.臨床實驗室應嚴格按照當地政府要求配備設備及操作人員，應嚴格按照說明書要求進行操作。7.使用儀器自動操作，測試樣本需考慮樣本容器死體積，具體參考相應