2025年高考生物解密之基因工程一．選擇題（共20小題）1．蛛絲蛋白是一種特殊纖維蛋白，具有強(qiáng)度高、韌性大等特點(diǎn)，在人工肌腱等醫(yī)學(xué)領(lǐng)域有著誘人的前景。某研究小組提取一種絲絨蜘蛛中的蛛絲蛋白基因，將其導(dǎo)入大腸桿菌生產(chǎn)蛛絲蛋白。下列敘述正確的是（）A．構(gòu)建蛛絲蛋白基因表達(dá)載體需要限制酶和DNA聚合酶 B．可通過顯微注射的方法將蛛絲蛋白基因?qū)氪竽c桿菌 C．基因表達(dá)載體上的復(fù)制原點(diǎn)可調(diào)控蛛絲蛋白基因的表達(dá) D．可通過蛋白質(zhì)工程設(shè)計(jì)與改造蛛絲蛋白的結(jié)構(gòu)以增強(qiáng)其韌性2．某同學(xué)利用洋蔥為實(shí)驗(yàn)材料，進(jìn)行DNA粗提取和鑒定實(shí)驗(yàn)。下列有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（）A．該同學(xué)也可選擇雞血、豬肝等動(dòng)物細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)材料提取DNA，但方法可能有所不同 B．將洋蔥切碎加研磨液研磨、過濾后，濾液放置4℃冰箱中靜置幾分鐘后，DNA存在于沉淀物中 C．向含有DNA的粗提取液中加入體積分?jǐn)?shù)為95%的冷酒精后，出現(xiàn)的白色絲狀物為DNA D．鑒定DNA時(shí)，需先將DNA溶解在2mol/LNaCl溶液，再加入二苯胺試劑并進(jìn)行沸水浴加熱3．下列有關(guān)基因工程的敘述正確的是（）A．將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞采用最多的方法是花粉管通道法 B．將某藥用蛋白基因?qū)雱?dòng)物乳腺細(xì)胞中可獲得乳腺生物反應(yīng)器 C．目的基因擴(kuò)增完成后的產(chǎn)物常用瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行鑒定 D．可通過RNA分子標(biāo)記檢測(cè)目的基因是否成功表達(dá)4．t﹣PA蛋白能高效降解由纖維蛋白凝聚而成的血栓，是心梗和腦血栓的急救藥。但t﹣PA與纖維蛋白結(jié)合的特異性不高，給心?；颊咦⑸浯罅縯﹣PA會(huì)誘發(fā)顱內(nèi)出血。若將t﹣PA第84位的半胱氨酸換成絲氨酸，獲得改良藥物t﹣PA，能顯著降低出血副作用。下列敘述正確的是（）A．對(duì)t﹣PA蛋白的改良，是以基因的結(jié)構(gòu)和功能的關(guān)系為理論基礎(chǔ) B．在該研究中目前可行的直接操作對(duì)象是控制t﹣PA合成的基因 C．通過蛋白質(zhì)工程制備t﹣PA蛋白可以不用構(gòu)建基因表達(dá)載體 D．將改良的t﹣PA基因直接注入大腸桿菌，是生產(chǎn)改良t﹣PA蛋白的核心步驟5．水蛭是我國(guó)的傳統(tǒng)中藥材，主要藥理成分水蛭素為水蛭蛋白中重要成分之一，具有良好的抗凝血作用?？蒲腥藛T擬通過蛋白質(zhì)工程改造水蛭素結(jié)構(gòu)，提高其抗凝血活性。將提取的水蛭蛋白經(jīng)甲、乙兩種蛋白酶水解后，分析水解產(chǎn)物中的肽含量及其抗凝血活性，結(jié)果如圖所示。下列敘述錯(cuò)誤的是（）A．水蛭蛋白經(jīng)兩種酶處理后水解產(chǎn)物的抗凝血活性差異主要與其肽含量有關(guān) B．酶甲處理使水蛭素抗凝血活性提高的可能原因是使其有活性的結(jié)構(gòu)域部位暴露 C．要獲得水蛭素的基因，可以從水蛭細(xì)胞中提取mRNA，經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄獲得目的基因 D．上述實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖橇私馑嗡氐鞍字杏绊懣鼓钚缘牟糠忠栽O(shè)計(jì)蛋白質(zhì)三維結(jié)構(gòu)6．實(shí)驗(yàn)小組利用PCR技術(shù)獲得了含有目的基因的DNA片段，并用圖示的限制酶對(duì)其進(jìn)行酶切，再用所得DNA片段成功構(gòu)建了基因表達(dá)載體，下列敘述錯(cuò)誤的是（）A．PCR技術(shù)中用到的一個(gè)引物的前8個(gè)堿基序列為5'﹣TGCGCAGT﹣3' B．步驟①中用到的限制酶是SpeⅠ和CfoⅠ C．用步驟①中的限制酶對(duì)質(zhì)粒進(jìn)行酶切，可至少獲得2個(gè)DNA片段 D．可用E.coliDNA連接酶或T4DNA連接酶連接酶切后的目的基因片段和質(zhì)粒7．紅豆草是一種品質(zhì)優(yōu)良的豆科多年生高蛋白牧草作物，被譽(yù)為“牧草皇后”。為提高紅豆草的耐鹽性、增大種植范圍，科研人員將鹽生植物堿蓬中的耐鹽基因SsPSL轉(zhuǎn)入紅豆草中，對(duì)轉(zhuǎn)基因耐鹽紅豆草DNA進(jìn)行PCR，再對(duì)PCR的產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳鑒定。下列有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（）A．利用PCR獲取和擴(kuò)增耐鹽基因SsPSL，需添加一種引物，四種核糖核苷酸等組分 B．構(gòu)建基因表達(dá)載體是培育轉(zhuǎn)基因耐鹽紅豆草的核心工作 C．將植物材料和農(nóng)桿菌共同培養(yǎng)之前，植物材料需要消毒處理 D．凝膠中的DNA分子通過染色，可以在波長(zhǎng)為300nm的紫外燈下被檢測(cè)出來8．普通棉花中β﹣甘露糖苷酶（GhMnaA2）基因表達(dá)出的GhMnaA2能催化半纖維素降解，使棉纖維長(zhǎng)度變短。為了培育長(zhǎng)絨棉，科研人員構(gòu)建了反義GhMnaA2基因表達(dá)載體（將正義GhMnaA2基因與載體反向連接），獲得了轉(zhuǎn)基因長(zhǎng)絨棉新品種，具體過程如圖所示，SmaⅠ，NotⅠ，HindⅢ和BamHⅠ為酶切位點(diǎn)。用SmaⅠ和NotⅠ切割某正義表達(dá)載體可獲得3kb、18kb、28kb、59kb4種長(zhǎng)度的DNA片段。下列敘述正確的是（）A．正義GhMnaA2基因的轉(zhuǎn)錄方向是B→A B．①過程所得到的表達(dá)載體均為反義表達(dá)載體 C．反義GhMnaA2基因可能通過抑制GhMnaA2基因的翻譯來保證棉纖維長(zhǎng)度 D．用NotⅠ切割反義表達(dá)載體獲得的DNA片段的長(zhǎng)度為21kb和87kb9．DNA分子的堿基具有吸收260nm波長(zhǎng)光的特性。當(dāng)DNA兩條鏈堿基緊密連接時(shí)，吸光度偏低；兩條鏈分離時(shí)，吸光度升高，因此DNA變性可通過DNA溶液對(duì)260nm波長(zhǎng)光的吸光度來檢測(cè)。肺炎鏈球菌DNA的變性曲線如圖所示，吸光度達(dá)到最大值的50%時(shí)的溫度稱為熔解溫度（Tm）。下列說法正確的是（）A．加熱會(huì)破壞脫氧核苷酸之間的磷酸二酯鍵使DNA變性 B．A、T堿基對(duì)所占比例越高的DNA，變性曲線中Tm值越高 C．加熱至約70℃時(shí)DNA兩條鏈從一端向另一端逐漸分離 D．利用PCR技術(shù)檢測(cè)目的基因時(shí)需要先將DNA變性10．我國(guó)的科研團(tuán)隊(duì)首次發(fā)現(xiàn)了高粱細(xì)胞中AT1基因編碼的AT1蛋白可以調(diào)節(jié)作物的耐堿性表型，對(duì)于提高作物在鹽堿地的存活率具有重要意義。在鹽堿地種植的作物會(huì)受脅迫產(chǎn)生過量的有害物質(zhì)H2O2。圖中的PIP2s為某種水通道蛋白，其磷酸化水平影響H2O2的跨膜運(yùn)輸，其機(jī)理如圖所示。下列敘述錯(cuò)誤的是（）A．鹽堿環(huán)境可引起大多數(shù)作物胞內(nèi)液滲透壓上升，吸水能力增強(qiáng) B．PIP2s失活的植物細(xì)胞在高滲溶液中仍可以發(fā)生質(zhì)壁分離 C．敲除AT1基因?qū)?dǎo)致PIP2s蛋白磷酸化被抑制，促進(jìn)H2O2外排 D．可以將耐堿基因的成果應(yīng)用到大豆、油菜等更多的作物提高其抗逆性11．科學(xué)家將外源抗蟲基因（Bt抗蟲蛋白基因）轉(zhuǎn)入某茄科植物細(xì)胞中，并整合到該植物的線粒體DNA上，獲得了具有抗蟲性狀的轉(zhuǎn)基因植物。下列敘述，錯(cuò)誤的是（）A．Bt抗蟲蛋白在線粒體中的成功合成與密碼子的通用性有關(guān) B．葉肉細(xì)胞內(nèi)有多個(gè)線粒體，這有利于增加該轉(zhuǎn)基因植物的抗蟲性 C．將該轉(zhuǎn)基因植物與同種非轉(zhuǎn)基因植物進(jìn)行正、反交，所得子代均有抗蟲性 D．該技術(shù)能有效避免或減少外源基因通過花粉向其他植物的轉(zhuǎn)移12．S基因與作物甜度相關(guān)，可用于培育轉(zhuǎn)S基因作物新品系。已知S基因轉(zhuǎn)錄的模板鏈位于a鏈，轉(zhuǎn)錄時(shí)mRNA自身的延伸方向?yàn)?′→3′。如圖，為使S基因按正確方向與質(zhì)粒連接，酶切目的基因時(shí)選用的限制酶組合是（）A．BamHⅠ和HindⅢ B．BamHⅠ和EcoRⅠ C．MunⅠ和BamHⅠ D．EcoRⅠ和HindⅢ13．下列關(guān)于DNA片段擴(kuò)增及電泳鑒定實(shí)驗(yàn)的說法，錯(cuò)誤的是（）A．放入PCR儀前，需要對(duì)離心管進(jìn)行離心，使反應(yīng)液集中在底部 B．配置瓊脂糖溶液時(shí)，需要根據(jù)DNA片段的大小調(diào)節(jié)瓊脂糖濃度 C．電泳時(shí)需要的兩種緩沖液分別含有核酸染料和指示劑 D．電泳時(shí)，需要根據(jù)電泳槽陽極至陰極之間的距離設(shè)定電壓14．RDX是一種彈藥使用后殘留的危險(xiǎn)污染物。研究人員將兩個(gè)源于細(xì)菌的RDX降解酶基因XplA和XplB插入柳枝稷草染色體中，如圖所示，使柳枝稷草獲得降解實(shí)彈射擊場(chǎng)土壤中RDX的能力。若要通過PCR檢測(cè)所獲轉(zhuǎn)基因柳枝稷草中是否含有正確插入的XplA和XplB基因，應(yīng)選擇的引物組合是（）A．引物1+引物3 B．引物1+引物4 C．引物2+引物3 D．引物2+引物415．2022年1月7日，馬蘭里醫(yī)學(xué)中心成功將豬心臟移植到一名57歲的心臟病患者身上，雖然這顆心臟僅僅存活了2個(gè)月，但仍然為異種器官移植的可行性提供了可觀的數(shù)據(jù)。為了降低免疫排斥反應(yīng)，研究者借助CRISPR/Cas9技術(shù)對(duì)移植的豬心臟進(jìn)行了基因編輯。CRISPR/Cas9系統(tǒng)主要由向?qū)NA（sgRNA）和Cas9蛋白兩部分組成，sgRNA可引導(dǎo)Cas9蛋白到特定基因位點(diǎn)進(jìn)行切割、其機(jī)制如圖所示。下列說法錯(cuò)誤的是（）A．sgRNA通過與目標(biāo)DNA序列互補(bǔ)配對(duì)引導(dǎo)Cas9蛋白到位 B．有時(shí)sgRNA會(huì)因錯(cuò)誤結(jié)合而出現(xiàn)“脫靶”現(xiàn)象，一般sgRNA序列越短，脫靶率越低 C．Cas9蛋白作用于磷酸二酯鍵 D．可以通過設(shè)計(jì)sgRNA，靶向豬心臟的某個(gè)抗原蛋白基因的堿基序列，實(shí)現(xiàn)基因敲除16．XhoⅠ和SalⅠ是兩種限制酶，某段DNA上的酶切位點(diǎn)如圖1所示，用此兩種酶分別處理該DNA片段一段時(shí)間，電泳后的結(jié)果如圖2所示。下列敘述，錯(cuò)誤的是（）A．圖1中兩種限制酶識(shí)別的脫氧核苷酸序列不同 B．泳道①是使用SalⅠ處理后的酶切產(chǎn)物的電泳結(jié)果 C．圖2中電泳移動(dòng)速度最慢的是泳道②最上方的那條帶 D．同時(shí)使用SalⅠ和XhoⅠ處理，酶切產(chǎn)物的電泳結(jié)果為7個(gè)條帶17．高溫會(huì)造成葉綠體內(nèi)活性氧（ROS）大量累積，類囊體薄膜的核心蛋白D1對(duì)ROS尤為敏感，極易受到破壞。近期我國(guó)科學(xué)家將編碼D1的psbA基因（位于葉綠體基因組）與高溫響應(yīng)的啟動(dòng)子連接，導(dǎo)入水稻細(xì)胞的核基因組中，補(bǔ)充了一條由高溫響應(yīng)啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的D1合成途徑，與野生水稻相比，在高溫下轉(zhuǎn)基因水稻光能利用能力顯著提高。下列說法錯(cuò)誤的是（）A．該研究中高溫響應(yīng)的啟動(dòng)子屬于誘導(dǎo)型啟動(dòng)子 B．轉(zhuǎn)基因水稻CO2的同化速率較野生型水稻也相應(yīng)提高 C．細(xì)胞原有的和補(bǔ)充的D1合成途徑的mRNA轉(zhuǎn)錄場(chǎng)所相同 D．該研究為全球氣候變暖造成的糧食高溫脅迫提供了解決方案18．關(guān)于“DNA粗提取和鑒定”以及“DNA片段的擴(kuò)增及電泳鑒定”實(shí)驗(yàn)，下列說法錯(cuò)誤的是（）A．將洋蔥研磨液離心是為了加速雜質(zhì)的沉淀 B．根據(jù)DNA在不同濃度NaCl溶液中的溶解度不同，可去除部分雜質(zhì) C．DNA分子在電場(chǎng)作用下可以帶上正電荷或負(fù)電荷 D．PCR實(shí)驗(yàn)中使用的微量離心管和槍頭在使用前需進(jìn)行高壓滅菌處理19．用氨芐青霉素抗性基因（AmpR）、四環(huán)素抗性基因（TetR）作為標(biāo)記基因構(gòu)建的質(zhì)粒如圖所示。用含有目的基因的DNA片段和用不同限制酶酶切后的質(zhì)粒，構(gòu)建重組質(zhì)粒，并轉(zhuǎn)化到受體菌中。下列敘述不正確的是（）A．若用HindⅢ酶切，通過篩選可得到兩種目的基因連入方向的重組質(zhì)粒 B．若用PvuⅠ酶切，在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上形成的菌落一定不含目的基因 C．若用SphⅠ酶切，使用雙抗生素平板篩選即可獲得正確的重組質(zhì)粒 D．若用ScaⅠ酶切，可通過瓊脂糖凝膠電泳技術(shù)鑒定重組質(zhì)粒構(gòu)建是否成功20．免疫PCR是對(duì)微量抗原的一種檢測(cè)方法。如圖是利用該技術(shù)檢測(cè)牛乳中微量抗生素的流程圖：首先將抗體1固定在微板上，沖洗后加入待檢的牛乳，再加入DNA標(biāo)記的抗體2，進(jìn)行PCR擴(kuò)增，最后進(jìn)行電泳檢測(cè)。下列相關(guān)敘述正確的是（）A．圖示抗原檢測(cè)過程發(fā)生三次抗原與抗體的結(jié)合 B．圖示過程所需抗體可用動(dòng)物細(xì)胞工程技術(shù)制取 C．圖示過程中三次沖洗都是為了去除未結(jié)合的抗體 D．PCR擴(kuò)增獲得產(chǎn)物的量只與標(biāo)記DNA數(shù)量有關(guān)二．解答題（共5小題）21．東方果蠅會(huì)對(duì)水果造成嚴(yán)重影響，田間雌蠅數(shù)量與經(jīng)濟(jì)損失直接相關(guān)。（1）研究發(fā)現(xiàn)，東方果蠅中dsx基因出的前體RNA在加工過程中具有獨(dú)特的性別選擇性剪接機(jī)制。利用這一特性研發(fā)雌性特異性致死基因系統(tǒng)。（2）蓖麻毒素A（RTA）可通過破壞核糖體導(dǎo)致細(xì)胞死亡。研究者獲得如圖1所示的融合基因1，進(jìn)而得到轉(zhuǎn)基因果蠅。①根據(jù)圖1，擴(kuò)增dsx內(nèi)含子應(yīng)選擇的引物是（選填字母）。②由于存在性別選擇性剪接機(jī)制，雌雄轉(zhuǎn)基因果蠅dsx基因前體RNA保留或剪切內(nèi)含子和剪切識(shí)別序列情況不同，產(chǎn)生了不同版本的成熟mRNA，導(dǎo)致雌蠅特異性致死。判斷轉(zhuǎn)基因雌蠅中的成熟mRNA為（如圖3填字母序號(hào)）。轉(zhuǎn)基因的雄性個(gè)體不會(huì)致死的原因是。（3）研究發(fā)現(xiàn)，RTA蛋白第212位甘氨酸替換為精氨酸會(huì)出現(xiàn)冷敏感效應(yīng)（cs），即當(dāng)溫度由29℃變?yōu)?8℃時(shí)，可抑制RTA蛋白對(duì)細(xì)胞的致死作用。利用此特性培育純合轉(zhuǎn)基因果蠅。①欲得到具有cs效應(yīng)的RTAcs蛋白，推測(cè)對(duì)應(yīng)的基因堿基序列，經(jīng)定點(diǎn)突變獲得融合基因2（如圖2所示）。請(qǐng)?jiān)诜娇蛑挟嫵隹衫^續(xù)延伸的復(fù)性結(jié)果，要求標(biāo)明每條鏈的5′端和3′端。②對(duì)轉(zhuǎn)入融合基因2的果蠅進(jìn)行以下操作：?。涸?9℃收集雄性果蠅（G0）。ⅱ：G0與野生型果蠅雜交，篩選出轉(zhuǎn)基因受精卵（G1）。ⅲ：將每對(duì)親本的受精卵（G1）均分為兩組，分別在18℃和29℃孵化培養(yǎng)，統(tǒng)計(jì)兩組中雄性個(gè)體所占比例，若，則說明G1具有cs效應(yīng)。ⅳ：在℃繼續(xù)培養(yǎng)具有cs效應(yīng)的G1果蠅，使之連續(xù)多代自交，得到轉(zhuǎn)基因純合子。22．光敏色素基因在調(diào)節(jié)作物生長(zhǎng)發(fā)育中具有重要作用。為探討玉米中光敏色素基因A（含大約256個(gè)堿基對(duì)）在棉花種質(zhì)資源中的利用價(jià)值，研究人員將A基因轉(zhuǎn)入到棉花中，對(duì)棉花受體細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè)，并通過電泳技術(shù)分析結(jié)果。該過程所用質(zhì)粒上相關(guān)限制酶的酶切位點(diǎn)如圖甲所示，電泳檢測(cè)結(jié)果如圖乙所示?；卮鹣铝袉栴}：（1）操作過程中需要用到的工具有，構(gòu)建表達(dá)載體時(shí)應(yīng)選用這兩種限制酶處理質(zhì)粒。（2）為保證通過mRNA逆轉(zhuǎn)錄獲得的光敏色素基因A和質(zhì)粒的充分連接，一般需要在該基因上、下游引物的端分別添加酶切位點(diǎn)。一般在這兩部位添加不同的酶切位點(diǎn)，主要目的是。（3）A同學(xué)認(rèn)為僅由圖乙電泳結(jié)果不能確定1、3、4號(hào)轉(zhuǎn)基因棉花均培育成功，理由是。（4）在生物學(xué)領(lǐng)域，對(duì)光敏色素進(jìn)行分子改造使用的技術(shù)是蛋白質(zhì)工程。獲得光敏色素分子的基本途徑為：→設(shè)計(jì)預(yù)期的光敏色素的分子結(jié)構(gòu)→推測(cè)應(yīng)有的→找到相對(duì)應(yīng)的脫氧核苷酸序列。23．利用乳酸菌構(gòu)建表達(dá)抗原蛋白的工程菌是研究抗原應(yīng)用的重要手段之一?？诜娜樗峋稍谙纼?nèi)定植存活，其表達(dá)的抗原蛋白可錨定于細(xì)胞表面（穿過細(xì)胞膜展示在細(xì)胞表面），誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生免疫反應(yīng)?？茖W(xué)家將某病毒抗原蛋白的部分編碼序列（RBD）拼接成融合基因2RBD和3RBD，探究RBD的二聚體蛋白和三聚體蛋白能否模擬抗原蛋白中RBD的天然構(gòu)象并獲得高效免疫原性。重組質(zhì)粒構(gòu)建流程如圖1所示，NcoⅠ和SacⅠ是pNZ8149質(zhì)粒上的限制酶識(shí)別位點(diǎn)，U﹣M為信號(hào)肽﹣細(xì)胞壁錨定蛋白序列?；卮鹣铝袉栴}：（1）為滿足乳酸菌生長(zhǎng)的特殊需求，培養(yǎng)基除了提供碳源、氮源、水和無機(jī)鹽外，還需要添加，并在（填“有氧”或“無氧”）的環(huán)境條件下培養(yǎng)。（2）拼接形成的融合基因不具備限制酶切割位點(diǎn)，利用PCR技術(shù)對(duì)融合基因進(jìn)行擴(kuò)增時(shí)，所用兩種引物的5'端應(yīng)分別添加序列，以實(shí)現(xiàn)融合基因定向插入質(zhì)粒。（3）為鑒定重組質(zhì)粒是否構(gòu)建成功，將重組質(zhì)粒雙酶切處理后電泳，結(jié)果如圖2，泳道1為雙酶切pNZ8149﹣2RBD，泳道2為雙酶切pNZ8149﹣3RBD。泳道1兩個(gè)條帶大小分別為2507bp和2020bp，由此可知，融合基因3RBD的長(zhǎng)度為bp，泳道2呈現(xiàn)一個(gè)條帶的原因是。（4）實(shí)驗(yàn)成功構(gòu)建了表達(dá)融合蛋白的重組乳酸菌，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在蛋白表達(dá)量和穩(wěn)定性相同的情況下，pNZ8149﹣2RBD菌株表面二聚體蛋白的含量比pNZ8149﹣3RBD菌株表面三聚體蛋白多，該現(xiàn)象說明。24．瘦素是一種由脂肪組織合成和分泌的肽類激素。P載體含有的綠色熒光蛋白（GFP）基因能在真核細(xì)胞中表達(dá)GFP。將目的基因插入GFP基因后，能表達(dá)出目的蛋白和GFP的融合蛋白，根據(jù)熒光的強(qiáng)弱，可確定目的基因在細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)情況。為研究瘦素的功能，科學(xué)家構(gòu)建了瘦素基因真核表達(dá)載體，檢測(cè)瘦素基因在小鼠成纖維細(xì)胞中的表達(dá)情況。瘦素基因及P載體的結(jié)構(gòu)如圖所示?；卮鹣铝袉栴}。（1）PCR擴(kuò)增瘦素基因時(shí)，與引物1互補(bǔ)的a鏈左側(cè)是脫氧核苷酸鏈的（填“5′”或“3′”）端。據(jù)圖推測(cè)，構(gòu)建該基因表達(dá)載體時(shí)，P載體上應(yīng)有啟動(dòng)子、終止子、標(biāo)記基因、復(fù)制原點(diǎn)、。（2）已知HindⅢ和BamHⅠ在P載體上的切割位點(diǎn)非常接近。為確定重組質(zhì)粒是否構(gòu)建成功，用HindⅢ、BamHⅠ分別對(duì)瘦素基因PCR產(chǎn)物、P載體和重組質(zhì)粒雙酶切，再進(jìn)行電泳，結(jié)果如圖所示。若重組質(zhì)粒構(gòu)建成功，請(qǐng)?jiān)趫D中將酶切結(jié)果對(duì)應(yīng)位置的條帶涂黑。（3）Kanr/Neor是一種抗性基因，在真核細(xì)胞中表達(dá)具有新霉素抗性，而在原核細(xì)胞中表達(dá)具有卡那霉素抗性。同種基因在真核、原核細(xì)胞中表達(dá)結(jié)果不同，可能的原因是。本實(shí)驗(yàn)中為篩選轉(zhuǎn)化的細(xì)胞，應(yīng)在培養(yǎng)基中添加。（4）為檢測(cè)瘦素基因是否成功表達(dá)，可用的鑒定方法是（答出2種）。為進(jìn)一步獲得更多能表達(dá)融合蛋白的細(xì)胞，還需要進(jìn)行。25．科學(xué)家提出了利用基因工程改造大腸桿菌生產(chǎn)人胰島素的方法：利用胰島B細(xì)胞中的mRNA得到胰島素基因，利用工程菌獲得胰島素?；卮鹣铝袉栴}：（1）利用胰島B細(xì)胞中的mRNA得到胰島素基因需要酶。（2）基因工程中的核心工作是，該過程需要的工具酶是。（3）如圖是利用基因工程生產(chǎn)人胰島素過程中使用的質(zhì)粒及目的基因的部分結(jié)構(gòu)。在設(shè)計(jì)PCR引物時(shí)最好添加限制酶的識(shí)別序列，選擇依據(jù)是。經(jīng)GenBank檢索后，得知胰島素基因左端①處的堿基序列為﹣GCATTCTGAGGC﹣，則其中一種引物設(shè)計(jì)的序列是5′﹣﹣3′。

2025年菁優(yōu)高考生物解密之基因工程參考答案與試題解析一．選擇題（共20小題）1．蛛絲蛋白是一種特殊纖維蛋白，具有強(qiáng)度高、韌性大等特點(diǎn)，在人工肌腱等醫(yī)學(xué)領(lǐng)域有著誘人的前景。某研究小組提取一種絲絨蜘蛛中的蛛絲蛋白基因，將其導(dǎo)入大腸桿菌生產(chǎn)蛛絲蛋白。下列敘述正確的是（）A．構(gòu)建蛛絲蛋白基因表達(dá)載體需要限制酶和DNA聚合酶 B．可通過顯微注射的方法將蛛絲蛋白基因?qū)氪竽c桿菌 C．基因表達(dá)載體上的復(fù)制原點(diǎn)可調(diào)控蛛絲蛋白基因的表達(dá) D．可通過蛋白質(zhì)工程設(shè)計(jì)與改造蛛絲蛋白的結(jié)構(gòu)以增強(qiáng)其韌性【考點(diǎn)】蛋白質(zhì)工程基本原理．【專題】正推法；基因工程．【答案】D【分析】1、基因工程的基本操作步驟主要包括四步：①目的基因的篩選和獲??；②基因表達(dá)載體的構(gòu)建；③將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞；④目的基因的檢測(cè)與表達(dá)。2、蛋白質(zhì)工程：指以蛋白質(zhì)分子的結(jié)構(gòu)規(guī)律及其生物功能的關(guān)系作為基礎(chǔ)，通過基因修飾或基因合成，對(duì)現(xiàn)有蛋白質(zhì)進(jìn)行改造，或制造一種新的蛋白質(zhì)，以滿足人類的生產(chǎn)和生活的需求?！窘獯稹拷猓篈、構(gòu)建蛛絲蛋白基因表達(dá)載體需要限制酶和DNA連接酶，不需要DNA聚合酶，A錯(cuò)誤；B、將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞常用感受態(tài)轉(zhuǎn)化法，將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞常用顯微注射法，B錯(cuò)誤；C、基因表達(dá)載體上的復(fù)制原點(diǎn)可調(diào)控蛛絲蛋白基因的復(fù)制，而不是表達(dá)，C錯(cuò)誤；D、蛋白質(zhì)工程是指以蛋白質(zhì)分子的結(jié)構(gòu)規(guī)律及其生物功能的關(guān)系作為基礎(chǔ)，通過基因修飾或基因合成，對(duì)現(xiàn)有蛋白質(zhì)進(jìn)行改造，或制造一種新的蛋白質(zhì)，以滿足人類的生產(chǎn)和生活的需求。若需對(duì)蛛絲蛋白進(jìn)行設(shè)計(jì)和改造以增強(qiáng)其韌性，可通過蛋白質(zhì)工程來實(shí)現(xiàn)，D正確。故選：D?！军c(diǎn)評(píng)】本題考查基因工程和蛋白質(zhì)工程的相關(guān)知識(shí)，要求考生識(shí)記基因工程的操作步驟，掌握各操作步驟中需要注意的細(xì)節(jié)；識(shí)記蛋白質(zhì)工程的基本程序，能結(jié)合所學(xué)的知識(shí)準(zhǔn)確答題。2．某同學(xué)利用洋蔥為實(shí)驗(yàn)材料，進(jìn)行DNA粗提取和鑒定實(shí)驗(yàn)。下列有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（）A．該同學(xué)也可選擇雞血、豬肝等動(dòng)物細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)材料提取DNA，但方法可能有所不同 B．將洋蔥切碎加研磨液研磨、過濾后，濾液放置4℃冰箱中靜置幾分鐘后，DNA存在于沉淀物中 C．向含有DNA的粗提取液中加入體積分?jǐn)?shù)為95%的冷酒精后，出現(xiàn)的白色絲狀物為DNA D．鑒定DNA時(shí)，需先將DNA溶解在2mol/LNaCl溶液，再加入二苯胺試劑并進(jìn)行沸水浴加熱【考點(diǎn)】DNA的粗提取與鑒定．【專題】正推法；基因工程．【答案】B【分析】DNA粗提取和鑒定的原理：（1）DNA的溶解性：DNA和蛋白質(zhì)等其他成分在不同濃度NaCl溶液中溶解度不同；DNA不溶于酒精溶液，但細(xì)胞中的某些蛋白質(zhì)溶于酒精。（2）DNA的鑒定：在沸水浴的條件下，DNA遇二苯胺會(huì)呈現(xiàn)藍(lán)色。【解答】解：A、理論上只要含有DNA的生物組織均可作為該實(shí)驗(yàn)的材料，因此雞血，豬肝等均可作為提取DNA的材料，但方法可能有所不同，A正確；B、將洋蔥切碎加研磨液研磨、過濾后，濾液放置4℃冰箱中靜置幾分鐘后，DNA存在于上清液中，B錯(cuò)誤；C、向含有DNA的粗提取液中加入體積分?jǐn)?shù)為95%的冷酒精后，出現(xiàn)的白色絲狀物為粗提取的DNA，C正確；D、鑒定DNA時(shí)，需先將DNA溶解在2mol/LNaCl溶液，再加入二苯胺試劑并進(jìn)行沸水浴加熱，待試管冷卻后觀察顏色變化，D正確。故選：B。【點(diǎn)評(píng)】本題主要考查DNA的粗提取與鑒定等相關(guān)知識(shí)點(diǎn)，意在考查學(xué)生對(duì)相關(guān)知識(shí)點(diǎn)的理解和掌握。3．下列有關(guān)基因工程的敘述正確的是（）A．將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞采用最多的方法是花粉管通道法 B．將某藥用蛋白基因?qū)雱?dòng)物乳腺細(xì)胞中可獲得乳腺生物反應(yīng)器 C．目的基因擴(kuò)增完成后的產(chǎn)物常用瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行鑒定 D．可通過RNA分子標(biāo)記檢測(cè)目的基因是否成功表達(dá)【考點(diǎn)】基因工程的操作過程綜合．【專題】正推法；基因工程．【答案】C【分析】基因工程技術(shù)的基本步驟：（1）目的基因的獲?。悍椒ㄓ袕幕蛭膸?kù)中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成；（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括復(fù)制原點(diǎn)、目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等；（3）將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣。將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法和花粉管通道法；將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞的方法是鈣離子處理法；（4）目的基因的檢測(cè)與鑒定：分子水平上的檢測(cè)：檢測(cè)目的基因是否導(dǎo)入或轉(zhuǎn)錄：PCR技術(shù)；檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)：抗原﹣抗體雜交技術(shù)；個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等?！窘獯稹拷猓篈、將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞采用最多的方法是農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，A錯(cuò)誤；B、將某藥用蛋白基因?qū)雱?dòng)物受精卵中可獲得乳腺生物反應(yīng)器，B錯(cuò)誤；C、PCR的產(chǎn)物一般通過瓊脂糖凝膠電泳來鑒定。在凝膠中DNA分子的遷移速率與凝膠的濃度、DNA分子的大小和構(gòu)象等有關(guān)。凝膠中的DNA分子通過染色，可以在波長(zhǎng)為300nm的紫外燈下被檢測(cè)出來，C正確；D、目的基因是否成功表達(dá)可用抗原﹣抗體雜交法，D錯(cuò)誤。故選：C?！军c(diǎn)評(píng)】本題考查了基因工程的相關(guān)知識(shí)，意在考查考生理解所學(xué)知識(shí)要點(diǎn)，把握知識(shí)間內(nèi)在聯(lián)系的能力；能運(yùn)用所學(xué)知識(shí)，對(duì)生物學(xué)問題作出準(zhǔn)確的判斷，難度適中。4．t﹣PA蛋白能高效降解由纖維蛋白凝聚而成的血栓，是心梗和腦血栓的急救藥。但t﹣PA與纖維蛋白結(jié)合的特異性不高，給心?；颊咦⑸浯罅縯﹣PA會(huì)誘發(fā)顱內(nèi)出血。若將t﹣PA第84位的半胱氨酸換成絲氨酸，獲得改良藥物t﹣PA，能顯著降低出血副作用。下列敘述正確的是（）A．對(duì)t﹣PA蛋白的改良，是以基因的結(jié)構(gòu)和功能的關(guān)系為理論基礎(chǔ) B．在該研究中目前可行的直接操作對(duì)象是控制t﹣PA合成的基因 C．通過蛋白質(zhì)工程制備t﹣PA蛋白可以不用構(gòu)建基因表達(dá)載體 D．將改良的t﹣PA基因直接注入大腸桿菌，是生產(chǎn)改良t﹣PA蛋白的核心步驟【考點(diǎn)】蛋白質(zhì)工程基本原理．【專題】正推法；基因工程．【答案】B【分析】蛋白質(zhì)工程：指以蛋白質(zhì)分子的結(jié)構(gòu)規(guī)律及其生物功能的關(guān)系作為基礎(chǔ)，通過基因修飾或基因合成，對(duì)現(xiàn)有蛋白質(zhì)進(jìn)行改造，或制造一種新的蛋白質(zhì)，以滿足人類的生產(chǎn)和生活的需求（基因工程在原則上只能生產(chǎn)自然界已存在的蛋白質(zhì)）?！窘獯稹拷猓篈、對(duì)t﹣PA蛋白的改良，屬于蛋白質(zhì)工程的范疇，是以蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和功能的關(guān)系為理論基礎(chǔ)，A錯(cuò)誤；B、蛋白質(zhì)的改造工程直接改變的是控制蛋白質(zhì)合成所對(duì)應(yīng)的基因，B正確；CD、蛋白質(zhì)工程是基因工程的延伸，同樣需要構(gòu)建表達(dá)載體，構(gòu)建基因表達(dá)載體是生產(chǎn)改良t﹣PA蛋白的核心步驟，CD錯(cuò)誤。故選：B?！军c(diǎn)評(píng)】本題主要考查蛋白質(zhì)工程的內(nèi)容，要求考生識(shí)記相關(guān)知識(shí)，并結(jié)合所學(xué)知識(shí)準(zhǔn)確答題。5．水蛭是我國(guó)的傳統(tǒng)中藥材，主要藥理成分水蛭素為水蛭蛋白中重要成分之一，具有良好的抗凝血作用?？蒲腥藛T擬通過蛋白質(zhì)工程改造水蛭素結(jié)構(gòu)，提高其抗凝血活性。將提取的水蛭蛋白經(jīng)甲、乙兩種蛋白酶水解后，分析水解產(chǎn)物中的肽含量及其抗凝血活性，結(jié)果如圖所示。下列敘述錯(cuò)誤的是（）A．水蛭蛋白經(jīng)兩種酶處理后水解產(chǎn)物的抗凝血活性差異主要與其肽含量有關(guān) B．酶甲處理使水蛭素抗凝血活性提高的可能原因是使其有活性的結(jié)構(gòu)域部位暴露 C．要獲得水蛭素的基因，可以從水蛭細(xì)胞中提取mRNA，經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄獲得目的基因 D．上述實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖橇私馑嗡氐鞍字杏绊懣鼓钚缘牟糠忠栽O(shè)計(jì)蛋白質(zhì)三維結(jié)構(gòu)【考點(diǎn)】蛋白質(zhì)工程基本原理．【專題】坐標(biāo)曲線圖；基因工程．【答案】A【分析】據(jù)圖可知，水蛭蛋白經(jīng)甲、乙兩種蛋白酶水解后，水解產(chǎn)物中的肽含量隨著時(shí)間的延長(zhǎng)均上升，且差別不大；而水解產(chǎn)物中抗凝血活性有差異，經(jīng)酶甲處理后，隨著酶解時(shí)間延長(zhǎng)，抗凝血活性先上升后相對(duì)穩(wěn)定，經(jīng)酶乙處理后，隨著酶解時(shí)間的延長(zhǎng)，抗凝血活性先上升后下降，且酶甲處理后的酶解產(chǎn)物的抗凝血活性最終明顯高于經(jīng)酶乙處理的酶解產(chǎn)物的抗凝血活性；據(jù)此推測(cè)兩種處理后酶解產(chǎn)物的抗凝血活性差異主要與肽的種類有關(guān)，導(dǎo)致其活性不同的原因可能是對(duì)水蛭蛋白進(jìn)行酶解時(shí)所用酶的種類不同，導(dǎo)致水蛭蛋白水解產(chǎn)物的空間結(jié)構(gòu)不同?！窘獯稹拷猓篈、兩種酶水解水蛭蛋白后，肽的含量的兩條曲線比較接近，說明抗凝血的活性與肽的含量關(guān)聯(lián)不大，A錯(cuò)誤；B、酶甲處理后的酶解產(chǎn)物的抗凝血活性先上升后相對(duì)穩(wěn)定，由此推測(cè)酶甲處理使水蛭素抗凝血活性提高的可能原因是使其有活性的結(jié)構(gòu)域部位暴露，B正確；C、為了獲得水蛭素基因，需要從細(xì)胞中提取水蛭素基因轉(zhuǎn)錄的mRNA，經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄獲取目的基因，C正確；D、對(duì)水蛭素進(jìn)行分子改造使用的技術(shù)是蛋白質(zhì)工程，獲得上述分子的基本途徑為：預(yù)期蛋白質(zhì)功能→設(shè)計(jì)預(yù)期的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)→推測(cè)應(yīng)有氨基酸序列→據(jù)氨基酸序列推出脫氧核苷酸序列（基因）→DNA合成，上述實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖橇私馑嗡氐鞍字杏绊懣鼓钚缘牟糠忠栽O(shè)計(jì)蛋白質(zhì)三維結(jié)構(gòu)，D正確。故選：A?！军c(diǎn)評(píng)】本題考查蛋白質(zhì)工程的相關(guān)知識(shí)，意在考查學(xué)生的識(shí)記能力和判斷能力，運(yùn)用所學(xué)知識(shí)綜合分析問題的能力是解答本題的關(guān)鍵。6．實(shí)驗(yàn)小組利用PCR技術(shù)獲得了含有目的基因的DNA片段，并用圖示的限制酶對(duì)其進(jìn)行酶切，再用所得DNA片段成功構(gòu)建了基因表達(dá)載體，下列敘述錯(cuò)誤的是（）A．PCR技術(shù)中用到的一個(gè)引物的前8個(gè)堿基序列為5'﹣TGCGCAGT﹣3' B．步驟①中用到的限制酶是SpeⅠ和CfoⅠ C．用步驟①中的限制酶對(duì)質(zhì)粒進(jìn)行酶切，可至少獲得2個(gè)DNA片段 D．可用E.coliDNA連接酶或T4DNA連接酶連接酶切后的目的基因片段和質(zhì)?！究键c(diǎn)】基因表達(dá)載體的構(gòu)建；DNA片段的擴(kuò)增與電泳鑒定；DNA連接酶．【專題】模式圖；基因工程．【答案】B【分析】DNA連接酶：（1）根據(jù)酶的來源不同分為兩類：E.coliDNA連接酶、T4DNA連接酶。這二者都能連接黏性末端，此外T4DNA連接酶還可以連接平末端，但連接平末端時(shí)的效率比較低。（2）DNA連接酶連接的是兩個(gè)DNA片段之間的磷酸二酯鍵?！窘獯稹拷猓篈、由于引物只能引導(dǎo)子鏈從5'到3'，根據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則，其中一個(gè)引物序列為5'TGCGCAGT﹣3'，A正確；B、根據(jù)三種酶的酶切位點(diǎn)，左側(cè)的黏性末端是使用NheⅠ切割形成的，右邊的黏性末端是用CfoⅠ切割形成的，B錯(cuò)誤；C、用步驟①的酶對(duì)載體進(jìn)行酶切，使用了NheⅠ和CfoⅠ進(jìn)行切割，根據(jù)他們的識(shí)別位點(diǎn)以及原本DNA的序列，切割之后至少獲得了2個(gè)片段，C正確；D、圖中形成的是黏性末端，E.coliDNA連接酶只能連接黏性末端，T4DNA連接酶既可連接平末端，又可連接黏性末端，所以可用E.coliDNA連接酶或T4DNA連接酶連接酶切后的目的基因片段和質(zhì)粒，D正確。故選：B?！军c(diǎn)評(píng)】本題考查基因工程的相關(guān)知識(shí)，要求考生識(shí)記基因工程的操作工具及操作步驟，掌握各操作工具的作用和各操作步驟中需要注意的細(xì)節(jié)，能正確分析題圖，再結(jié)合所學(xué)的知識(shí)準(zhǔn)確答題。7．紅豆草是一種品質(zhì)優(yōu)良的豆科多年生高蛋白牧草作物，被譽(yù)為“牧草皇后”。為提高紅豆草的耐鹽性、增大種植范圍，科研人員將鹽生植物堿蓬中的耐鹽基因SsPSL轉(zhuǎn)入紅豆草中，對(duì)轉(zhuǎn)基因耐鹽紅豆草DNA進(jìn)行PCR，再對(duì)PCR的產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳鑒定。下列有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（）A．利用PCR獲取和擴(kuò)增耐鹽基因SsPSL，需添加一種引物，四種核糖核苷酸等組分 B．構(gòu)建基因表達(dá)載體是培育轉(zhuǎn)基因耐鹽紅豆草的核心工作 C．將植物材料和農(nóng)桿菌共同培養(yǎng)之前，植物材料需要消毒處理 D．凝膠中的DNA分子通過染色，可以在波長(zhǎng)為300nm的紫外燈下被檢測(cè)出來【考點(diǎn)】DNA片段的擴(kuò)增與電泳鑒定．【專題】正推法；PCR技術(shù)；基因工程．【答案】A【分析】PCR的產(chǎn)物一般通過瓊脂糖凝膠電泳來鑒定。在凝膠中DNA分子的遷移速率與凝膠的濃度、DNA分子的大小和構(gòu)象等有關(guān)，凝膠中的DNA分子通過染色，可以在波長(zhǎng)為300nm的紫外燈下被檢測(cè)出來。【解答】解：A、利用PCR獲取和擴(kuò)增耐鹽基因SsPSL，需添加兩種引物，四種脫氧核苷酸等組分，A錯(cuò)誤；B、構(gòu)建基因表達(dá)載體是基因工程的核心，B正確；C、為防止雜菌污染，將植物材料和農(nóng)桿菌共同培養(yǎng)之前，植物材料需要消毒處理，C正確；D、DNA分子的大小和構(gòu)象等有關(guān)，凝膠中的DNA分子通過染色，可以在波長(zhǎng)為300nm的紫外燈下被檢測(cè)出來，D正確。故選：A?！军c(diǎn)評(píng)】本題考查PCR技術(shù)、基因工程的相關(guān)知識(shí)，要求考生理解識(shí)記有關(guān)技術(shù)的原理及操作步驟，掌握各操作步驟中需要注意的細(xì)節(jié)，能將教材中的知識(shí)結(jié)合題中信息進(jìn)行遷移應(yīng)用。8．普通棉花中β﹣甘露糖苷酶（GhMnaA2）基因表達(dá)出的GhMnaA2能催化半纖維素降解，使棉纖維長(zhǎng)度變短。為了培育長(zhǎng)絨棉，科研人員構(gòu)建了反義GhMnaA2基因表達(dá)載體（將正義GhMnaA2基因與載體反向連接），獲得了轉(zhuǎn)基因長(zhǎng)絨棉新品種，具體過程如圖所示，SmaⅠ，NotⅠ，HindⅢ和BamHⅠ為酶切位點(diǎn)。用SmaⅠ和NotⅠ切割某正義表達(dá)載體可獲得3kb、18kb、28kb、59kb4種長(zhǎng)度的DNA片段。下列敘述正確的是（）A．正義GhMnaA2基因的轉(zhuǎn)錄方向是B→A B．①過程所得到的表達(dá)載體均為反義表達(dá)載體 C．反義GhMnaA2基因可能通過抑制GhMnaA2基因的翻譯來保證棉纖維長(zhǎng)度 D．用NotⅠ切割反義表達(dá)載體獲得的DNA片段的長(zhǎng)度為21kb和87kb【考點(diǎn)】基因表達(dá)載體的構(gòu)建．【專題】模式圖；基因工程．【答案】C【分析】基因工程技術(shù)的基本步驟：（1）目的基因的獲?。悍椒ㄓ袕幕蛭膸?kù)中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成。（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等。（3）將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣。（4）目的基因的檢測(cè)與鑒定?！窘獯稹拷猓篈、由圖可知，NotI的酶切位點(diǎn)靠近GhMnaA2基因轉(zhuǎn)錄的起始端，其轉(zhuǎn)錄方向是A→B，A錯(cuò)誤；B、①過程得到的表達(dá)載體可能為反義表達(dá)載體，也可能為正義表達(dá)載體，B錯(cuò)誤；C、反義GhMnaA2基因轉(zhuǎn)錄出來的RNA與正常轉(zhuǎn)錄的mRNA互補(bǔ)，從而阻止其與核糖體結(jié)合，即反義GhMnaA2基因可能通過抑制GhMnaA2基因的翻譯來保證棉纖維長(zhǎng)度，C正確；D、用SmaI和NotI切割正義表達(dá)載體可獲得3kb、18kb、28kb、59kb4種長(zhǎng)度的DNA片段，據(jù)此判斷左側(cè)SmaI和NotI之間的長(zhǎng)度是59kb，A位置的SmaI和NotI之間的長(zhǎng)度是3kb，B位置處的SmaI和NotI之間的長(zhǎng)度是18kb，右上角E6位置好處SmaI和NotI之間的長(zhǎng)度是28kb。故用NotI切割反義表達(dá)載體獲得的DNA片段的長(zhǎng)度應(yīng)分別為18kb+28kb＝46kb和3kb+59kb＝62kb，D錯(cuò)誤。故選：C?！军c(diǎn)評(píng)】本題主要考查的是基因工程的操作的相關(guān)知識(shí)，意在考查學(xué)生對(duì)基礎(chǔ)知識(shí)的理解掌握，難度適中。9．DNA分子的堿基具有吸收260nm波長(zhǎng)光的特性。當(dāng)DNA兩條鏈堿基緊密連接時(shí)，吸光度偏低；兩條鏈分離時(shí)，吸光度升高，因此DNA變性可通過DNA溶液對(duì)260nm波長(zhǎng)光的吸光度來檢測(cè)。肺炎鏈球菌DNA的變性曲線如圖所示，吸光度達(dá)到最大值的50%時(shí)的溫度稱為熔解溫度（Tm）。下列說法正確的是（）A．加熱會(huì)破壞脫氧核苷酸之間的磷酸二酯鍵使DNA變性 B．A、T堿基對(duì)所占比例越高的DNA，變性曲線中Tm值越高 C．加熱至約70℃時(shí)DNA兩條鏈從一端向另一端逐漸分離 D．利用PCR技術(shù)檢測(cè)目的基因時(shí)需要先將DNA變性【考點(diǎn)】DNA片段的擴(kuò)增與電泳鑒定；DNA的結(jié)構(gòu)層次及特點(diǎn)．【專題】坐標(biāo)曲線圖；DNA分子結(jié)構(gòu)和復(fù)制；PCR技術(shù)．【答案】D【分析】DNA變性的本質(zhì)原因是：DNA雙螺旋分子結(jié)構(gòu)在某種因素的作用下，DNA分子互補(bǔ)堿基對(duì)之間的氫鍵斷裂，使.DNA分子雙螺旋結(jié)構(gòu)疏散，雙鏈裂解變成單鏈，進(jìn)行解鏈反應(yīng)，解鏈后即稱為DNA變性。【解答】解：A、加熱是使DNA分子互補(bǔ)堿基對(duì)之間的氫鍵斷裂，使DNA分子雙螺旋結(jié)構(gòu)疏散，雙鏈裂解變成單鏈，進(jìn)行解鏈反應(yīng)，使DNA變性，A錯(cuò)誤；B、A、T堿基對(duì)有兩個(gè)氫鍵，C、G堿基對(duì)有三個(gè)氫鍵，A、T堿基對(duì)所占比例越高的DNA變性時(shí)需要的溫度越低，即變性曲線中Tm值越低，B錯(cuò)誤；C、加熱至約70℃時(shí)DNA兩條鏈同時(shí)分離，C錯(cuò)誤；D、利用PCR技術(shù)檢測(cè)目的基因時(shí)，需要先將DNA變性，使DNA雙鏈打開，D正確。故選：D。【點(diǎn)評(píng)】本題考查DNA結(jié)構(gòu)和復(fù)制等相關(guān)知識(shí)，意在考查學(xué)生的識(shí)記能力和判斷能力，運(yùn)用所學(xué)知識(shí)綜合分析問題的能力。10．我國(guó)的科研團(tuán)隊(duì)首次發(fā)現(xiàn)了高粱細(xì)胞中AT1基因編碼的AT1蛋白可以調(diào)節(jié)作物的耐堿性表型，對(duì)于提高作物在鹽堿地的存活率具有重要意義。在鹽堿地種植的作物會(huì)受脅迫產(chǎn)生過量的有害物質(zhì)H2O2。圖中的PIP2s為某種水通道蛋白，其磷酸化水平影響H2O2的跨膜運(yùn)輸，其機(jī)理如圖所示。下列敘述錯(cuò)誤的是（）A．鹽堿環(huán)境可引起大多數(shù)作物胞內(nèi)液滲透壓上升，吸水能力增強(qiáng) B．PIP2s失活的植物細(xì)胞在高滲溶液中仍可以發(fā)生質(zhì)壁分離 C．敲除AT1基因?qū)?dǎo)致PIP2s蛋白磷酸化被抑制，促進(jìn)H2O2外排 D．可以將耐堿基因的成果應(yīng)用到大豆、油菜等更多的作物提高其抗逆性【考點(diǎn)】基因工程在農(nóng)牧、醫(yī)療、食品等方面的應(yīng)用；細(xì)胞的吸水和失水；物質(zhì)跨膜運(yùn)輸?shù)姆绞郊捌洚愅緦ｎ}】模式圖；物質(zhì)跨膜運(yùn)輸．【答案】C【分析】當(dāng)細(xì)胞液的濃度小于外界溶液的濃度時(shí)，細(xì)胞液中的水就透過原生質(zhì)層進(jìn)入外界溶液中，使細(xì)胞壁和原生質(zhì)層都出現(xiàn)一定程度的收縮，由于原生質(zhì)層比細(xì)胞壁伸縮性大，表現(xiàn)出質(zhì)壁分離；當(dāng)細(xì)胞液的濃度大于外界溶液的濃度時(shí)，外界溶液中水就透過原生質(zhì)層進(jìn)入細(xì)胞液中，整個(gè)原生質(zhì)層就會(huì)慢慢恢復(fù)原來的狀態(tài)，表現(xiàn)出質(zhì)壁分離的復(fù)原?！窘獯稹拷猓篈、鹽堿環(huán)境可引起大多數(shù)作物細(xì)胞失水，細(xì)胞內(nèi)滲透壓上升，吸水能力增強(qiáng)，A正確；B、PIP2s是水通道蛋白一種，PIP2s失活水分子依然可以通過其他水通道蛋白或者自由擴(kuò)散進(jìn)出細(xì)胞，因此在高滲溶液仍可以發(fā)生質(zhì)壁分離，B正確；C、AT1蛋白能夠抑制PIP2s蛋白的磷酸化，敲除AT1基因?qū)⒔獬鋵?duì)PIP2s蛋白磷酸化的抑制，促進(jìn)H2O2外排，C錯(cuò)誤；D、可以通過基因工程將耐堿基因的成果應(yīng)用到大豆、油菜等更多的作物提高其抗逆性，D正確。故選：C?！军c(diǎn)評(píng)】本題主要考查物質(zhì)跨膜運(yùn)輸、基因工程的應(yīng)用等相關(guān)知識(shí)點(diǎn)，意在考查學(xué)生對(duì)相關(guān)知識(shí)點(diǎn)的理解和掌握。11．科學(xué)家將外源抗蟲基因（Bt抗蟲蛋白基因）轉(zhuǎn)入某茄科植物細(xì)胞中，并整合到該植物的線粒體DNA上，獲得了具有抗蟲性狀的轉(zhuǎn)基因植物。下列敘述，錯(cuò)誤的是（）A．Bt抗蟲蛋白在線粒體中的成功合成與密碼子的通用性有關(guān) B．葉肉細(xì)胞內(nèi)有多個(gè)線粒體，這有利于增加該轉(zhuǎn)基因植物的抗蟲性 C．將該轉(zhuǎn)基因植物與同種非轉(zhuǎn)基因植物進(jìn)行正、反交，所得子代均有抗蟲性 D．該技術(shù)能有效避免或減少外源基因通過花粉向其他植物的轉(zhuǎn)移【考點(diǎn)】基因工程的操作過程綜合．【專題】正推法；基因工程．【答案】C【分析】基因工程技術(shù)的基本步驟：（1）目的基因的獲?。悍椒ㄓ袕幕蛭膸?kù)中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成；（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等，標(biāo)記基因可便于目的基因的鑒定和篩選。（3）將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣。將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法；（4）目的基因的檢測(cè)與鑒定：分子水平上的檢測(cè)：①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因——PCR技術(shù)；②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA——PCR技術(shù)；③檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)——抗原﹣抗體雜交技術(shù)。個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等?！窘獯稹拷猓篈、將外源抗蟲基因（Bt抗蟲蛋白基因）轉(zhuǎn)入茄科植物細(xì)胞線粒體DNA并且成功表達(dá)，說明不同生物之間共用一套遺傳密碼，與密碼子的通用性有關(guān)，A正確；B、葉肉細(xì)胞內(nèi)有多個(gè)線粒體，這有利于增加該轉(zhuǎn)基因植物的抗蟲性，B正確；C、該轉(zhuǎn)基因植物的抗蟲基因整合到線粒體DNA上，屬于細(xì)胞質(zhì)遺傳，與同種非轉(zhuǎn)基因植物進(jìn)行正、反交，所得子代是否有抗蟲性是由母本決定的，C錯(cuò)誤；D、該轉(zhuǎn)基因植物的抗蟲基因整合到線粒體DNA上，屬于細(xì)胞質(zhì)遺傳，能有效避免或減少外源基因通過花粉向其他植物的轉(zhuǎn)移，D正確。故選：C。【點(diǎn)評(píng)】本題主要考查的是基因工程的操作的相關(guān)知識(shí)，意在考查學(xué)生對(duì)基礎(chǔ)知識(shí)的理解掌握，難度適中。12．S基因與作物甜度相關(guān)，可用于培育轉(zhuǎn)S基因作物新品系。已知S基因轉(zhuǎn)錄的模板鏈位于a鏈，轉(zhuǎn)錄時(shí)mRNA自身的延伸方向?yàn)?′→3′。如圖，為使S基因按正確方向與質(zhì)粒連接，酶切目的基因時(shí)選用的限制酶組合是（）A．BamHⅠ和HindⅢ B．BamHⅠ和EcoRⅠ C．MunⅠ和BamHⅠ D．EcoRⅠ和HindⅢ【考點(diǎn)】基因表達(dá)載體的構(gòu)建．【專題】模式圖；基因工程．【答案】A【分析】構(gòu)建基因表達(dá)載體的過程：首先用一定的限制酶切割載體，使它出現(xiàn)一個(gè)切口；然后用同種限制酶或能產(chǎn)生相同末端的限制酶切割含有目的基因的DNA片段；再利用DNA連接酶將目的基因片段拼接到載體的切口處，這樣就形成了一個(gè)重組DNA分子【解答】解：據(jù)圖分析，S基因內(nèi)部含有MunⅠ限制酶識(shí)別序列，質(zhì)粒上EcoRⅠ識(shí)別位點(diǎn)沒有在啟動(dòng)子和終止子之間，不宜選擇；為使S基因按正確方向與質(zhì)粒連接，則需要兩種限制酶進(jìn)行切割，綜上可知，選擇BamHⅠ和HindⅢ，A正確，BCD錯(cuò)誤。故選：A。【點(diǎn)評(píng)】本題主要考查基因工程等相關(guān)知識(shí)等相關(guān)知識(shí)，意在考查考生理解所學(xué)知識(shí)要點(diǎn)，把握知識(shí)間內(nèi)在聯(lián)系的能力。13．下列關(guān)于DNA片段擴(kuò)增及電泳鑒定實(shí)驗(yàn)的說法，錯(cuò)誤的是（）A．放入PCR儀前，需要對(duì)離心管進(jìn)行離心，使反應(yīng)液集中在底部 B．配置瓊脂糖溶液時(shí)，需要根據(jù)DNA片段的大小調(diào)節(jié)瓊脂糖濃度 C．電泳時(shí)需要的兩種緩沖液分別含有核酸染料和指示劑 D．電泳時(shí)，需要根據(jù)電泳槽陽極至陰極之間的距離設(shè)定電壓【考點(diǎn)】DNA片段的擴(kuò)增與電泳鑒定．【專題】正推法；PCR技術(shù)．【答案】C【分析】電泳的原理：待分離樣品中各種分子帶電性質(zhì)的差異以及分子本身的大小、性狀不同，使帶電分子產(chǎn)生不同的遷移速度，從而實(shí)現(xiàn)樣品中各種分子的分離?！窘獯稹拷猓篈、使用PCR技術(shù)的具體操作順序是：按配方準(zhǔn)備好各組分一用微量移液器將各組分依次加入微量離心管中→離心使反應(yīng)液集中在離心管底部→設(shè)計(jì)好PCR儀的循環(huán)程序一進(jìn)行PCR反應(yīng)，因此放入PCR儀前，需要對(duì)離心管進(jìn)行離心，使反應(yīng)液集中在底部，A正確；B、PCR的產(chǎn)物一般通過瓊脂糖凝膠電泳來鑒定。在凝膠中DNA分子的遷移速率與凝膠的濃度、DNA分子的大小和構(gòu)象等有關(guān)，因此根據(jù)DNA片段大小配制一定質(zhì)量分?jǐn)?shù)的瓊脂糖溶液以便分離DNA分子，B正確；C、凝膠載樣緩沖液內(nèi)含指示劑，瓊脂糖溶液加入核酸染料，電泳緩沖液不含有核酸染料，C錯(cuò)誤；D、接通電源，根據(jù)電泳槽陽極至陰極之間的距離來設(shè)定電壓，一般為1～5V/cm，D正確。故選：C。【點(diǎn)評(píng)】本題考查了PCR技術(shù)的相關(guān)知識(shí)，意在考查考生理解所學(xué)知識(shí)要點(diǎn)，把握知識(shí)間內(nèi)在聯(lián)系的能力；能運(yùn)用所學(xué)知識(shí)，對(duì)生物學(xué)問題作出準(zhǔn)確的判斷，難度適中。14．RDX是一種彈藥使用后殘留的危險(xiǎn)污染物。研究人員將兩個(gè)源于細(xì)菌的RDX降解酶基因XplA和XplB插入柳枝稷草染色體中，如圖所示，使柳枝稷草獲得降解實(shí)彈射擊場(chǎng)土壤中RDX的能力。若要通過PCR檢測(cè)所獲轉(zhuǎn)基因柳枝稷草中是否含有正確插入的XplA和XplB基因，應(yīng)選擇的引物組合是（）A．引物1+引物3 B．引物1+引物4 C．引物2+引物3 D．引物2+引物4【考點(diǎn)】DNA片段的擴(kuò)增與電泳鑒定．【專題】模式圖；PCR技術(shù)．【答案】A【分析】引物是一小段能與DNA母鏈的一段堿基序列互補(bǔ)配對(duì)的短單鏈核酸。用于PCR的引物長(zhǎng)度通常為20～30個(gè)核苷酸，檢測(cè)所獲轉(zhuǎn)基因柳枝稷草中是否含有正確插入的XplA和XplB基因，應(yīng)該是擴(kuò)增包括XplA和Xp1B基因和兩側(cè)T﹣DNA基因片段?！窘獯稹拷猓篈、若正確插入，引物1以Xp1B的模板鏈為模板可以擴(kuò)增出XplB基因加部分左側(cè)T﹣DNA基因片段，引物3可以擴(kuò)增出XplA基因和XplB基因片段，可以正確判斷XplA和XplB基因插入順序，A正確；B、引物1可以擴(kuò)增出XplB基因加部分左側(cè)T﹣DNA基因片段，引物4可以擴(kuò)增出XplA基因加部分右側(cè)T﹣DNA基因片段，但是無法確定XplA和XplB基因插入位置是否正確，B錯(cuò)誤；C、引物2和引物3可以擴(kuò)增出XplA、XpIB基因，證明兩者同時(shí)存在，無法確定其是否插入到T﹣DNA上，C錯(cuò)誤；D、引物2可以擴(kuò)增出XplB基因加部分XplA基因片段，引物4可以擴(kuò)增出XplA基因加部分右側(cè)T﹣DNA基因片段，但是無法確定XplA和XplB的正確插入順序，D錯(cuò)誤。故選：A。【點(diǎn)評(píng)】本題主要考查PCR技術(shù)及應(yīng)用的相關(guān)知識(shí)，要求學(xué)生有一定的理解分析能力，能夠結(jié)合題干信息和所學(xué)知識(shí)進(jìn)行分析應(yīng)用。15．2022年1月7日，馬蘭里醫(yī)學(xué)中心成功將豬心臟移植到一名57歲的心臟病患者身上，雖然這顆心臟僅僅存活了2個(gè)月，但仍然為異種器官移植的可行性提供了可觀的數(shù)據(jù)。為了降低免疫排斥反應(yīng)，研究者借助CRISPR/Cas9技術(shù)對(duì)移植的豬心臟進(jìn)行了基因編輯。CRISPR/Cas9系統(tǒng)主要由向?qū)NA（sgRNA）和Cas9蛋白兩部分組成，sgRNA可引導(dǎo)Cas9蛋白到特定基因位點(diǎn)進(jìn)行切割、其機(jī)制如圖所示。下列說法錯(cuò)誤的是（）A．sgRNA通過與目標(biāo)DNA序列互補(bǔ)配對(duì)引導(dǎo)Cas9蛋白到位 B．有時(shí)sgRNA會(huì)因錯(cuò)誤結(jié)合而出現(xiàn)“脫靶”現(xiàn)象，一般sgRNA序列越短，脫靶率越低 C．Cas9蛋白作用于磷酸二酯鍵 D．可以通過設(shè)計(jì)sgRNA，靶向豬心臟的某個(gè)抗原蛋白基因的堿基序列，實(shí)現(xiàn)基因敲除【考點(diǎn)】基因工程在農(nóng)牧、醫(yī)療、食品等方面的應(yīng)用．【專題】模式圖；基因工程．【答案】B【分析】CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)中，sgRNA是根據(jù)目標(biāo)DNA人工設(shè)計(jì)合成的向?qū)NA，與Cas9蛋白結(jié)合形成復(fù)合物。由圖可知，向?qū)NA能特異性識(shí)別目標(biāo)DNA上相關(guān)序列并與之結(jié)合，從而使CRISPR/Cas9系統(tǒng)能精準(zhǔn)識(shí)別相關(guān)基因。Cas9蛋白相當(dāng)于限制酶，能使目標(biāo)DNA中的磷酸二酯鍵斷開，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)DNA雙鏈的切割?！窘獯稹拷猓篈、由于DNA和RNA之間可進(jìn)行堿基互補(bǔ)配對(duì)，因而sgRNA可以特異性識(shí)別目標(biāo)DNA分子，進(jìn)而引導(dǎo)Cas9蛋白到特定基因位點(diǎn)進(jìn)行切割，A正確；B、sgRNA序列越短，DNA分子上與其互補(bǔ)的特定序列會(huì)越多，錯(cuò)誤結(jié)合概率越高，脫靶率越高，B錯(cuò)誤；C、Cas9蛋白為限制酶，可作用于磷酸二酯鍵進(jìn)而可以將目標(biāo)基因剪切下來，C正確；D、根據(jù)CRISPR/Cas9系統(tǒng)的作用，可以通過設(shè)計(jì)sgRNA，靶向豬心臟的某個(gè)抗原蛋白基因的堿基序列，實(shí)現(xiàn)基因敲除，D正確。故選：B?！军c(diǎn)評(píng)】本題結(jié)合圖解，考查基因工程技術(shù)的應(yīng)用，要求考生識(shí)記基因工程的操作工具及各操作工具的作用，能正確分析題文和題圖，明確其中的原理，再結(jié)合所學(xué)的知識(shí)準(zhǔn)確答題。16．XhoⅠ和SalⅠ是兩種限制酶，某段DNA上的酶切位點(diǎn)如圖1所示，用此兩種酶分別處理該DNA片段一段時(shí)間，電泳后的結(jié)果如圖2所示。下列敘述，錯(cuò)誤的是（）A．圖1中兩種限制酶識(shí)別的脫氧核苷酸序列不同 B．泳道①是使用SalⅠ處理后的酶切產(chǎn)物的電泳結(jié)果 C．圖2中電泳移動(dòng)速度最慢的是泳道②最上方的那條帶 D．同時(shí)使用SalⅠ和XhoⅠ處理，酶切產(chǎn)物的電泳結(jié)果為7個(gè)條帶【考點(diǎn)】限制性內(nèi)切核酸酶；DNA片段的擴(kuò)增與電泳鑒定．【專題】模式圖；基因工程．【答案】D【分析】根據(jù)圖1可知，該DNA中含有2個(gè)XhoⅠ酶切位點(diǎn)和3個(gè)SalⅠ酶切位點(diǎn)。結(jié)合圖2中，①有4種片段，②有3種片段可知，前者是SalⅠ酶切產(chǎn)物，后者是XhoⅠ酶切產(chǎn)物。【解答】解：A、不同的限制酶識(shí)別并切割的脫氧核苷酸序列不同，圖1中兩種酶識(shí)別的脫氧核苷酸序列不同，A正確；B、根據(jù)圖2分析泳道①中是用SalⅠ處理（其有3處切割位點(diǎn)，切割后產(chǎn)生4個(gè)DNA片段）得到的酶切產(chǎn)物，B正確；C、電泳移動(dòng)速度快慢主要與DNA片段大小有關(guān)，泳道②最上方的那條帶離點(diǎn)樣孔最近，所以移動(dòng)速度最慢，C正確；D、由題圖可知，若用SalⅠ和XhoⅠ同時(shí)切割該DNA，該DNA的每個(gè)酶切位點(diǎn)都會(huì)被切開，則將被切成6個(gè)片段，如果6個(gè)片段分子大小不同則在泳道中出現(xiàn)6條條帶，如果其中有片段分子大小相同，則條帶數(shù)目小于6條，D錯(cuò)誤。故選：D?！军c(diǎn)評(píng)】本題考查基因工程等相關(guān)知識(shí)點(diǎn)，意在考查根據(jù)題干中信息以及所學(xué)知識(shí)相結(jié)合解決問題的能力。17．高溫會(huì)造成葉綠體內(nèi)活性氧（ROS）大量累積，類囊體薄膜的核心蛋白D1對(duì)ROS尤為敏感，極易受到破壞。近期我國(guó)科學(xué)家將編碼D1的psbA基因（位于葉綠體基因組）與高溫響應(yīng)的啟動(dòng)子連接，導(dǎo)入水稻細(xì)胞的核基因組中，補(bǔ)充了一條由高溫響應(yīng)啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的D1合成途徑，與野生水稻相比，在高溫下轉(zhuǎn)基因水稻光能利用能力顯著提高。下列說法錯(cuò)誤的是（）A．該研究中高溫響應(yīng)的啟動(dòng)子屬于誘導(dǎo)型啟動(dòng)子 B．轉(zhuǎn)基因水稻CO2的同化速率較野生型水稻也相應(yīng)提高 C．細(xì)胞原有的和補(bǔ)充的D1合成途徑的mRNA轉(zhuǎn)錄場(chǎng)所相同 D．該研究為全球氣候變暖造成的糧食高溫脅迫提供了解決方案【考點(diǎn)】基因工程在農(nóng)牧、醫(yī)療、食品等方面的應(yīng)用；遺傳信息的轉(zhuǎn)錄和翻譯．【專題】正推法；基因工程．【答案】C【分析】誘導(dǎo)型啟動(dòng)子：當(dāng)誘導(dǎo)物存在時(shí)，可以激活或抑制目的基因的表達(dá)?！窘獯稹拷猓篈、結(jié)合題意，該研究中高溫響應(yīng)的啟動(dòng)子屬于誘導(dǎo)型啟動(dòng)子，A正確；B、與野生水稻相比，在高溫下轉(zhuǎn)基因水稻光能利用能力顯著提高，故轉(zhuǎn)基因水稻CO2的同化速率較野生型水稻也相應(yīng)提高，B正確；C、編碼D1的psbA基因位于葉綠體基因組，轉(zhuǎn)錄場(chǎng)所為葉綠體，而補(bǔ)充的D1合成途徑的mRNA轉(zhuǎn)錄場(chǎng)所為細(xì)胞核，C錯(cuò)誤；D、該研究可以使植物在高溫下固定二氧化碳增多，為全球氣候變暖造成的糧食高溫脅迫提供了解決方案，D正確。故選：C。【點(diǎn)評(píng)】本題考查基因工程等相關(guān)知識(shí)點(diǎn)，要求考生識(shí)記相關(guān)知識(shí)點(diǎn)，能結(jié)合所學(xué)的知識(shí)準(zhǔn)確答題。18．關(guān)于“DNA粗提取和鑒定”以及“DNA片段的擴(kuò)增及電泳鑒定”實(shí)驗(yàn)，下列說法錯(cuò)誤的是（）A．將洋蔥研磨液離心是為了加速雜質(zhì)的沉淀 B．根據(jù)DNA在不同濃度NaCl溶液中的溶解度不同，可去除部分雜質(zhì) C．DNA分子在電場(chǎng)作用下可以帶上正電荷或負(fù)電荷 D．PCR實(shí)驗(yàn)中使用的微量離心管和槍頭在使用前需進(jìn)行高壓滅菌處理【考點(diǎn)】DNA的粗提取與鑒定；DNA片段的擴(kuò)增與電泳鑒定．【專題】正推法；從生物材料提取特定成分．【答案】C【分析】電泳法：利用分離樣品中各種分子帶電性質(zhì)的差異以及分子本身的大小、形狀不同，使帶電分子產(chǎn)生不同的遷移速率，從而實(shí)現(xiàn)樣品中各種分子的分離。原理：在一定的pH下，多肽、核酸等生物大分子的可解離基團(tuán)會(huì)帶上正電或負(fù)電，在電場(chǎng)的作用下，這些帶電分子會(huì)向著與其所帶電荷相反的電極移動(dòng)?！窘獯稹拷猓篈、將洋蔥研磨液離心是為了加速雜質(zhì)的沉淀，A正確；B、根據(jù)DNA在不同濃度NaCl溶液中的溶解度不同，可去除部分雜質(zhì)，B正確；C、DNA分子具有可解離的基團(tuán)，在一定的pH下，這些基團(tuán)可以帶上正電荷或負(fù)電荷。在電場(chǎng)的作用下，這些帶點(diǎn)分子會(huì)向著與它所帶電荷相反的電極移動(dòng)，C錯(cuò)誤；D、PCR實(shí)驗(yàn)中使用的微量離心管、槍頭、蒸餾水在使用前都必須進(jìn)行高壓蒸汽滅菌處理，D正確。故選：C?！军c(diǎn)評(píng)】本題考查“DNA粗提取和鑒定”以及“DNA片段的擴(kuò)增及電泳鑒定”實(shí)驗(yàn)的相關(guān)知識(shí)，意在考查學(xué)生的識(shí)記能力和判斷能力，具備運(yùn)用所學(xué)知識(shí)綜合分析問題的能力是解答本題的關(guān)鍵。19．用氨芐青霉素抗性基因（AmpR）、四環(huán)素抗性基因（TetR）作為標(biāo)記基因構(gòu)建的質(zhì)粒如圖所示。用含有目的基因的DNA片段和用不同限制酶酶切后的質(zhì)粒，構(gòu)建重組質(zhì)粒，并轉(zhuǎn)化到受體菌中。下列敘述不正確的是（）A．若用HindⅢ酶切，通過篩選可得到兩種目的基因連入方向的重組質(zhì)粒 B．若用PvuⅠ酶切，在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上形成的菌落一定不含目的基因 C．若用SphⅠ酶切，使用雙抗生素平板篩選即可獲得正確的重組質(zhì)粒 D．若用ScaⅠ酶切，可通過瓊脂糖凝膠電泳技術(shù)鑒定重組質(zhì)粒構(gòu)建是否成功【考點(diǎn)】基因表達(dá)載體的構(gòu)建．【專題】模式圖；基因工程．【答案】C【分析】分析題圖，圖中質(zhì)粒內(nèi)，氨芐青霉素抗性基因（AmpR）內(nèi)含有ScaⅠ和PvuⅠ的酶切位點(diǎn)，四環(huán)素抗性基因（TetR）內(nèi)含有HindⅢ、SphⅠ和SalⅠ的酶切位點(diǎn)?！窘獯稹拷猓篈、若用HindⅢ酶切，由于形成的黏性末端相同，因此目的基因可正向連接到質(zhì)粒中，也可反向連接到質(zhì)粒中，即通過篩選可得到兩種目的基因連入方向的重組質(zhì)粒，A正確；B、氨芐青霉素抗性基因（AmpR）內(nèi)含有ScaⅠ和PvuⅠ的酶切位點(diǎn)，若用PvuⅠ酶切，目的基因的插入會(huì)破壞氨芐青霉素抗性基因，因此在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上形成的菌落一定不含目的基因，B正確；C、SphⅠ的酶切位點(diǎn)位于四環(huán)素抗性基因中，若用SphⅠ酶切，重組質(zhì)粒中含氨芐青霉素抗性基因（AmpR），而導(dǎo)入空質(zhì)粒的含有氨芐青霉素抗性基因和四環(huán)素抗性基因，因此攜帶目的基因的受體菌在含Amp（氨芐青霉素）的培養(yǎng)基中能形成菌落，在含Tet的培養(yǎng)基中不能形成菌落，故若用SphⅠ酶切，使用雙抗生素平板篩選即可獲得含有正確的重組質(zhì)粒的菌體，而非獲得正確的重組質(zhì)粒，C錯(cuò)誤；D、若用SalⅠ酶切，目的基因可能正向插入，也可能反向插入，可通過瓊脂糖凝膠電泳技術(shù)鑒定重組質(zhì)粒構(gòu)建成功與否，D正確。故選：C。【點(diǎn)評(píng)】本題考查基因工程的相關(guān)知識(shí)，意在考查學(xué)生的識(shí)記能力和判斷能力，具備運(yùn)用所學(xué)知識(shí)綜合分析問題的能力是解答本題的關(guān)鍵。20．免疫PCR是對(duì)微量抗原的一種檢測(cè)方法。如圖是利用該技術(shù)檢測(cè)牛乳中微量抗生素的流程圖：首先將抗體1固定在微板上，沖洗后加入待檢的牛乳，再加入DNA標(biāo)記的抗體2，進(jìn)行PCR擴(kuò)增，最后進(jìn)行電泳檢測(cè)。下列相關(guān)敘述正確的是（）A．圖示抗原檢測(cè)過程發(fā)生三次抗原與抗體的結(jié)合 B．圖示過程所需抗體可用動(dòng)物細(xì)胞工程技術(shù)制取 C．圖示過程中三次沖洗都是為了去除未結(jié)合的抗體 D．PCR擴(kuò)增獲得產(chǎn)物的量只與標(biāo)記DNA數(shù)量有關(guān)【考點(diǎn)】DNA片段的擴(kuò)增與電泳鑒定．【專題】模式圖；PCR技術(shù)．【答案】B【分析】免疫PCR是一種抗原檢測(cè)系統(tǒng)，將一段已知序列的DNA片段標(biāo)記到抗體2上，通過抗原抗體的特異性識(shí)別并結(jié)合，抗體2會(huì)和固定抗體1、抗生素形成復(fù)合物“固定抗體1—抗生素—抗體2”，再用PCR方法將這段DNA進(jìn)行擴(kuò)增，通過檢測(cè)PCR產(chǎn)物的量，即可推知固定抗體1上吸附的抗生素的量?！窘獯稹拷猓篈、據(jù)圖可知，圖示抗原檢測(cè)過程分別與抗體1和抗體2結(jié)合了一次，共發(fā)生兩次抗原與抗體的結(jié)合，A錯(cuò)誤；B、圖示過程所需抗體可通過動(dòng)物細(xì)胞工程技術(shù)（單克隆抗體技術(shù)）制取，B正確；C、圖示過程，第一次沖洗是為了去除未結(jié)合的抗體1，第二次沖洗是為了去除未結(jié)合的抗生素和牛奶成分，第三次沖洗是為了去除未結(jié)合的抗體2，C錯(cuò)誤；D、PCR擴(kuò)增獲得產(chǎn)物的量與標(biāo)記DNA數(shù)量、擴(kuò)增次數(shù)等有關(guān)，D錯(cuò)誤。故選：B?！军c(diǎn)評(píng)】本題主要考查的是DNA片段的擴(kuò)增與電泳鑒定的相關(guān)知識(shí)，意在考查學(xué)生對(duì)基礎(chǔ)知識(shí)的理解掌握，難度適中。二．解答題（共5小題）21．東方果蠅會(huì)對(duì)水果造成嚴(yán)重影響，田間雌蠅數(shù)量與經(jīng)濟(jì)損失直接相關(guān)。（1）研究發(fā)現(xiàn)，東方果蠅中dsx基因轉(zhuǎn)錄出的前體RNA在加工過程中具有獨(dú)特的性別選擇性剪接機(jī)制。利用這一特性研發(fā)雌性特異性致死基因系統(tǒng)。（2）蓖麻毒素A（RTA）可通過破壞核糖體導(dǎo)致細(xì)胞死亡。研究者獲得如圖1所示的融合基因1，進(jìn)而得到轉(zhuǎn)基因果蠅。①根據(jù)圖1，擴(kuò)增dsx內(nèi)含子應(yīng)選擇的引物是ad（選填字母）。②由于存在性別選擇性剪接機(jī)制，雌雄轉(zhuǎn)基因果蠅dsx基因前體RNA保留或剪切內(nèi)含子和剪切識(shí)別序列情況不同，產(chǎn)生了不同版本的成熟mRNA，導(dǎo)致雌蠅特異性致死。判斷轉(zhuǎn)基因雌蠅中的成熟mRNA為C（如圖3填字母序號(hào)）。轉(zhuǎn)基因的雄性個(gè)體不會(huì)致死的原因是在雄性個(gè)體中，融合基因1的成熟mRNA含有dsx內(nèi)含子的對(duì)應(yīng)序列，無法表達(dá)完整的RTA蛋白，不會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞死亡。（3）研究發(fā)現(xiàn)，RTA蛋白第212位甘氨酸替換為精氨酸會(huì)出現(xiàn)冷敏感效應(yīng)（cs），即當(dāng)溫度由29℃變?yōu)?8℃時(shí)，可抑制RTA蛋白對(duì)細(xì)胞的致死作用。利用此特性培育純合轉(zhuǎn)基因果蠅。①欲得到具有cs效應(yīng)的RTAcs蛋白，推測(cè)對(duì)應(yīng)的基因堿基序列，經(jīng)定點(diǎn)突變獲得融合基因2（如圖2所示）。請(qǐng)?jiān)诜娇蛑挟嫵隹衫^續(xù)延伸的復(fù)性結(jié)果，要求標(biāo)明每條鏈的5′端和3′端。②對(duì)轉(zhuǎn)入融合基因2的果蠅進(jìn)行以下操作：?。涸?9℃收集雄性果蠅（G0）。ⅱ：G0與野生型果蠅雜交，篩選出轉(zhuǎn)基因受精卵（G1）。ⅲ：將每對(duì)親本的受精卵（G1）均分為兩組，分別在18℃和29℃孵化培養(yǎng)，統(tǒng)計(jì)兩組中雄性個(gè)體所占比例，若18℃組雄性個(gè)體所占比例小于29℃組，則說明G1具有cs效應(yīng)。ⅳ：在18℃繼續(xù)培養(yǎng)具有cs效應(yīng)的G1果蠅，使之連續(xù)多代自交，得到轉(zhuǎn)基因純合子?！究键c(diǎn)】基因工程的操作過程綜合．【專題】圖文信息類簡(jiǎn)答題；基因工程．【答案】（1）轉(zhuǎn)錄（2）adC在雄性個(gè)體中，融合基因1的成熟mRNA含有dsx內(nèi)含子的對(duì)應(yīng)序列，無法表達(dá)完整的RTA蛋白，不會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞死亡（3）18℃組雄性個(gè)體所占比例小于29℃組18【分析】1、基因工程是指按照人們的愿望，進(jìn)行嚴(yán)格的設(shè)計(jì)，通過體外DNA重組和轉(zhuǎn)基因技術(shù)，賦予生物以新的遺傳特性，創(chuàng)造出更符合人們需要的新的生物類型和生物產(chǎn)品；基因工程是在DNA分子水平上進(jìn)行設(shè)計(jì)和施工的，又叫做DNA重組技術(shù)。2、基因工程技術(shù)的基本步驟：（1）目的基因的獲?。悍椒ㄓ袕幕蛭膸?kù)中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成；（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等，標(biāo)記基因可便于目的基因的鑒定和篩選。啟動(dòng)子是驅(qū)動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄的元件，而終止子是指示轉(zhuǎn)錄終止的位置；（3）將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣。將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法；（4）目的基因的檢測(cè)與鑒定：分子水平上的檢測(cè)：①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因——PCR技術(shù)；②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA——PCR技術(shù)；③檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)——抗原﹣抗體雜交技術(shù)。個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。【解答】解：（1）轉(zhuǎn)錄是以DNA的一條鏈為模板合成RNA的過程，東方果蠅中dsx基因（DNA）通過轉(zhuǎn)錄形成前體RNA。（2）①用于PCR擴(kuò)增的引物是根據(jù)一段已知目的基因的核苷酸序列來設(shè)計(jì)的，這一對(duì)引物位于基因上游和下游，根據(jù)圖1，擴(kuò)增dsx內(nèi)含子應(yīng)選擇的引物是ad。②RTA基因表達(dá)出的蓖麻毒素A（RTA）可通過破壞核糖體導(dǎo)致細(xì)胞死亡，由此可知，雌蠅特異性致死的原因是轉(zhuǎn)基因雌蠅個(gè)體中含有完整的RTA基因，能成功表達(dá)出蓖麻毒素A（RTA），由此判斷轉(zhuǎn)基因雌蠅中的成熟mRNA為C。而在雄性個(gè)體中，融合基因1的成熟mRNA含有dsx內(nèi)含子的對(duì)應(yīng)序列，無法表達(dá)完整的RTA蛋白，不會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞死亡，因此雄性個(gè)體不會(huì)致死。（3）①圖2虛線方框中的兩條鏈在延伸過程中，既可作為模板又可以起到相當(dāng)于引物的作用，使耐高溫的DNA聚合酶能夠從兩條鏈的3’端開始連接脫氧核苷酸，繼續(xù)延伸的復(fù)性結(jié)果如下：。②由題意可知：RTA蛋白第212位甘氨酸替換為精氨酸會(huì)出現(xiàn)冷敏感效應(yīng)（cs），即當(dāng)溫度由29℃變?yōu)?8℃時(shí)，可抑制RTA蛋白對(duì)細(xì)胞的致死作用。對(duì)轉(zhuǎn)入融合基因2的果蠅進(jìn)行以下操作：ⅰ：在29℃收集雄性果蠅（G0）（全為轉(zhuǎn)基因雄性果蠅）。ⅱ：G0與野生型果蠅雜交，篩選出轉(zhuǎn)基因受精卵（G1）。ⅲ：將每對(duì)親本的受精卵（G1）均分為兩組，分別在18℃和29℃孵化培養(yǎng)，統(tǒng)計(jì)兩組中雄性個(gè)體所占比例，若G1具有cs效應(yīng)，則18℃組雄性個(gè)體所占比例小于29℃組。ⅳ：在18℃時(shí)可抑制RTA蛋白對(duì)細(xì)胞的致死作用，為通過多代自交得到轉(zhuǎn)基因純合子，應(yīng)在18℃繼續(xù)培養(yǎng)具有cs效應(yīng)的G1果蠅。故答案為：（1）轉(zhuǎn)錄（2）adC在雄性個(gè)體中，融合基因1的成熟mRNA含有dsx內(nèi)含子的對(duì)應(yīng)序列，無法表達(dá)完整的RTA蛋白，不會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞死亡（3）18℃組雄性個(gè)體所占比例小于29℃組18【點(diǎn)評(píng)】本題主要考查的是基因工程的操作的相關(guān)知識(shí)，意在考查學(xué)生對(duì)基礎(chǔ)知識(shí)的理解掌握，難度適中。22．光敏色素基因在調(diào)節(jié)作物生長(zhǎng)發(fā)育中具有重要作用。為探討玉米中光敏色素基因A（含大約256個(gè)堿基對(duì)）在棉花種質(zhì)資源中的利用價(jià)值，研究人員將A基因轉(zhuǎn)入到棉花中，對(duì)棉花受體細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè)，并通過電泳技術(shù)分析結(jié)果。該過程所用質(zhì)粒上相關(guān)限制酶的酶切位點(diǎn)如圖甲所示，電泳檢測(cè)結(jié)果如圖乙所示。回答下列問題：（1）操作過程中需要用到的工具有限制性內(nèi)切核酸酶（限制酶）、DNA連接酶和載體，構(gòu)建表達(dá)載體時(shí)應(yīng)選用BclⅠ和HindⅢ這兩種限制酶處理質(zhì)粒。（2）為保證通過mRNA逆轉(zhuǎn)錄獲得的光敏色素基因A和質(zhì)粒的充分連接，一般需要在該基因上、下游引物的5'端分別添加酶切位點(diǎn)。一般在這兩部位添加不同的酶切位點(diǎn)，主要目的是使DNA片段能定向插入表達(dá)載體，減少自連。（3）A同學(xué)認(rèn)為僅由圖乙電泳結(jié)果不能確定1、3、4號(hào)轉(zhuǎn)基因棉花均培育成功，理由是由圖乙可知1、3、4號(hào)均成功導(dǎo)入光敏色素基因A，但轉(zhuǎn)基因棉花是否培育成功還需要進(jìn)行生物個(gè)體水平上的鑒定。（4）在生物學(xué)領(lǐng)域，對(duì)光敏色素進(jìn)行分子改造使用的技術(shù)是蛋白質(zhì)工程。獲得光敏色素分子的基本途徑為：預(yù)期的光敏色素的功能→設(shè)計(jì)預(yù)期的光敏色素的分子結(jié)構(gòu)→推測(cè)應(yīng)有的氨基酸序列→找到相對(duì)應(yīng)的脫氧核苷酸序列?！究键c(diǎn)】基因工程的操作過程綜合．【專題】圖文信息類簡(jiǎn)答題；基因工程．【答案】（1）限制性內(nèi)切核酸酶（限制酶）、DNA連接酶和載體；BclⅠ和HindⅢ（2）5'；使DNA片段能定向插入表達(dá)載體，減少自連（3）由圖乙可知1、3、4號(hào)均成功導(dǎo)入光敏色素基因A，但轉(zhuǎn)基因棉花是否培育成功還需要進(jìn)行生物個(gè)體水平上的鑒定（4）預(yù)期的光敏色素的功能；氨基酸序列【分析】基因工程技術(shù)的基本步驟：1、目的基因的獲取；2、基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟；3、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞；4、目的基因的檢測(cè)與鑒定?！窘獯稹拷猓海?）該操作需借助基因工程才能實(shí)現(xiàn)，因此操作過程中需要用到的工具有限制性內(nèi)切核酸酶、DNA連接酶和載體。由圖可知：構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，應(yīng)選用BclI和HindⅢ這兩種限制酶，若用BamHI，則目的基因會(huì)產(chǎn)生相同的末端而出現(xiàn)自身環(huán)化的現(xiàn)象且破壞標(biāo)記基因。（2）DNA合成方向總是從子鏈的5'端向3'端延伸，酶切位點(diǎn)應(yīng)設(shè)置在擴(kuò)增序列的外側(cè)，這樣酶切時(shí)不會(huì)破壞目的基因的序列，因此應(yīng)添加在引物的5'端，加入不同的限制酶酶切位點(diǎn)，在酶切后會(huì)形成不同的末端，從而保證DNA片段能定向插入表達(dá)載體，減少自連。（3）光敏色素基因A含大約256個(gè)堿基對(duì)，由圖乙可知1、3、4號(hào)均成功導(dǎo)入光敏色素基因A，但轉(zhuǎn)基因棉花是否培育成功還需要進(jìn)行生物個(gè)體水平上的鑒定。（4）在生物學(xué)領(lǐng)域，對(duì)光敏色素進(jìn)行分子改造使用的技術(shù)是蛋白質(zhì)工程。獲得光敏色素分子的基本途徑為：預(yù)期的光敏色素的功能→設(shè)計(jì)預(yù)期的光敏色素的分子結(jié)構(gòu)→推測(cè)應(yīng)有的氨基酸序列→找到相對(duì)應(yīng)的脫氧核苷酸序列。故答案為：（1）限制性內(nèi)切核酸酶（限制酶）、DNA連接酶和載體；BclⅠ和HindⅢ（2）5'；使DNA片段能定向插入表達(dá)載體，減少自連（3）由圖乙可知1、3、4號(hào)均成功導(dǎo)入光敏色素基因A，但轉(zhuǎn)基因棉花是否培育成功還需要進(jìn)行生物個(gè)體水平上的鑒定（4）預(yù)期的光敏色素的功能；氨基酸序列【點(diǎn)評(píng)】本題考查基因工程的相關(guān)知識(shí)，意在考查學(xué)生的識(shí)記能力和判斷能力，具備運(yùn)用所學(xué)知識(shí)綜合分析問題的能力是解答本題的關(guān)鍵。23．利用乳酸菌構(gòu)建表達(dá)抗原蛋白的工程菌是研究抗原應(yīng)用的重要手段之一?？诜娜樗峋稍谙纼?nèi)定植存活，其表達(dá)的抗原蛋白可錨定于細(xì)胞表面（穿過細(xì)胞膜展示在細(xì)胞表面），誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生免疫反應(yīng)。科學(xué)家將某病毒抗原蛋白的部分編碼序列（RBD）拼接成融合基因2RBD和3RBD，探究RBD的二聚體蛋白和三聚體蛋白能否模擬抗原蛋白中RBD的天然構(gòu)象并獲得高效免疫原性。重組質(zhì)粒構(gòu)建流程如圖1所示，NcoⅠ和SacⅠ是pNZ8149質(zhì)粒上的限制酶識(shí)別位點(diǎn)，U﹣M為信號(hào)肽﹣細(xì)胞壁錨定蛋白序列?；卮鹣铝袉栴}：（1）為滿足乳酸菌生長(zhǎng)的特殊需求，培養(yǎng)基除了提供碳源、氮源、水和無機(jī)鹽外，還需要添加維生素，并在無氧（填“有氧”或“無氧”）的環(huán)境條件下培養(yǎng)。（2）拼接形成的融合基因不具備限制酶切割位點(diǎn)，利用PCR技術(shù)對(duì)融合基因進(jìn)行擴(kuò)增時(shí)，所用兩種引物的5'端應(yīng)分別添加限制酶NcoⅠ和SacⅠ的識(shí)別序列，以實(shí)現(xiàn)融合基因定向插入質(zhì)粒。（3）為鑒定重組質(zhì)粒是否構(gòu)建成功，將重組質(zhì)粒雙酶切處理后電泳，結(jié)果如圖2，泳道1為雙酶切pNZ8149﹣2RBD，泳道2為雙酶切pNZ8149﹣3RBD。泳道1兩個(gè)條帶大小分別為2507bp和2020bp，由此可知，融合基因3RBD的長(zhǎng)度為2686bpbp，泳道2呈現(xiàn)一個(gè)條帶的原因是雙酶切pNZ8149﹣3RBD后產(chǎn)生的兩個(gè)片段大小相近。（4）實(shí)驗(yàn)成功構(gòu)建了表達(dá)融合蛋白的重組乳酸菌，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在蛋白表達(dá)量和穩(wěn)定性相同的情況下，pNZ8149﹣2RBD菌株表面二聚體蛋白的含量比pNZ8149﹣3RBD菌株表面三聚體蛋白多，該現(xiàn)象說明二聚體蛋白比三聚體蛋白更容易穿過細(xì)胞膜從而展示在細(xì)胞表面。【考點(diǎn)】基因工程的操作過程綜合．【專題】圖文信息類簡(jiǎn)答題；基因工程．【答案】（1）維生素?zé)o氧（2）限制酶NcoⅠ和SacⅠ的識(shí)別（3）2686bp雙酶切pNZ8149﹣3RBD后產(chǎn)生的兩個(gè)片段大小相近（4）二聚體蛋白比三聚體蛋白更容易穿過細(xì)胞膜從而展示在細(xì)胞表面【分析】基因工程技術(shù)的基本步驟：（1）目的基因的獲?。悍椒ㄓ袕幕蛭膸?kù)中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成；（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等；（3）將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣；（4）目的基因的檢測(cè)與鑒定?！窘獯稹拷猓海?）為滿足乳酸菌生長(zhǎng)的特殊需求，培養(yǎng)基除了提供碳源、氮源、水和無機(jī)鹽外，還需要添加維生素，乳酸菌屬于厭氧菌，需要在無氧的環(huán)境條件下培養(yǎng)。（2）根據(jù)質(zhì)粒上啟動(dòng)子、終止子與限制酶識(shí)別序列的位置關(guān)系可知，為保證融合基因定向插入，應(yīng)選擇兩種限制酶切割，所用兩種引物的5'端應(yīng)分別添加限制酶NcoⅠ和SacⅠ的識(shí)別序列。（3）由