1DBXX/XXXXX—XXXX鱷龜養殖技術規范本標準規定了鱷龜（Chelydraserpentina）的主要生物學特性、內部構造特征、生長與繁殖，肌肉營養成分、遺傳學特征及其檢測方法。本標準適用于鱷龜的種質鑒定。2規范性引用文件下列文件中的條款通過本標準的引用而成為本標準的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所有的修改單（不包括勘誤的內容）或修訂版均不適用于本標準，然而，鼓勵根據標準達成協議的各方研究是否可使用這些文件的最新版。凡是不注日期的引用文件，其最新版適用于本標準。GB5009.3食品安全國家標準食品中水分的測定GB5009.4食品安全國家標準食品中灰分的測定GB5009.5食品安全國家標準食品中蛋白質的測定GB5009.6食品安全國家標準食品中脂肪的測定GB5009.124食品安全國家標準食品中氨基酸的測定GB/T18654.2養殖魚類種質檢驗第2部分：抽樣方法GB/T18654.12養殖魚類種質檢驗第12部分：染色體組型分析GB/T21044中華鱉3名稱與分類學名鱷龜（Chelydraserpentina）3.1分類地位鱷龜科（Chelydridae），擬鱷龜屬（Chelydra），鱷龜（Chelydraserpentina）。4主要生物學特征4.1外部形態特征4.1.1外形a)背甲黑色或棕色，3條脊棱呈鋸齒狀突起，由13～15枚盾片組成，尾盾呈齒狀。b）腹甲呈淡黃色或淺褐色，顯著小，呈十字狀，有多枚大而小的下緣盾。c）頭頸部皮膚粗糙，具有明顯的疣刺，頭不能縮入殼內，上下頜略尖，具有角質喙且上喙略鉤曲。d）四肢肌肉發達，具有大量疣刺，趾間具蹼。e）尾長而尖，尾兩側有大量疣刺，尾背面正中具有一列強壯的角質棘棱。2DBXX/XXXXX—XXXX鱷龜(♂)正面圖見圖1，腹面圖見圖2。圖1鱷龜背面圖（1）吻（2）頸（3）前肢（4）背甲（5）后肢（6）爪（7）尾圖2鱷龜腹面圖（1）吻（2）下頜（3）頸（4）前肢（5）緣盾（6）后肢（7）爪（8）尾（9）腹甲4.1.2可數性狀椎盾：5，頸盾：2，肋盾：8-10，緣盾：22，臀盾：2，喉盾：2，肱盾：2，胸盾：2，腹盾：2，股盾：2，甲橋：6，腋盾：2，胯盾：2，肛盾：1-2。252025206月齡12月齡24月齡36月齡回48月齡背甲長背甲寬體高圖3不同月齡組鱷龜背甲和體高參考值3DBXX/XXXXX—XXXX4.2解剖結構特征4.2.1脊柱頸椎8枚，胸椎10枚，薦椎2枚，尾椎20枚。4.2.2消化道全口無齒，口裂有角質化硬鞘。食道細而長，胃較寬大，小腸盤曲位于十二指腸后。4.2.3消化腺由肝、胰和膽等組成。肝深褐色且較大，分左右兩葉，膽囊在肝葉中，胰腺乳黃色緊靠十二指腸。4.2.4肺扁平長圓囊狀，2葉。鱷龜(♀)的解剖結構圖見圖4。圖4鱷龜(♀)解剖結構圖（1）氣管（2）食道（3）心臟（4）肝臟（5）胃（6）胰臟（7）肺（8）膽囊（9）卵巢（10）小腸（11）膀胱（12）脾（13）輸卵管（14）腎（15）泄殖腔（16）副膀胱（17）泄殖孔4.3生長4g0DBXX/XXXXX—XXXXg0 6月齡24月齡 36月齡回48月齡圖5不同年齡組鱷龜的體重參考值4.4繁殖特征4.4.1性成熟年齡雌、雄鱷龜性成熟年齡為3～4齡。4.4.2繁殖期每年4～6月份產卵，4～5月份為產卵高峰期。4.4.3繁殖類型雌性性腺每年成熟一次，每年產卵次數＞1次。4.4.4年產卵量每年產0次～3次，一般1次～2次，每次20枚～80枚，平均30枚/次。5肌肉營養成分5.1主要營養成分鱷龜肌肉粗蛋白、粗脂肪、灰分、水分等營養含量指標見表3。5DBXX/XXXXX—XXXX表3肌肉（后肢基部）主要營養成分檢測項目含量%粗蛋白19.32～19.60粗脂肪0.20～0.40灰分0.8～0.88水分71.4～77.95.2氨基酸表4肌肉（后肢基部）氨基酸含量檢測項目含量%氨基酸（以鮮基計）總量≥17.68%天門冬氨酸≥1.65蘇氨酸≥0.86絲氨酸≥0.83谷氨酸≥2.95丙氨酸≥1.00胱氨酸≥1.10纈氨酸≥0.88蛋氨酸≥0.52異亮氨酸≥0.85亮氨酸≥1.45酪氨酸≥0.68苯丙氨酸≥0.71賴氨酸≥1.52組氨酸≥0.60精氨酸≥1.10脯氨酸≥0.786細胞遺傳學特征6.1體細胞染色體2n=526.2染色體核型12m+4sm+6st+2t+28cmNF=686.3染色體組型鱷龜染色體中期分裂相見圖6，染色體組型見圖7。6DBXX/XXXXX—XXXX圖6染色體中期分裂相圖7染色體組型7生化遺傳學特性肌肉的乳酸脫氫酶（LDH）同工酶有8條譜帶；肝臟的酯酶（EST）同工酶有5個基因座位，有5條譜肌肉的乳酸脫氫酶（LDH）同工酶電泳圖譜見圖8。肝臟的酯酶（EST）同工酶電泳圖譜見圖9。圖8肌肉的乳酸脫氫酶（LDH）同工酶電泳圖譜圖9肝臟的酯酶（EST）同工酶電泳圖譜8分子遺傳學特性7DBXX/XXXXX—XXXX用20個RAPD（隨機擴增多態性DNA技術，又稱任意引物PCR）引物對其基因組DNA進行分析，確認引物S19的分析結果能夠反應其基因組的多態性特征。引物S19序列：TGCCCGTCGT見圖10。圖10基因組DNARAPD圖譜M：分子量標準，C：對照樣品，G：鱷龜樣品（4個樣品）9檢測方法9.1生物學性狀測定參照GB/T21044規定的方法測定。9.2肌肉營養成分測定9.2.1樣品制備取活體后肢基部肌肉，于105℃烘干，粉碎。肌肉各成分測定按照GB5009.3、GB5009.4、GB5009.5、GB5009.6規定的方法進行。9.2.2氨基酸按GB5009.124中的規定執行。9.2.3細胞遺傳學特性檢測按GB/T18654.12的規定執行。9.3生化遺傳學性狀分析9.3.1樣品制備樣品加3%輔酶I液勻漿，低溫離心，至上清液澄清。整個制備過程均在2～8℃低溫條件下進行。9.3.2電泳分析使用水平淀粉凝膠電泳儀。淀粉膠濃度為10%，酯酶（EST）電泳緩沖液為三羥甲基氨基甲烷（Tris）-硼酸-乙二胺四乙酸四鈉鹽，乳酸脫氫酶（LDH）電泳緩沖液為甲基氨基甲烷（Tris）-檸檬酸，pH值7.0。將10%濃度水解淀粉煮好后倒入制膠模內，待凝固后，切一橫裂縫，用濾紙片吸取8DBXX/XXXXX—XXXX樣品的上清液插入裂縫中。電泳電壓為250V，電泳8h-10h，電泳恒溫4℃,電泳后橫切成0.2cm左右的薄片，浸入染色液中保溫染色。同工酶染色液配方見附錄A。9.3.3結果判定將測定結果對照圖6、7譜帶確定該種同工酶的編碼座位數和多態座位的基因數9.4分子遺傳學特性分析9.4.1基因組DNA的提取純化取肌肉剪碎用組織列解液（0.5molEDTA，PH值8.0；200μg/mLProteinnseK；0.5%Snrcosyl）于55℃消化過夜，次日用酚、氯仿、異戊醇（24：24：1）抽提三次，RNaseA消化去除RNA后再抽提一次，然后用2150mmol/LTris.HCl(pH8.0)、10mmolEDTA（pH8.0），透析至OD270＜0.05，檢測DNA濃度，置4℃保存備用。9.4.2RAPD引物及擴增條件用PE-9600型PCR擴增儀，RAPD擴增引物OPP及OPM組計15個。RAPD反應：10mmol/LTris.HCl（pH8.3），50mmol/LKCl，2.0mmol/LMgCl2，0.001%明膠；Dapt.dGTP、Dctp，dTTP各為0.1mmol/L:引物15μg，基因組DNA20μg，1單位Tag聚合酶。于93.5℃變性1min，36℃退火1min，72℃延伸2min，計45個循環，循環結束后延伸5min，擴增產物用1.5%瓊脂糖凝膠電泳檢測。9.4.3瓊脂糖凝膠電泳凝膠濃度為1.5%的瓊脂糖，膠中含0.5g/mL溴化乙錠。電泳緩沖液為TBE，電泳在室溫下進行，電壓為15V，電泳時間為16h。電泳畢在紫外燈下觀察拍照。10檢測規則10.1檢測分類檢測分為鑒定檢測和質量一致性檢測。10.2檢測項目鑒定檢測項目包括外部形態特征、可量性狀、可數性狀。質量一致性檢測項目包括細胞遺傳學特性、生化遺傳學特性、分子遺傳學特性。10.3取樣樣品龜的抽樣按GB/T18654.2規定執行。10.3.1組批以同齡期的鱷龜為同一批。10.4判定規定各項檢驗指標在標準范圍內則判定為鱷龜。9DBXX