第二章阿奇霉素亞微乳滴眼液的處方設(shè)計(jì)及制備工藝研究4.1.4抗氧劑的種類(lèi)和用量的選擇我們僅以VE和L-半胱氨酸作為油溶性及水溶性抗氧劑的代表，分別對(duì)其不同用量進(jìn)行了為阿奇霉素亞微乳滴眼液中的抗氧劑。分別制備了含0%、0.02%、0.05%和0.1%VE的阿奇霉素亞微乳滴眼液，然后將制備好的各乳劑置于80℃恒溫水浴中12小時(shí)后分別測(cè)定每一乳劑樣品中阿奇霉素的含量，圖2-5表示各個(gè)乳劑在80℃加熱12小時(shí)后藥物含量變化情況。圖2-5不同VE用量的阿奇霉素亞微乳滴80℃恒溫水浴加速12小時(shí)后阿奇霉素的含量(零時(shí)含量為100%)乳劑中的磷脂和MCT均會(huì)發(fā)生不同程度的水解和氧化，繼而產(chǎn)生許多游離脂肪酸以及相應(yīng)的水解氧化物135]。這些產(chǎn)物的存在可能會(huì)影響阿奇霉素在亞微乳劑中的存在以及分布狀沈陽(yáng)藥科大學(xué)碩士學(xué)位論文第二章阿奇霉素亞微乳滴眼液的處方設(shè)計(jì)及制備工藝研究態(tài)，可能會(huì)促進(jìn)阿奇霉素的解離從而使阿奇霉素從油相中向油水界面膜及水相轉(zhuǎn)移，最終導(dǎo)致在游離脂肪酸的作用下阿奇霉素的含量明顯下降。因此，在阿奇霉素亞微乳滴眼液中加入抗氧劑是十分必要的。隨著VE的加入，在加速條件下阿奇霉素的降解變得緩慢，當(dāng)VE的用量為0.02%,阿奇霉素的降解為17.1%,當(dāng)VE的用量為0.05%時(shí)，阿奇霉素的降解不超過(guò)10%,推測(cè)VE的抗氧作用可能存在劑量依賴(lài)性。但隨著VE的用量增至0.1%時(shí)，阿奇霉素發(fā)生了更為嚴(yán)重的降解，含量減少了25.6%。這可能是由于過(guò)量的VE不但沒(méi)有起到抗氧化的作用反而會(huì)促進(jìn)磷脂以及MCT的氧化水解，從而使阿奇霉素的降解表現(xiàn)更為突出。從以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出在高溫試驗(yàn)中0.05%的VE具有足夠的抗氧化作用，而且第三章制劑的穩(wěn)定性研究結(jié)果也證明了以0.05%的VE作為抗氧劑的阿奇霉素亞微乳滴眼液的長(zhǎng)期穩(wěn)定性良好。因此，最終選擇在阿奇霉素亞微乳滴眼液中僅以0.05%(w/v)的VE做4.1.5pH值的調(diào)節(jié)通常，在乳劑制備過(guò)程中都要對(duì)pH值進(jìn)行調(diào)節(jié)，本實(shí)驗(yàn)中pH的選擇主要考慮以下幾①使亞微乳劑的pH值范圍在正常眼可耐受的范圍內(nèi)pH5.0～9.0,pH6.0～8.0時(shí)無(wú)不②保證亞微乳劑的化學(xué)穩(wěn)定性，避免阿奇霉素的降解；③保證亞微乳劑的外觀等物理穩(wěn)定性良好；④對(duì)于載藥的亞微乳劑來(lái)說(shuō)pH值也會(huì)對(duì)藥物的解離形式產(chǎn)生影響，從而改變藥物在亞微乳劑中各相的分布，藥物較多的存在于油相和界面層中才能保證劑型的特點(diǎn)，否則就違背了本課題立題目的的初衷。研究了pH值對(duì)阿奇霉素亞微乳滴眼液的影響。實(shí)驗(yàn)方法為：按照優(yōu)化處方及方法制備阿7.5、8.0后的初乳進(jìn)行高壓均質(zhì)，灌封。分別考察樣品外觀、包封率以及不同pH值樣品在實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明阿奇霉素亞微乳滴眼液的外觀隨pH值的不同有所變化，pH值較低時(shí)乳劑在安瓿內(nèi)壁均勻鋪展、隨后緩慢散開(kāi)。隨著pH值的增加，乳劑不掛壁、隨安瓿旋轉(zhuǎn)沿其內(nèi)壁迅速滑下。第二章阿奇霉素亞微乳滴眼液的處方設(shè)計(jì)及制備工藝研究圖2-6阿奇霉素亞微乳滴眼液80℃水浴加熱48小時(shí)降解動(dòng)力學(xué)的logk-pH曲線(xiàn)圖Fig.2-6Thelogk-pHprofileforthedegradationofAZEina80℃waterbathfor4圖2-7不同pH值對(duì)阿奇霉素亞微乳滴眼液包封率的影響Fig.2-7InfluenceofEE(%)ofAZIEwithdifferentpHvalues當(dāng)pH<7.0或pH>7.0時(shí)，曲線(xiàn)的斜率均小于1,提示除了酸堿催化，還有其他因素參與反奇霉素在亞微乳劑中的降解屬于兩相反應(yīng)模型，即界面相和水相中藥物共同參與水解反第二章阿奇霉素亞微乳滴眼液的處方設(shè)計(jì)及制備工藝研究應(yīng)，則有方程：別，如圖2-7所示，隨著pH值的增加，阿奇霉素亞微乳的包封率呈現(xiàn)明顯上升的趨勢(shì)，霉素亞微乳滴眼液的pH值定為7.0,這個(gè)pH值既有利于亞微乳劑的穩(wěn)定，而且也保證了4.1.6抑菌劑的考察由于阿奇霉素亞微乳滴眼劑為多劑量包裝，制劑一旦開(kāi)封后，容易在使用和保存過(guò)程中被淚液及空氣中的微生物污染，從而產(chǎn)生安全性隱患。為了防止阿奇霉素亞微乳滴眼劑在使用過(guò)程中被微生物污染，應(yīng)加入一定的防腐劑。單一的抑菌劑經(jīng)常因?yàn)樘幏絧H值不合適，同時(shí)其與其他成分有配伍禁忌，不能達(dá)到速效的目的，因此我們采用復(fù)合的抑菌劑發(fā)揮協(xié)同作用從而保證抑菌效果，參照美國(guó)InSiteVision公司生產(chǎn)的商品名為AzaSite的阿奇霉素滴眼液以及相關(guān)文獻(xiàn)中抑菌劑的用法用量，最終確定0.003%(w/v)的苯扎溴銨和根據(jù)臨床上普遍使用的脂肪乳劑所含的種類(lèi)，本制劑選擇甘油作為等滲調(diào)節(jié)劑，通過(guò)測(cè)定含有不同用量甘油的制劑的滲透壓結(jié)果可知，當(dāng)甘油的用量為2.2%時(shí)，其滲透壓為290mosm/kg,與0.9%NaCl溶液的滲透壓相當(dāng)，最終確定2.2%(w/v)的甘油作為阿奇霉素亞微乳滴眼液的等滲調(diào)節(jié)劑。4.1.8載藥量的考察本研究根據(jù)以上確定的處方，即MCT8.5%,VE0.05%,大豆磷脂1.8%,F680.4%,Tween-800.4%,EL-400.3%,硬脂胺0.3%,EDTA-2Na0.05%,甘油2.2%,苯扎溴銨0.003%分別制備載藥量0.3%和1.0%的阿奇霉素亞微乳滴眼液。兩種載藥量的阿奇霉素亞微乳滴沈陽(yáng)藥科大學(xué)碩士學(xué)位論文第二章阿奇霉素亞微乳滴眼液的處方設(shè)計(jì)及制備工藝研究藥量100mg/10mL。這一方面是由于溶解度試驗(yàn)中是直接將阿奇霉素加到油中，水浴恒溫?fù)u床振蕩待阿奇霉素溶解平衡后樣品測(cè)得數(shù)據(jù)，而本研究中是先用無(wú)水乙醇溶解阿奇霉素，后與油相混合再揮去乙醇的方法，這種藥物的加入方法提高了制劑的載藥量；另一方面本研究是將1.8%的大豆磷脂與阿奇霉素一起溶于油相，大豆磷脂增加了阿奇霉素在油相中的溶解度。本研究正是由于阿奇霉素和大豆磷脂這種特殊的加入方式的確定，才可以使阿奇霉素亞微乳滴眼液最終能夠達(dá)到藥用的規(guī)格(100mg/10mL)。粒度測(cè)定結(jié)果表明，載藥量分別為0.3%和1.0%的兩種不同規(guī)格的阿奇霉素亞微乳滴眼液平均粒徑無(wú)明顯差別，在亞微乳劑中除了被乳化的小油滴以外，還觀察到了由磷脂所構(gòu)成的小囊泡(SmallUnilamellarVesicles,SUVs)的存在，這些小囊泡的粒徑約為50~100nm。由圖2-8可見(jiàn)，隨著載藥量從0.3%增加到1.0%,SUVs的比例逐漸由56.2%減小到12.2%。這種現(xiàn)象產(chǎn)生的原因是由于伴隨著高壓均質(zhì)過(guò)程將較高能量輸入至亞微乳系統(tǒng)中，過(guò)剩的大豆磷脂被充分地利用以增溶尚未溶解的藥物。但由實(shí)驗(yàn)結(jié)果看，即使阿奇霉素亞微乳滴眼液的載藥量增大到1.0%,也并未完全消除SUVs的存在。有報(bào)道證明，SUVs的存在對(duì)亞微乳劑的穩(wěn)定性無(wú)明顯影響，本研究第三章中阿奇霉素亞微乳滴眼液穩(wěn)定性的研究結(jié)果也充分證明了這一點(diǎn)。另外，本實(shí)驗(yàn)還對(duì)載藥量分別為0.3%和1.0%的兩種不同規(guī)格的阿奇霉素亞微乳滴眼液不同pH條件下的zeta電位的影響進(jìn)行了考察，結(jié)果見(jiàn)圖2-9。傳統(tǒng)的亞微乳劑中乳滴的負(fù)電荷主要來(lái)自于磷脂中的PC。由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，與傳統(tǒng)的亞微乳劑所帶電荷不同，硬脂胺的加入使亞微乳劑乳滴帶有正電荷，這種正電荷的大小主要取決于硬脂胺在油水界面膜沈陽(yáng)藥科大學(xué)碩士學(xué)位論文第二章阿奇霉素亞微乳滴眼液的處方設(shè)計(jì)及制備工藝研究上的電離程度。隨著載藥量從0.3%增加到1.0%,zeta電位呈現(xiàn)出了明顯的上升趨勢(shì)。這是由于阿奇霉素的含氮堿基可與氫離子形成帶正電荷的復(fù)合物，從而產(chǎn)生一定量的正電荷，載藥量增大也促使形成的正電荷增多。在相同的pH條件下，阿奇霉素形成的正電荷復(fù)合物的多少就成為了影響亞微乳劑乳滴zeta電位大小的主導(dǎo)因素。但是在不同的pH值條件下，相同載藥量的阿奇霉素亞微乳劑乳滴所帶的正電荷并沒(méi)有顯示出明顯的差別，推測(cè)這種現(xiàn)象的原因可能是pH值的變化影響了磷脂組分中PC的電離程度，而一定程度上也會(huì)改變藥物和硬脂胺產(chǎn)生的正電荷的多少，這種復(fù)雜的相反的作用結(jié)果使得在不同的pH條件下，載藥量相同的阿奇霉素亞微乳劑乳滴所帶的正電荷基本上保持穩(wěn)定。根據(jù)以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果，載藥量為1.0%的阿奇霉素亞微乳滴眼液從外觀，粒徑，zeta電位以及化學(xué)穩(wěn)定性均能夠滿(mǎn)足制劑的質(zhì)量要求，所以本研究將阿奇霉素亞微乳滴眼液的載藥量最終確定為1.0%(w/v)。4.2工藝因素的考察4.2.1制備溫度的考察磷脂存在相轉(zhuǎn)化溫度，在其相轉(zhuǎn)化溫度(70℃~80℃)附近制備成的乳劑粒徑較小，乳劑比較穩(wěn)定；同時(shí)升高溫度可降低表面張力和粘度，有利于剪切力的傳遞和乳劑的形成。但溫度過(guò)高界面膜會(huì)膨脹，同時(shí)乳滴動(dòng)能增大，易聚集合并，降低乳劑的穩(wěn)定性，通常乳化溫度宜控制在70℃~80℃左右36]。故控制水相溫度為70℃,油相溫度為75℃制備初乳。沈陽(yáng)藥科大學(xué)碩士學(xué)位論文第二章阿奇霉素亞微乳滴眼液的處方設(shè)計(jì)及制備工藝研究℃)條件下制備乳劑。因此本文試驗(yàn)條件下，將初乳溫度在高壓均質(zhì)前降低至約30℃,且4.2.2藥物及磷脂加入方法的考察有研究報(bào)道將卡馬西平等藥物粉碎成超微的粉末后加入至市售的脂肪乳劑，如第二章阿奇霉素亞微乳滴眼液的處方設(shè)計(jì)及制備工藝研究高壓均質(zhì)是通過(guò)巨大的能量輸入，對(duì)初乳再次分散乳化的過(guò)程，這個(gè)過(guò)程直接影響終產(chǎn)品的質(zhì)量，需要嚴(yán)格控制。考慮到亞微乳劑在放置過(guò)程中可能存在的乳滴變大的趨勢(shì)，乳劑粒徑的大小是影響脂肪乳劑性質(zhì)及穩(wěn)定性的主要因素。另外，如果亞微乳劑的粒度不均勻，體積相差較大的兩個(gè)油滴相互碰撞時(shí)，小粒子容易被大粒子合并，因此粒度分布均勻度也是評(píng)價(jià)判斷亞微乳劑穩(wěn)定性的一個(gè)重要指標(biāo)。均質(zhì)作用能有效地減小粒徑，并使粒徑分布變窄，因此本實(shí)驗(yàn)對(duì)高壓均質(zhì)操作參數(shù)進(jìn)行了考察優(yōu)化。制備初乳后，進(jìn)行高壓均質(zhì)壓力和次數(shù)考察，由于高壓均質(zhì)機(jī)過(guò)程中二級(jí)閥的主要作用是緩沖壓力及改善樣品粘度，并非影響樣品的粒徑及分布的主要因素，因此本實(shí)驗(yàn)將二級(jí)閥的壓力恒定為一級(jí)閥壓力的1/10,主要考察了一級(jí)閥壓力和均質(zhì)次數(shù)對(duì)亞微乳粒度的影響。壓力考察范圍為50MPa～90MPa,每個(gè)樣品均質(zhì)次數(shù)為8次；次數(shù)考察范圍為4~12次，均質(zhì)壓力為70MPa,操作過(guò)程中均質(zhì)溫度控制在30℃左右。以強(qiáng)度為權(quán)重的粒徑值能突出表征大粒子的狀況，而以體積為權(quán)重的粒徑值兼顧大小粒子，考察粒徑及粒度分布，如圖2-10所—SDvw0一一SDi-w0由圖2-10可以看出，乳劑的平均粒徑(PSi-w:強(qiáng)度重量徑，PSv-w:體積重量徑)隨著均質(zhì)壓力的增加而降低，由各乳劑粒度分布的SD值可見(jiàn)，均質(zhì)壓力為50MPa時(shí)，樣品粒度分布較寬，隨著均質(zhì)壓力增大，SD值減小，當(dāng)均質(zhì)壓力為70MPa時(shí)，平均粒徑可達(dá)180nm左右，且此時(shí)的粒度分布SD值最小(SDiw=55.7SDvw=47.8nm)。隨著壓力的進(jìn)一步升高，平均粒徑均進(jìn)一步減小，兩種權(quán)重的粒徑SD值都有增大的趨勢(shì)。這可能是由于在壓力較大的情況下，乳滴動(dòng)能增加，相互碰撞加速，導(dǎo)致部分粒子合并產(chǎn)生了少量的大粒子，即所謂脂肪乳劑系統(tǒng)出現(xiàn)了超負(fù)荷(overprocessing)現(xiàn)象，這一結(jié)果與Davis{4的研究結(jié)果相 第二章似。以上結(jié)果顯示，高能量的輸入雖然能使油滴進(jìn)一步分散，但是也會(huì)造成制劑的超負(fù)荷，使制劑不穩(wěn)定。圖2-11均質(zhì)次數(shù)對(duì)阿奇霉素亞微乳滴眼液粒度分布的影響(70MPa)Fig.2-11TheinfluenceofhomogenizationcyclesonparticlesizeofAZIE(70MPa)均質(zhì)次數(shù)超過(guò)8次時(shí)，粒度分布的SD值均有增大，尤其以強(qiáng)度分布變化較明顯。由于本綜合以上考察結(jié)果將均質(zhì)壓力確定為70Mpa,均質(zhì)次數(shù)為8次。此高壓均質(zhì)參數(shù)為實(shí)4.3處方和制備工藝的確定硬脂胺0.3g苯扎溴銨甘油2.2g4.3.2制備工藝將處方量Tween80、F68、EL-40、甘至磁力攪拌器中70℃加熱攪拌使溶解，制得水相；將處方量VE加至MCT中，75℃加熱攪拌混勻，得油相；將處方量阿奇霉素、大豆磷脂和硬脂胺在75℃加熱攪拌下溶于適量無(wú)水乙醇中，并與上述油相混合，75℃氮?dú)饬飨聯(lián)]干乙醇，得到澄清的含藥油相；在高速分散均質(zhì)機(jī)攪拌下(10,000rpm),將含藥油相加入至水相中，繼續(xù)攪拌約5分鐘，制得初乳；將初乳以0.1mol/L氫氧化鈉或0.1mol/L鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH值至7.0左右，用注射用水定容至全量，冷卻至30℃左右，轉(zhuǎn)移至高壓均質(zhì)機(jī)中，以70Mpa壓力均質(zhì)8次；將產(chǎn)品裝瓶，封口即得。5本章小結(jié)本章采用高壓均質(zhì)法制備阿奇霉素亞微乳滴眼液，以乳劑的外觀、平均粒徑及粒度分布、ζ-電位、藥物包封率、含量等各種穩(wěn)定性參數(shù)為評(píng)價(jià)指標(biāo)，對(duì)影響阿奇霉素亞微乳劑制備過(guò)程中主要處方因素及工藝因素進(jìn)行了研究。處方研究確定了油相的組成，考察了乳化劑的比例和用量，確定了制劑的載藥量和pH值，優(yōu)化了抗氧劑的種類(lèi)和用量；工藝因素確定了初乳制備條件，考察了藥物及磷脂的加入方法，確定了高壓均質(zhì)壓力和次數(shù)。本章確定的處方工藝能夠制備出穩(wěn)定性良好的阿奇霉素亞微乳滴眼液。阿奇霉素亞微乳滴眼液的處方設(shè)計(jì)及制備工藝研究ieDC,WuJS.Applicationofdynamiclightscatteringtoparticfmacromolecules.AmericanLaboratory.1991,23(17):32-40.[7]KomatsuH,KitajimaA,OkadaS.Pharmaceuticalcharacterizationofatemulsions:estimationofaverageparticlesize,sizedistributionandsurfacepotencorrelationspectroscopy.ChemPharmBull.1995[8]王思玲，孫長(zhǎng)山，于建軍等.比較Gaussian曲線(xiàn)分布與Nicomp多波型分布分析在納米分散系粒徑測(cè)定中的應(yīng)用.沈陽(yáng)藥科大學(xué)學(xué)報(bào).2003,20(5):321-324.[9]NicoliDF,WuJS,ChangYJ,etal.ζpotentialandparticlesizeAmericanLaboratory.1997,9:12-15.[10]周祖康.動(dòng)態(tài)光散射.化學(xué)通報(bào).1986,10:34-39.[11]MrestaniY,etal.PharmRes.199[12]JumaaM,MullerBW.Theeffectofophysicochemicalpropertiesandstabilityofparenteralfatemulsions.IntJPharm.1998,163(1-2):81-89.[13]MullerRH,HeinemannS.Falong-termstabilityofLipofundinMCT/LCT.ClinNutr.1993,12:298-309[14]GrimmH.Abalancedlipid[15]CatherineBB,TjerkWAdeB,HansJsoybean-oilemulsions:roleofhepaticlipase.AmJClinNutr.1993,57:533-539.JOculPharmacol.1986,2:67-108.[17]EgitoEST,FessiH,AppelM,etal.Amorphologicalstudyofanasystem.Int.JPharm.1996,145:17-2[18]WashingtonC.Stabilityoflipidemulsionsfordrugdelivery.AdvDrug[19]NordenTP,SiekmannB,LundquistS,et.al.Physicochemicalcharacterisatiphospholipid-stabilisedo/wemulsionforintravenousadministrati[20]RubinoJT.TheinfluenceofcharII:.electrophoreticpropertiesandmonolayerfilmstud[21]平其能等.現(xiàn)代藥劑學(xué)[M].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社.2001,100.[22]HansraniPK.Studiesonintravenousfatemulsions.Ph.DThesis.UniversityofNottingham.1980.[23]GrovesMJ,WinebergM,BrainAPR.Thepresenceofliposomalmaterialinphosphatideemulsions.JDispersion[24]BentleyP,DavisS,JohnsonO,LoweK,Washingperfluorochemicalemulsification.Jphampharmacol.1989,41(9):661-663.[25]BenitaS,FriedmanD,WeinstockM.system.IntJpharm.1986,30(1):47-55.[26]FosterD,WashingtonC,DavisSS.Toxicityofsolubilizedandcohumanerythrocytes.JPharmPharmacol.1988,40(5):325-328.[27]LevyMY,SchutzeW,FuhreretC,etal.Chaofoleocacid.JMicroencapsul.1994,11(1):79-92.[28]陸彬主編.藥物新劑型與新技術(shù)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社.1998,69-70.systems.AnNYAcadSci.1987,507:75-88.reticuloendothelialsystem.IntJPharm.1992,82:99[31]CalvoP,Remuna-LopezC,Vila-JatoL,AlonsoMJ.Developmentofpositivelychcarriers:chitosan-coatedpolyesternanocapsulesandsubmicro-emulsions.Collo[32]ShiChengYang,SimonBenita.Enhancedabsorptionemulsions.Drugdevelopmentresearch.2000,50:476-4[33]KlangSH,BaszkinA,BenitaS.Thestabilityofpiroxicamincorporatedemulsionforocularadministration.[34]WehrleP,KornerD,BenitaS.Sequentialstatemulsionofmiconazole.Pharm.DevTechnol.1996,1:97-111.[35]Rabinovich-GuilattL,DubemetC,GaudinpharmaceuticalemulsionassessedbyphysicochemicalparametersandanewanalyBiopharm.2005,61(1-2):69-76.[36]陸彬主編.藥物新劑型與新技術(shù).北京：人民衛(wèi)生出版社.1998:67-69,94,96.[37]BockTK,LocksJS,KIrinrnuffrP,MullerRH,etal.Highpressurehomogenizationoemulsion-influenceofpressureofprocessparametersonemulsionquality.EurJPharmBiopha第二章阿奇霉素亞微乳滴眼液的處方設(shè)計(jì)及制備工藝研究[38]MullerRH,SchmidtS,ButtleI.SolEmuls°-noveltechnopoorlysolubledrugs.IntJPharm.2004,269(2):293-302.[39]AkkarA,MüllerRH.IntravenousitraconazoleeandBiopharm.2003,56(1):29-36.[40]AkkarA,MüllerRH.FormulationofintravenousCarbamazepineEurJPharmandBiopharm.2003,55(3[41]DavisSS,HadgraftJ,PalinKJ.MedicalandpharmaceuticaofEmulsionTechnology",Becher,P.(Ed.),Vol.2,MarcelDekkerInc.,NewYork,1985,159-238.沈陽(yáng)藥科大學(xué)碩士學(xué)位論文第三章阿奇霉素亞微乳滴眼液的制劑性質(zhì)及穩(wěn)定性研究1.1儀器Jasco高效液相色譜儀(日本Jasco株式會(huì)社);YKHZHWY-110X30往復(fù)式水浴恒溫?fù)u床(上海智城分析儀器制造有限公司);電熱恒溫水浴鍋PHS-250精密pH計(jì)(上海理達(dá)儀器廠(chǎng));FA1104N分析天平(上海民喬精密科學(xué)儀器有限公SK3300H超聲清洗機(jī)(上海科導(dǎo)超聲儀器有限公司);Vivaspin4(截留分子量10000D)超濾1.2試藥阿奇霉素原料藥(上海三維制藥有限公司);泊洛沙姆188(F68)(德國(guó)巴斯夫公司);中鏈脂肪酸甘油三酯(MCT)(德國(guó)Lipoid公司);聚山梨酯80(Tween80)(上海申宇醫(yī)藥化工有限公司);大豆磷脂Epikuron170(德國(guó)Degussa公司);聚氧乙烯蓖麻油(EL-40)(上海申宇醫(yī)藥化工有限公司);依地酸二鈉(EDTA-2Na)(杭州余杭利人藥業(yè)有限公司);VE(浙江醫(yī)藥股份有限公司新昌制藥廠(chǎng));注射用甘油(浙江遂昌惠康藥業(yè)有限公司);注射用水(沈陽(yáng)市陸軍總院藥劑科);硬脂胺(北京篤信精細(xì)制劑廠(chǎng));苯扎溴銨溶液(沈陽(yáng)紅旗制藥有限公司)。甲醇、乙腈等均為色譜純，其它藥品和試劑均為藥用規(guī)格和分析純。2方法與結(jié)果2.1制劑性質(zhì)研究2.1.1外觀及性狀肉眼觀察阿奇霉素亞微乳滴眼液的外觀應(yīng)為白色或類(lèi)白色均勻乳狀液體。2.1.2粒徑及粒度分布參照第二章3.3.2項(xiàng)下分別測(cè)定了阿奇霉素亞微乳滴眼液三批樣品的粒徑及粒度分布，典型的粒度分布測(cè)定圖譜見(jiàn)圖3-1,三批樣品粒度測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表3-1。圖3-1典型的粒徑分布測(cè)定圖譜表3-1三批樣品粒度測(cè)定結(jié)果Tab.3-1ParticlesizetestresultsofthreebathesofAZIE(nm,Mea參照第二章3.3.3項(xiàng)下分別測(cè)定了阿奇霉素亞微乳滴眼液三批樣品的ζ-電位值，典型的(-電位測(cè)定圖譜見(jiàn)圖3-2,三批樣品(-電位測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表3-2。圖3-2典型的(-電位測(cè)定圖譜Fig.3-2Typicalexampleof-potential(samp第三章阿奇霉素亞微乳滴眼液的制劑性質(zhì)及穩(wěn)定性研究2.1.5含量及包封率表3-3三批樣品含量及包封率測(cè)定結(jié)果Tab.3-3DrugcontentandEEofthreebathesofAZIE粘度的測(cè)定首先將阿奇霉素制備成眼用溶液劑，其處方工藝如下：阿奇霉素磷酸鹽緩沖液注射用水加至100mL取1g阿奇霉素投入到25mLpH4.0的磷酸鹽緩沖液中，超聲5min使溶解；依次向溶第三章阿奇霉素亞微乳滴眼液的制劑性質(zhì)及穩(wěn)定性研究液中加入氯化鈉0.54g,EDTA0.02g,苯扎溴銨0.003g,攪拌下使溶解，加入注射用水50mL,以NaOH溶液(0.1M)調(diào)pH至6.3,加注射用水至全量，即得1%的阿奇霉素滴眼溶液劑。本實(shí)驗(yàn)使用NDJ-7旋轉(zhuǎn)式粘度計(jì)對(duì)乳劑和溶液劑于不同溫度下進(jìn)行粘度測(cè)定。具體操作如取出粘度計(jì)主機(jī)，置于穩(wěn)固的工作臺(tái)上，拆卸避震內(nèi)包裝，擰松滾花螺栓，將避震器托架取下，松開(kāi)測(cè)定器螺母，將測(cè)定器Ⅱ從托架上取下。接通電源，安裝聯(lián)接器，進(jìn)行零點(diǎn)調(diào)整。選用Ⅲ號(hào)0.1型轉(zhuǎn)子，加入被測(cè)液，開(kāi)機(jī)測(cè)定，記錄讀數(shù)。指針指示之讀數(shù)乘以轉(zhuǎn)子系數(shù)即為絕對(duì)粘度，即η=ka(3-1)測(cè)定結(jié)果如圖3-3所示：可見(jiàn)，在5-40℃范圍內(nèi)亞微乳劑的粘度均高于水溶液，這就保證了眼用制劑中的藥物在給藥后與結(jié)膜、角膜等生物粘膜的接觸時(shí)間延長(zhǎng)，從而有利于藥物的吸收，同時(shí)粘度增加后尚能減低對(duì)眼部的刺激作用。表面張力的測(cè)定[1]本文應(yīng)用最大泡壓法測(cè)定了25±2℃時(shí)蒸餾水和一組阿奇霉素滴眼液的表面張力。“最大泡壓法”測(cè)定表面張力的原理是毛細(xì)管脫出氣泡所需要的最大張力P與液體的表面張力σ成正比，即σ=KP(K為常數(shù)，與毛細(xì)管半徑有關(guān))。o?:一定溫度下被測(cè)液體的表面張力△h:表面張力測(cè)定器中壓力計(jì)的最大液差o?:一定溫度下蒸餾水的表面張力(已知o?5c=71.97×10?3N/m)通過(guò)使用同一毛細(xì)管在一定溫度下測(cè)定已知表面張力的蒸餾水的表面張力，就可利用式(3-3)求得阿奇霉素亞微乳劑和溶液劑的表面張力，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表3-4。結(jié)果表明阿奇霉素亞微乳能夠顯著的降低液體的表面張力，對(duì)于滴眼劑來(lái)說(shuō)，制劑的表面張力小于水的表面張力能夠促進(jìn)藥物在生物粘膜表面的滯留，因而促進(jìn)藥物的吸收。化學(xué)穩(wěn)定性研究按確定的處方和工藝分別制備阿奇霉素亞微乳劑與溶液劑，于100℃恒溫水浴中進(jìn)行加速試驗(yàn)，于0、0.5、1、4、8、11和24h取樣進(jìn)行含量測(cè)定，兩種制劑反應(yīng)濃度和時(shí)間變化的曲線(xiàn)如圖3-4所示，結(jié)果說(shuō)明阿奇霉素亞微乳劑中的藥物大部分包裹于油相或者界面膜中，避免了直接與水接觸，對(duì)于易水解的大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)藥物阿奇霉素來(lái)說(shuō)，這種“隔離”起到了增加穩(wěn)定性的作用，阿奇霉素亞微乳劑較溶液劑的穩(wěn)定性顯著提高。2.2穩(wěn)定性2.2.1考察項(xiàng)目沈陽(yáng)藥科大學(xué)碩士學(xué)位論文第三章阿奇霉素亞微乳滴眼液的制劑性質(zhì)及穩(wěn)定性研究目前沒(méi)有一種粒度檢測(cè)技術(shù)可以檢測(cè)出乳劑表面漂浮的油滴2,因此在穩(wěn)定性研究過(guò)程中粒徑及粒度分布亞微乳劑在儲(chǔ)存過(guò)程中會(huì)由于磷脂或油相的水解產(chǎn)生游離脂肪酸而使pH下降31,因含量參照第一章2.1項(xiàng)下測(cè)定阿奇霉素亞微乳滴眼液中阿奇霉包封率2.2.2振搖穩(wěn)定性試驗(yàn)沈陽(yáng)藥科大學(xué)碩士學(xué)位論文第三章阿奇霉素亞微乳滴眼液的制劑性質(zhì)及穩(wěn)定性研究2.2.3凍融穩(wěn)定性試驗(yàn)粒徑及粒度分布是評(píng)價(jià)乳劑穩(wěn)定性的重要參數(shù)，通常是通過(guò)加速試驗(yàn)如冷凍一融化循環(huán)實(shí)驗(yàn)來(lái)考察分散體系對(duì)溫度變化的耐受力，其基本原理是通過(guò)改變分散體系所處環(huán)境的溫度，引起體系自身的能量變化，觀察由此產(chǎn)生的乳滴形態(tài)、運(yùn)動(dòng)規(guī)律的改變，以及宏觀表現(xiàn)出的粘度、流動(dòng)性的變化。循環(huán)試驗(yàn)的結(jié)果與所選的溫度及循環(huán)時(shí)間有很大關(guān)系，目前尚無(wú)統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)。由于冷凍一融化循環(huán)考察條件較劇烈，因此本實(shí)驗(yàn)結(jié)果僅以粒徑測(cè)定來(lái)評(píng)價(jià)制劑優(yōu)劣，實(shí)驗(yàn)循環(huán)方案為取阿奇霉素亞微乳滴眼液適量密封于西林瓶中，置-20℃下冷凍12h后，取出置室溫條件下自然融化12h,此過(guò)程為一循環(huán)，循環(huán)4次，每次循環(huán)結(jié)束后，均取樣，觀察外觀，測(cè)定零時(shí)及各取樣時(shí)間下乳劑的粒徑及粒度分布，結(jié)果見(jiàn)圖3-6。從外觀上觀察，各時(shí)間點(diǎn)所取乳劑均為乳白色均勻乳狀液體。由圖3-6可見(jiàn)，隨著變溫周期的延長(zhǎng)，平均粒徑無(wú)顯著性變化，認(rèn)為阿奇霉素亞微乳劑具有良好的聚結(jié)穩(wěn)定性。第三章阿奇霉素亞微乳滴眼液的制劑性質(zhì)及穩(wěn)定性研究圖3-6凍融試驗(yàn)粒徑分布結(jié)果2.2.4加速穩(wěn)定性考察三批樣品在模擬上市包裝條件下，于25±2℃條件下避光保存，1、2、3、6個(gè)月時(shí)取樣進(jìn)行各項(xiàng)理化性質(zhì)檢查和測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表3-5。2.2.5長(zhǎng)期穩(wěn)定性考察三批樣品在模擬上市包裝條件下，于6±2℃條件下避光保存，3、6個(gè)月時(shí)取樣取樣進(jìn)行各項(xiàng)理化性質(zhì)檢查和測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表3-6。3本章小結(jié)等理化性質(zhì)進(jìn)行了考察。本品經(jīng)25±2℃加速試驗(yàn)6個(gè)月和6±2℃條件下長(zhǎng)期留樣6個(gè)月試3.2振搖及凍融穩(wěn)定性試驗(yàn)表明阿奇霉素亞微乳滴眼液具有良好的振搖穩(wěn)定性和聚結(jié)穩(wěn)定性，說(shuō)明該制劑可經(jīng)受住制備、運(yùn)輸及貯藏過(guò)程對(duì)粒徑所產(chǎn)生的影響。3.3阿奇霉素亞微乳滴眼液與溶液劑的對(duì)比實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明亞微乳劑的粘度、表面張力以及化學(xué)穩(wěn)定性等理化性質(zhì)均比溶液劑具有更突出的優(yōu)勢(shì)，證實(shí)了此研究項(xiàng)目的可行性。沈陽(yáng)藥科大學(xué)碩士學(xué)位論文第三章阿奇霉素亞微乳滴眼液的制劑性質(zhì)及穩(wěn)定性研究No.0809111236No.0809131236No.0809151236第三章阿奇霉素亞微乳滴眼液的制劑性質(zhì)及穩(wěn)定性研究表3-6阿奇霉素亞微乳滴眼液長(zhǎng)期穩(wěn)定No.08091136No.08091336No.08091536[1]盛以虞主編.物理化學(xué)實(shí)驗(yàn)與指南.北京：中國(guó)醫(yī)藥出版社.1993:159.[2]DianeJ.Burgess.Injectabledispersedsystems:formulatiFrancisGroup,LLC,2005:415-425.[3]HermanCJ,GrovesMJ.TheinfluenceoffreefattyacidformationonthepHoftriglycerideemulsions.PharmRes.1993,10(5):774-776.沈陽(yáng)藥科大學(xué)碩士學(xué)位論文第四章阿奇霉素亞微乳滴眼液家兔眼內(nèi)藥物動(dòng)力學(xué)研究物動(dòng)力學(xué)的研究一直是困擾著生物藥劑學(xué)者的難題，其難點(diǎn)主要在于眼內(nèi)藥物濃度的測(cè)剖學(xué)上的相似性，是最常選用的理想受試動(dòng)物模型]。根據(jù)不同藥物的治療特點(diǎn)，眼用制物，通過(guò)檢測(cè)淚膜曲率、瞳孔大小改變、眼壓改變間接反映藥物在眼內(nèi)的吸收2;第二類(lèi)的吸收3;第三類(lèi)是治療白內(nèi)障、β受體阻滯劑、局麻藥、激素、非甾體類(lèi)抗炎藥及治療1.1儀器與試藥AcQuityTMUPLC系統(tǒng)(WatersCorp.,Milford,MA,USA);WatersAcQuityTMTQD三重四級(jí)桿串聯(lián)質(zhì)譜儀(WatersCorp.,Manchester,UK);AcQuityUPLCTMBEHC?8色譜柱(1.7μm,50mm×2.1mm;W阿奇霉素亞微乳滴眼液(10mL:100mg,批號(hào)0沈陽(yáng)藥科大學(xué)碩士學(xué)位論文第四章阿奇霉素亞微乳滴眼液家兔眼內(nèi)藥物動(dòng)力學(xué)研究1.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物2方法與結(jié)果2.1實(shí)驗(yàn)條件Corp.,Milford,MA,USA);流動(dòng)相A為10mmol/L醋酸銨溶液，流動(dòng)相B為乙腈，梯度洗Tab.4-1Gradientconditionof離子電離方式；選擇離子監(jiān)測(cè)(SIR)進(jìn)行定量分析；錐孔電壓為55V;ES電壓為0.8kV;離子源溫度100℃;去溶劑氣溫度400℃,流速550L/hr;錐孔氣流速50L/h;據(jù)采集；運(yùn)用QuanLynxTMprogram(WatersCorp.,Milfo2.2淚液樣品的處理和測(cè)定從冰箱中取出樣品，常溫下用乙腈與水5:5的溶液溶解，渦旋3min混勻，稀釋至阿2.3方法學(xué)驗(yàn)證沈陽(yáng)藥科大學(xué)碩士學(xué)位論文第四章阿奇霉素亞微乳滴眼液家兔眼內(nèi)藥物動(dòng)力學(xué)研究圖4-1為選擇性的對(duì)阿奇霉素的[M+H]+離子進(jìn)行的產(chǎn)物離子全掃描質(zhì)譜分析圖。阿奇霉素生成的主要碎片離子為m/z591.3,并將其作為定量分析時(shí)監(jiān)測(cè)的產(chǎn)物離子。圖4-2家兔淚液樣品中阿奇霉素的典型SRM色(B)家兔阿奇霉素亞微乳滴眼后的淚液樣品Fig.4-2RepresentativeSRMchromatogramsofAZIin(B)atearsamplefromarabbiteyeaftertopicalapplic沈陽(yáng)藥科大學(xué)碩士學(xué)位論文第四章阿奇霉素亞微乳滴眼液家兔眼內(nèi)藥物動(dòng)力學(xué)研究的儲(chǔ)備液。取適量?jī)?chǔ)備液用上述乙腈水溶液稀釋成濃度為10000,5000,2000,1000,500,A=206.245c+20846.9r=0.99642.3.3回收率考察氣吹干，每一濃度進(jìn)行5樣本分析，然后分別“淚液樣品的處2.3.4精密度考察濃度分別為800μg/mL,100μg/mL,10μg/測(cè)定結(jié)果計(jì)算本UPLC/MS/MS方法的準(zhǔn)確度和精密度，結(jié)果見(jiàn)表4-3與表4-4。沈陽(yáng)藥科大學(xué)碩士學(xué)位論文第四章阿奇霉素亞微乳滴眼液家兔眼內(nèi)藥物動(dòng)力學(xué)研究2.4家兔眼內(nèi)藥物動(dòng)力學(xué)研究2.4.1給藥方案與淚液樣品采集本實(shí)驗(yàn)采用家兔自身雙眼對(duì)照法。用微量取樣器分別給各只家兔左眼結(jié)膜囊內(nèi)滴30μL阿奇霉素亞微乳滴眼液，右眼結(jié)膜囊內(nèi)滴參比制劑30μL,20s后輕輕復(fù)原下眼瞼。滴眼后于5min,15min,30min,45min,60min,120min,240min,360min和480min后將濾紙條置上眼瞼內(nèi)吸取淚液，精密稱(chēng)量(淚液按密度1.005mg/μL換算成體積),40℃下氮?dú)獯蹈桑袠悠防鋬霰４嬗?20℃冰箱中至測(cè)定。2.4.2實(shí)驗(yàn)結(jié)果取各組淚液樣品，按“淚液樣品的處理和測(cè)定”項(xiàng)下方法操作，以標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算各時(shí)間點(diǎn)淚液樣品中阿奇霉素的濃度。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物單劑量阿奇霉素亞微乳滴眼液滴眼后家兔各時(shí)淚液中藥物濃度測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表4-5,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物單劑量阿奇霉素溶液劑滴眼液滴眼后家兔各沈陽(yáng)藥科大學(xué)碩士學(xué)位論文第四章阿奇霉素亞微乳滴眼液家兔眼內(nèi)藥物動(dòng)力學(xué)研究表4-5單劑量阿奇霉素亞微乳滴眼液滴眼后家兔各時(shí)淚液中藥物濃度Tab.4-5Tearconcentrationofrabbitsa5No.1No.2No.3No.4No.55第四章阿奇霉素亞微乳滴眼液家免眼內(nèi)藥物動(dòng)力學(xué)研究圖4-3單劑量阿奇霉素亞微乳滴眼液和溶液劑淚液中平均藥物濃度—時(shí)間曲線(xiàn)(n=6)Fig.4-3MeantearconcentaftertopicalapplicationofAZIEandAZISt2.4.3藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)分析歸，由直線(xiàn)的斜率求出，消除半衰期tin由0.693/ke求得，藥時(shí)曲線(xiàn)下面積AUC由梯形法求得，用統(tǒng)計(jì)矩計(jì)算藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)結(jié)果見(jiàn)表4-7。沈陽(yáng)藥科大學(xué)碩士學(xué)位論文第四章阿奇霉素亞微乳滴眼液家兔眼內(nèi)藥物動(dòng)力學(xué)研究hhh3.1