3 3 3 3 4 4 5 20一、申請人名稱文塔納醫(yī)療系統(tǒng)公司VentanaMedicalSystems,Inc.二、申請人住所1910E.InnovationParkDriveTucson,Arizona,85755USA三、生產(chǎn)地址1910E.InnovationParkDriveTucson,Arizona,85755USA一、產(chǎn)品概述（一）產(chǎn)品主要組成成分本試劑的主要組成成分是使用含有載體蛋白（牛血清白蛋白和羊血清蛋白Brij-35和0.10%ProClin300（防腐劑）的0.05MTris-HCL稀釋的小鼠單克隆FOLR1抗體（抗體濃度約為5.6μg/mL）,克隆號為FOLR1-2.1，包裝規(guī)格為50測試/盒，每盒含有5mL試劑。（二）產(chǎn)品預(yù)期用途本產(chǎn)品用于定性檢測經(jīng)福爾馬林固定石蠟包埋的上皮性卵蛋白。該檢測試劑能夠輔助識別可接受ELAHERE（索米妥昔單抗）治療的上皮性卵巢癌、輸卵管癌或原發(fā)性腹膜癌患者。（三）產(chǎn)品包裝規(guī)格50測試/盒（四）產(chǎn)品檢驗原理FOLR1(FOLR1-2.1)抗體檢測試劑（免疫組織化學(xué)法）利用小鼠單克隆一抗與福爾馬林固定、石蠟包埋組織切片中的FOLR1蛋白結(jié)合。使用DAB染色液染色能夠可視化地觀察該二、臨床前研究概述（一）主要原材料1.主要原材料的選擇本產(chǎn)品的主要原材料包括FOLR1小鼠單克隆抗體和載體蛋白（牛血清白蛋白和羊血清蛋白Brij-35和0.10%ProClin300（防腐劑）的0.05MTris-HCL稀釋液。FOLR1小鼠單克隆抗體由外購獲得。申請人選擇有資質(zhì)的供應(yīng)商，并結(jié)合原材料特性，通過功能性試驗，確定了原材料的質(zhì)量要求，并檢驗合2.質(zhì)控設(shè)置情況對切片染色時還應(yīng)對陽性組織質(zhì)控進行染色，推薦使用正常輸卵管作為陽性質(zhì)控，它用于監(jiān)測試劑和儀器性能，不用于疫組織化學(xué)法）染色外，還應(yīng)當(dāng)使用陰性質(zhì)控試劑對第二張切（二）生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系研究申請人對工藝的研究包括工藝運行(pOQ)和工藝性能（pPQ）兩方面。通過工藝運行研究，確定合適的混合時間，并在此基礎(chǔ)上進行工藝性能研究，結(jié)果符合接受標(biāo)準。以前期研究結(jié)果為建立依據(jù)，申請人采用全因子實驗設(shè)計方法，對染色條件進行了優(yōu)化，最終在BenchmarkULTRA平臺上確定了最佳的反應(yīng)體系。（三）分析性能評估本產(chǎn)品的分析性能包括免疫反應(yīng)性、分析靈敏度和特異性、精密度研究。1.免疫反應(yīng)性研究：申請人對30種正常人體組織進行免疫反應(yīng)性研究，并對著色位置及特點進行記錄，每種組織類型均不少于3例。在檢測的組織類型中并沒有觀察到超出預(yù)期的結(jié)果，結(jié)果總結(jié)見下表。表1正常組織免疫反應(yīng)檢測結(jié)果胃肺喉申請人對53種相關(guān)良性、惡性病變組織（非正常組織）進行免疫反應(yīng)性研究，并對著色位置及染色特點進行記錄。在檢測的腫瘤類型中沒有觀察到超出預(yù)期的結(jié)果，結(jié)果總結(jié)見下表表2非正常組織免疫反應(yīng)檢測結(jié)果2.分析靈敏度申請人對953例上皮性卵巢癌（EOC）切除組織樣本進行檢測，以TC≥75%作為陽性判斷值，在28.75%（274/953）的病例中觀察到FOLR1陽性狀態(tài)，在71.25%（679/953）的病例中觀察到FOLR1陰性狀態(tài)，在224例樣本中觀察到FOLR1臨界狀態(tài)。臨界狀態(tài)定義為75%±10%腫瘤細胞（TC）染色。陽性臨界樣本占15.95%（152/953陰性臨界樣本占7.56%3.分析特異性申請人對具有不同F(xiàn)OLR1蛋白表達水平的4種細胞系全細胞裂解液進行了免疫印跡（WesternBlot）分析。結(jié)果表明這四個細胞系中觀察到的FOLR1蛋白質(zhì)的相對水平與通過IHC染色確定的FOLR1蛋白質(zhì)表達水平以及FOLR1的mRNA表達水平相關(guān)。未在任何全細胞裂解物中觀察到非預(yù)期染色或背景染色。申請人又進一步使用重組FOLR1、FOLR2和FOLR3蛋白與VENTANAFOLR1（FOLR1-2.1）抗體進行免疫印跡反應(yīng)，結(jié)果顯示，VENTANAFOLR1（FOLR1-2.1）抗體在蛋白質(zhì)印跡檢測中不與除FOLR1之外的其他FOLR家族成員發(fā)生交叉反應(yīng)。4.精密度申請人完成了實驗室內(nèi)精密度研究，包括批間，批內(nèi)/運行內(nèi)、日內(nèi)、日間研究；閱片一致性研究，包括不同閱片員之間、同一閱片者不同閱片時間研究；在實驗室間精密度研究中，包括不同實驗室之間、不同閱片員間以及不同染色日間精密度研究，該研究在3個不同的實驗室完成。實驗室內(nèi)精密度研究：實驗室內(nèi)精密度研究采用24例上皮性卵巢癌（EOC）組織病例，實驗設(shè)計考慮到以下因素：三批FOLR1抗體試劑，三臺BenchMarkULTRA染色儀，三批DAB染色液，三個非連續(xù)日，一名病理學(xué)家以及兩份重復(fù)樣本。試驗結(jié)果符合接受標(biāo)準，結(jié)%NPANPANPANPANPA閱片一致性研究使用了100份不同的EOC樣本（50份FOLR1陽性樣本和50份FOLR1陰性樣本這些樣本使用FOLR1(FOLR1-2.1)抗體檢測試劑（免疫組織化學(xué)法）進行了染色。在使用FOLR1(FOLR1-2.1)抗體檢測試劑（免疫組織化學(xué)法）評分算法評價EOC組織的FOLR1狀態(tài)之前，對樣本進行選擇和隨機化。三名閱片者（病理學(xué)家）參與了本研究。他們對所有樣本進行兩次評分，兩次閱片之間至少間隔兩周。每個病例有6個讀數(shù)（3個閱片者各讀2次）。閱片者內(nèi)、閱片者間精密度研究結(jié)果總結(jié)見下表。表4閱片者內(nèi)和閱片者間精密度%申請人在3家外部實驗室采用隨機盲法，使用了既往診療過程中留存的上皮性卵巢癌（EOC包括原發(fā)性腹膜癌和原發(fā)性輸卵管癌）病理組織標(biāo)本進行檢測以確定外部重復(fù)性，計算結(jié)果顯示，同一家實驗室3名不同病理醫(yī)師的閱片結(jié)果、同一實驗室相同病理醫(yī)師的3次閱片結(jié)果、不同實驗室間的檢測結(jié)（四）陽性判斷值或參考區(qū)間研究本產(chǎn)品的陽性判斷值的建立是通過藥物臨床試驗FORWARD1(IMGN853-0403)研究數(shù)據(jù)及其分析完成的。在FORWARD1研究中,確立了FOLR1膜染色的TC≥75%為cut-off值，并通過分析進一步建立了TC≥75%膜染色強度水平為中度和/或強這一陽性判斷值。基于這些分析結(jié)果，通過III期臨床研究SORAYA（全球多中心IMGN853-0417、中國人群拓展IMGN853-301）對該陽性判斷值進行了驗證。在該研究中，研究目的為確定索米妥昔單抗在FRα高表達的PROC患者中的有效性，入組標(biāo)準為患者的腫瘤必須為FRα表達陽性(≥75%的活腫瘤細胞必須表現(xiàn)出2以上研究均達到主要研究終點，在生物標(biāo)志物確定的FRα高表達PROC患者中，索米妥昔單抗的治療表現(xiàn)出具有臨床意義的有效性以及良好的安全性和耐受性，表明在該患者人群中獲益大于風(fēng)險。綜合以上所有研究，最終確定了該試劑的陽性判斷值為≥75%的存活腫瘤細胞（TC膜染色強度水平為中度和/或強。（五）穩(wěn)定性研究申請人對本產(chǎn)品的實時穩(wěn)定性、使用穩(wěn)定性和運輸穩(wěn)定性進行了系統(tǒng)的研究，確定了在各種條件下試劑的有效保存時間，同時也對樣本穩(wěn)定性進行了研究。實時穩(wěn)定性:使用三批2℃~8℃保存的試劑盒，分別在第0天、第20個月和第26個月進行染色取出檢測上皮性卵巢癌條件下保存，有效期24個月。使用穩(wěn)定性：每個試劑瓶通過壓力平衡過濾器與外部環(huán)境連接，試劑瓶的噴嘴僅在滴液瞬間打開，其它時間均保持封閉狀態(tài)。由于試劑瓶的物理特性，該產(chǎn)品的開瓶穩(wěn)定性與未開瓶產(chǎn)品的穩(wěn)定性相同，即2～8℃保存，有效期24個月。使用一個批次的試劑盒進行機載穩(wěn)定性研究，將該試劑置于37±2℃下192小時（8天）后，該試劑檢測結(jié)果仍符合接受標(biāo)準。因此，申報產(chǎn)品機載穩(wěn)定性為8天(基于37±2℃穩(wěn)定性數(shù)據(jù))。33℃±3℃,18℃±3℃、-20℃±5℃、37±2℃和-25℃±5℃條件下分別儲存192小時后，返回至2-8℃進行儲存，并使用上皮性卵巢癌（EOC）組織進行染色，結(jié)果符合接受標(biāo)準。樣本穩(wěn)定性：對經(jīng)10%中性福爾馬林固定、石蠟包埋的上皮性卵巢癌組織切片在5℃±3℃以及室溫條件下進行了切片穩(wěn)定性研究。研究結(jié)果顯示，經(jīng)10%中性福爾馬林固定、石蠟包埋的上皮性卵巢癌組織切片樣本在5℃±3℃以及室溫條件下均可保存45天，對檢測結(jié)果無影響，滿足檢測要求。三、臨床評價概述針對試驗體外診斷試劑檢測性能提交了FOLR1檢測結(jié)果重現(xiàn)性研究資料，體外診斷試劑伴隨診斷用途提供了同步開發(fā)IMGN853-0417及其中國人群拓展研究IMGN853-301研究資（一）FOLR1檢測結(jié)果重現(xiàn)性研究申請人在中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)院、復(fù)旦大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院、華中科技大學(xué)同濟醫(yī)學(xué)院附屬同濟醫(yī)院共3家臨床機構(gòu)完成了臨床試驗，包括環(huán)比試驗和閱片一致性研究。環(huán)比試驗入組樣本300例，均為上皮性卵巢癌、輸卵管癌、原發(fā)性腹膜癌患者。基于環(huán)比試驗符合方案集，各機構(gòu)與參考結(jié)果比較的平均陽性一致率為99.3%（95%CI：98.4%，100%平均陰性一致率為97.6%（95%CI：96.1%，98.9%各機構(gòu)兩兩比較的平均陽性一致率為96.8%（95%CI：95.6%，97.9%平均陰性一致率為96.9%（95%CI：95.7%，98.0%）。閱片一致性研究入組樣本300例，三家機構(gòu)分別入組100例，均為上皮性卵巢癌、輸卵管癌、原發(fā)性腹膜癌患者。結(jié)果顯示：與參考結(jié)果比較，機構(gòu)內(nèi)同一病理醫(yī)師閱片一致性研究的總一致率為99.6%（95%CI：99.1%，99.9%機構(gòu)內(nèi)不同病理醫(yī)師閱片一致性研究的總一致率為99.4%（95%CI：98.9%，99.9%不同機構(gòu)間閱片一致性研究的總一致率為98.6%（95%CI：97.7%，99.2%各機構(gòu)分別與參考結(jié)果比較的陽性一致率和陰性一致率均較好。兩兩比對研究顯示，機構(gòu)內(nèi)同一病理醫(yī)師閱片一致性研究的平均總一致率為99.1%（95%CI：98.4%，99.7%機構(gòu)內(nèi)不同病理醫(yī)師閱片一致性研究的平均總一致率98.9%（95%CI：98.1%，99.6%不同機構(gòu)間閱片一致性研究的平均總一致率97.1%（95%CI：96.0%，98.1%各機構(gòu)兩兩之間比較的陽性一致率和陰性一致率均較好。研究結(jié)果表明產(chǎn)品檢測結(jié)果重現(xiàn)性較好。（二）伴隨診斷意義能研究體外診斷試劑的伴隨診斷意義是通過同步開發(fā)的藥物臨床試驗進行確認，本產(chǎn)品作為藥物臨床試驗IMGN853-0417和IMGN853-301入組人群的篩選試劑參與研究。IMGN853-0417是一項全球多中心的單臂Ⅲ期研究，旨在評價索米妥昔單抗在FRα高表達的的貝伐珠單抗經(jīng)治的鉑類耐藥的上皮性卵巢癌、原發(fā)性腹膜癌或輸卵管癌患者中的有效性和安全性。FRα表達由VentanaFOLR1檢測測定。共計106名患者接受了索米妥昔單抗6mg/kg（基于調(diào)整的理想體重靜脈給藥，每3周給藥一次直到疾病進展或出現(xiàn)不可耐受的毒性。給藥后前36周內(nèi)每6周進行腫瘤評估，之后每12周評估一次。主要療效指標(biāo)是根據(jù)RECISTv1.1研究者評估的客觀緩解率（ORR）和緩解持續(xù)時間（DOR）。所有患者之前均接受過貝伐單抗治療，47%的患者之前接受過PARP抑制劑治療。通過VENTANAFOLR1(FOLR1-2.1)RxDxAssay確定腫瘤的FRα表達為陽性。有效性結(jié)果如下：客觀緩解率為31.7%(95%CI：22.9%,41.6%)，其中完全緩解率為4.8%，部分緩解率為26.9%；緩解患者人數(shù)為33，中位緩解持續(xù)時間為6.9(95%CI：5.6,9.7)。IMGN853-301研究是一項多中心、開放性、Ⅲ期單臂試驗（在中國境內(nèi)開展的IMGN853-0417試驗的單臂橋接研究評估索米妥昔單抗在中國鉑耐藥的FRα陽性的上皮性卵巢癌，輸卵管癌或原發(fā)性腹膜癌患者的療效和安全性。入組患者既往均接受過貝伐珠單抗治療且接受過1至3線的系統(tǒng)性治療。FRα表達狀態(tài)是通過使用VentanaFOLR1（FOLR1-2.1）檢測方法在中心實驗室測定，F(xiàn)Rα表達陽性患者方可入選。本研究主要療效指標(biāo)是獨立影像評估委員會（BIRC）根據(jù)RECISTv1.1確定所有患者既往接受過貝伐珠單抗治療，77.1%患者既往接受過PARP抑制劑治療。有效性結(jié)果如下：客觀緩解率為35.3%(95%CI：19.75%,53.51%)，其中完全緩解率為2.9%，部分緩解率為32.4%。以上藥物臨床試驗資料可以支持該產(chǎn)品的伴隨診斷臨床意綜上所述，該產(chǎn)品臨床試驗資料符合技術(shù)審評要求。四、產(chǎn)品受益風(fēng)險判定經(jīng)綜合評價，本產(chǎn)品的受益和風(fēng)險總結(jié)如下：通過性能驗證證明了本產(chǎn)品的分析性能，可支持其在臨床研究中的預(yù)期用途，保證其有效和安全使用。性能驗證包括免疫反應(yīng)性、分析靈敏度和特異性、精密度、穩(wěn)定性。FOLR1(FOLR1-2.1)抗體檢測試劑（免疫組織化學(xué)法）的預(yù)期受益是在臨床應(yīng)用中幫助識別適合接受FOLR1靶向治療的上皮性卵巢癌患者，包括原發(fā)性腹膜癌和原發(fā)性輸卵管癌。當(dāng)按照其規(guī)定的預(yù)期用途使用時，器械將實現(xiàn)其預(yù)期臨床受益。產(chǎn)品受益超過其剩余風(fēng)險。風(fēng)險管理計劃已得到適當(dāng)實施，并制定了獲取生產(chǎn)和生產(chǎn)后信息的方法。為保證用械安全，基于對主要剩余風(fēng)險的規(guī)避，在說明書1.本產(chǎn)品用于檢測經(jīng)福爾馬林固定石蠟包埋的卵巢上皮、輸卵管或原發(fā)性腹膜癌組織樣本中葉酸受體α（FOLR1）蛋白。該檢測試劑能夠輔助識別可接受ELAHERE（索米妥昔單抗）治療的卵巢上皮癌、輸卵管癌或原發(fā)性腹膜癌患者。FOLR1(FOLR1-2.1)抗體檢測試劑（免疫組織化學(xué)法）的檢測結(jié)果應(yīng)由具有資質(zhì)的病理學(xué)家結(jié)合組織學(xué)檢查、相關(guān)臨床信息和相應(yīng)的質(zhì)控結(jié)果進行判讀。該檢測試劑預(yù)期用于體外診斷（IVD）。2.警示及注意事項如下：（1）已在BenchMarkULTRA儀器上對FOLR1(FOLR1-2.1)抗體檢測試劑（免疫組織化學(xué)法）與DAB染色液結(jié)合使用進行了優(yōu)化，一抗孵育時間為32分鐘。不符合規(guī)定的孵育時間和溫度可能會產(chǎn)生錯誤結(jié)果。（2）任何與建議測試程序的偏差都可能使檢測結(jié)果無效。由與推薦測試程序存在偏差的用戶負責(zé)驗證修改情況。（3）免疫組化分析是一種多步驟診斷過程，在合適試劑的選擇、組織選擇，免疫組化玻片的固定、處理和制備以及染色結(jié)果解釋方面均需要專門培訓(xùn)。（4）組織染色取決于染色前組織的處理以及加工。不適合的固定、冷凍、解凍、洗滌、干燥、加熱、切片或者其他組織或體液污染均可能導(dǎo)致人為錯誤、抗體捕獲或檢測結(jié)果不正確。固定以及包埋方法差異或者組織內(nèi)部的固有不規(guī)則可能繼而導(dǎo)致結(jié)果不一致。（5）患者組織應(yīng)當(dāng)在從組織塊制備切片后45天內(nèi)染色。在室溫或5℃±3℃下儲存超過45天的切片可能會出現(xiàn)染色性能本申報項目屬于優(yōu)先審批項目。依據(jù)《醫(yī)療器械監(jiān)督管理法》（國家市場監(jiān)督管理總局令第48號）等相關(guān)醫(yī)療器械法規(guī)與配套規(guī)章，經(jīng)對申請人提交的注冊申報資料進行系統(tǒng)評價，申報產(chǎn)品符合安全性、有效性的要求，符合現(xiàn)有認知水平，建議準予注冊。附件：產(chǎn)品說明書通用名稱：FOLR1(FOLR1-2.1)本產(chǎn)品用于定性檢測經(jīng)福爾馬林固定石蠟包埋的上皮性卵巢癌、輸卵管癌或原發(fā)性腹膜米妥昔單抗）治療的上皮性卵巢癌、輸卵管FOLR1(FOLR1-2.1)抗體檢測試劑（隆抗體（克隆FOLR1-2.1）的定性免疫組織福爾馬林固定石蠟包埋的上皮性卵巢癌、輸卵管癌或原發(fā)性腹膜癌組織樣本中葉酸受體全自動免疫組化染色系統(tǒng)上染色。FOLR1表達的臨床臨界值為≥75%的存活腫瘤細胞（TC膜染色強度水平為中度和/或FOLR1(FOLR1-2.1)抗體檢測試劑（織化學(xué)法）的檢測結(jié)果應(yīng)由具有資質(zhì)的病理學(xué)家結(jié)合組織學(xué)檢查、相關(guān)臨床信息和相應(yīng)FOLR1(FOLR1-2.1)抗體檢測試劑（織化學(xué)法）采用針對重組蛋白產(chǎn)生的小鼠單克隆雜交瘤抗體，該抗體從細胞培養(yǎng)上清液抗體檢測試劑（免疫組織化學(xué)法）顯示細胞質(zhì)染色和膜染色。然而，僅評估膜染色用于FOLR1(FOLR1-2.1)抗體檢測試劑（織化學(xué)法）利用小鼠單克隆一抗與福爾馬林用光學(xué)顯微鏡對結(jié)果進行解釋。臨床病例必須使用適當(dāng)?shù)慕M織質(zhì)控品進行評估。除了使用FOLR1(FOLR1-試劑（免疫組織化學(xué)法）進行染色外，還應(yīng)當(dāng)使用鼠單克隆陰性質(zhì)控抗體(VENTANANegativeControl(Monocl片進行染色。該載玻片的特異性染色結(jié)果必FOLR1(FOLR1-2.1)抗體檢測試劑（免RxDxAssay分配器含有約28μg小鼠單克隆采用含有載體蛋白（牛血清白蛋白和羊血清本產(chǎn)品尚未觀察到已知的非特異性抗體反應(yīng)FOLR1(FOLR1-2.1)抗體檢測試劑（免織化學(xué)法）采用從細胞培養(yǎng)上清液獲得的小關(guān)于以下內(nèi)容的詳細說明，請參閱相應(yīng)的VENTANA染色液說明書：方法原理、材料和方法、分析用樣本采集和制備、質(zhì)量控制程序、故障排除、結(jié)果解釋和局限性。說明書中列出的所有產(chǎn)品可能并非在所有地Control(Monoclonal)，Venta4.干燥烘箱，其溫度能夠保持60°C±5°C精10.清洗液（EZPrepConcentrate（10X）,），12.緩沖液（ULTRALCSConditioningSolution20151060）15.返藍染色液（BluingReagent，Ventana機載穩(wěn)定性：8天儀器聯(lián)合使用時，本一抗適用于常規(guī)處理的福爾馬林固定、石蠟包埋（FFPE）組織。推薦使用10%福爾馬林中性緩沖液作為組織固在檢測的所有固定時間（1-72小時）內(nèi)，乙此不推薦用于本檢測。由于腫瘤細胞染色百分比的可變性，不推薦使用福爾馬林鋅或載玻片上。載玻片應(yīng)當(dāng)立即染色，因為組織切片的抗原性可能會隨時間消退。請向您的羅氏代表索取《推薦的載玻片存儲和處理》VENTANA一抗被開發(fā)用于在BenchMark該抗體已針對特定孵育時間進行了優(yōu)化，但可遵照儀器用戶指南中的規(guī)程顯示、打印和編輯自動化程序的參數(shù)。有關(guān)免疫組織化學(xué)染色程序更為詳細的信息，請參閱相應(yīng)的VENTANA染色液說明書。關(guān)于正確使用該器械的更多詳細信息，請參表1.BenchMarkULTRA儀器上FOLR1(FOLR1-2.1)抗體檢測試劑（免疫組織化學(xué)法）與DAB染色液（OptiViewDABIHC），或），），（免疫組織化學(xué)法）染色外，還應(yīng)當(dāng)使用適當(dāng)?shù)年幮再|(zhì)控試劑對第二張載玻片進行染最佳實驗室實踐是在與檢測組織相同的載玻片上包括陽性質(zhì)控切片。這有助于識別將試劑應(yīng)用于載玻片的任何故障。弱陽性染色的組織最適合用于質(zhì)量控制。質(zhì)控組織可同時含有陽性和陰性染色成分，同時作為陽性和陰性質(zhì)控品。質(zhì)控組織應(yīng)為新鮮尸檢、活檢或手術(shù)樣本，應(yīng)采用與檢測切片相同的方法已知陽性組織質(zhì)控品應(yīng)當(dāng)僅適用于監(jiān)測試劑和儀器的性能，而不適用于輔助確定檢測樣本的特定診斷結(jié)果。如果陽性組織質(zhì)控品未能顯示陽性染色，則該檢測樣本的結(jié)果應(yīng)視該抗體的陽性和陰性質(zhì)控組織示以正常輸卵上皮細胞的管腔表面。正常輸卵管組織中的疫組織化學(xué)法）需要使用中等強度的環(huán)狀染度的環(huán)狀*FOLR1膜染色，正常受Assay染色的卵巢癌組織EOC（上皮性卵巢癌）組織中FOLR1(FOLR1-2.1)抗體檢測試劑（免疫組織化學(xué)染色強度范圍不同；僅評估膜染色來確定弱、中度、強）的腫瘤細胞染色百分比。僅中度和強染色強度有助于使用評分方法確定FOLR1狀態(tài)。如果≥75%的存活腫瘤細胞（TC）呈中度和/或強膜染色，則認為EOC組織病例的FOLR1呈陽性。每種強度下的(FOLR1-2.1)抗體檢測試劑（免疫組織化學(xué)法）評分算法進行評估。關(guān)于其他說明和代≥75%的活腫瘤細胞具有中等<75%的活腫瘤細胞具有中等價存在偽影導(dǎo)致無法進行結(jié)果解名病理學(xué)家重新閱片。病理學(xué)家得出的%TC果應(yīng)通過多數(shù)原則或病理學(xué)家之間的共識獲FOLR1(FOLR1-2.1)抗體檢測試劑不符合規(guī)定的孵育時間和溫度可能會產(chǎn)生錯誤結(jié)果。2.任何與建議測試程序的偏差都可能使檢試程序存在偏差的用戶負責(zé)驗證修改情3.免疫組化分析是一種多步驟診斷過程，在合適試劑的選擇、組織選擇，免疫組化玻片的固定、處理和制備以及染色結(jié)4.組織染色取決于染色前組織的處理以及加工。不適合的固定、冷凍、解凍、洗滌、干燥、加熱、切片或者其他組織或體液污染均可能導(dǎo)致人為錯誤、抗體捕獲或檢測結(jié)果不正確。固定以及包埋方法差異或者組織內(nèi)部的固有不規(guī)則可能超過45天的切片可能會出現(xiàn)染色性能下載玻片應(yīng)干燥并在室溫下儲存。由于已知環(huán)境因素會影響切片的抗原穩(wěn)定性，因此當(dāng)儲并非每臺儀器上均注冊了所有檢測法。如需在獨特的EOC組織切片商業(yè)樣本隊列中，28.75%（274/953）的病例呈在獨特的EOC組織切片商業(yè)樣本隊列中，71.25%（679/953）的病例呈此外，使用FOLR1(FOLR1-2.1)抗體劑（免疫組織化學(xué)法）對一系列腫瘤組織的FOLR1(FOLR1-2.1)抗體檢測試劑（織化學(xué)法）的特異性。組織數(shù)量/組織數(shù)量/大腦0/4胃0/4小腦0/4小腸0/4腎上腺結(jié)腸0/4卵巢0/9肝臟0/4胰腺0/4唾液腺0/4甲狀旁腺0/34/4垂體0/3前列腺0/4睪丸0/4子宮內(nèi)膜0/40/4宮頸0/4乳腺0/4骨骼肌0/3脾臟0/3皮膚0/4扁桃體0/3外周（神經(jīng)）0/3胸腺0/30/3組織數(shù)量/組織數(shù)量/骨髓（骨）0/3視網(wǎng)膜0/3肺0/4喉心臟0/3膀胱0/3食道0/4直腸0/1(FOLR1-2.1)抗體檢測試劑（免疫組織化學(xué)病理組織陽性數(shù)量/總病例數(shù)腦膜瘤，成纖維細胞（大腦）0/1星形細胞瘤（大腦）0/1腦膜瘤，成纖維細胞（小腦）0/1惡性腦膜瘤（小腦）0/1腺瘤，皮質(zhì)（腎上腺）0/1腎上腺皮質(zhì)癌（腎上腺）0/1腺癌（胰腺）0/1精原細胞瘤（睪丸）0/2腺瘤（甲狀腺）0/2濾泡癌（甲狀腺）0/1濾泡性乳頭狀腺癌（甲狀腺）0/1纖維腺瘤（乳腺）0/2浸潤性導(dǎo)管癌（乳腺）0/3骨肉瘤（骨）0/1軟骨肉瘤（骨）0/1鱗狀細胞癌（肺）0/2腺癌（肺）0/1小細胞癌（肺）0/1來自胃腸道部位的轉(zhuǎn)移性癌癥0/1鱗狀細胞癌（食道）0/3腺癌（胃）0/3腺瘤（小腸）0/1腺癌（小腸）0/1腺瘤（結(jié)腸）0/1腺癌（結(jié)腸）0/3肝細胞癌（肝臟）0/4轉(zhuǎn)移性結(jié)腸腺癌（肝臟）0/1多形性腺瘤（唾液腺）0/1腺樣囊性癌（唾液腺）0/1腺癌（口腔）0/1鱗狀細胞癌（口腔）0/1鼻咽癌，NPC（鼻咽）0/1黑色素瘤（鼻腔）0/1透明細胞癌（腎臟）腺癌（前列腺）0/2腺癌（子宮內(nèi)膜）0/2鱗狀細胞癌（宮頸）0/2鱗狀細胞癌（皮膚）0/1病理組織陽性數(shù)量/總病例數(shù)移行細胞癌（膀胱）0/2腺癌（直腸）0/3反應(yīng)性（淋巴結(jié)）0/1霍奇金淋巴瘤（淋巴結(jié)）0/1非霍奇金B(yǎng)細胞淋巴瘤（淋巴結(jié)）0/1間變性大細胞淋巴瘤（淋巴結(jié)）0/2轉(zhuǎn)移性乳腺浸潤性導(dǎo)管癌（淋巴0/1轉(zhuǎn)移性食管鱗狀細胞癌（淋巴結(jié)）0/1顆粒細胞瘤（卵巢）0/1腺癌（卵巢）0/1子宮內(nèi)膜樣腺癌（卵巢）9/16轉(zhuǎn)移性結(jié)腸印戒細胞癌（卵巢）0/1漿液性腺癌（卵巢）39/42透明細胞癌（卵巢）5/8粘液性腺癌（卵巢）3/10(FOLR1-2.1)抗體檢測試劑（免疫組織化學(xué)色系統(tǒng)上的精密度：中間精密度研究、閱片者（病理學(xué)家）精密度研究以及實驗室間和(FOLR1-2.1)抗體檢測試劑（免疫組織化學(xué)所有載玻片均采用盲法和隨機化處理，然后FOLR1結(jié)果的123456745-50840-459標(biāo)準差樣ID大多數(shù)結(jié)結(jié)果數(shù)%TC%TC范值至最重復(fù)性抗體批次間染色液間儀器總計15-1002.890002.8922020-2000000032520-3002.895.00005.7743025-3502.890002.8953025-3002.890002.8963530-402.36004.565.2774545-5002.890002.8984540-4502.890002.8995050-55002.892.892.895.005555-60002.89002.896565-650000007060-7502.8904.0805.007570-7502.890002.8975-8002.890002.899085-9000002.892.899090-900000009085-90002.89002.899090-900000009085-9002.890002.89209090-90000000219090-95002.8902.894.08229085-900002.8902.89239595-95000000249897-9800.580000.58此外，還對不同精密度進行了定性分析。結(jié)果總結(jié)表8.FOLR1(FOLR1-2.1)抗體檢測試劑（免疫組重復(fù)性/精密度符合率類型樣本數(shù)/總數(shù)%95%CI抗體批次間PPA66/66100.0(94.5,100.0)NPA74/7894.9(90.5,100.0)OPA140/14497.2(94.4,100.0)儀器間（BenchMarkPPA66/66100.0(94.5,100.0)ULTRA全自動免疫組化染色系統(tǒng)）NPA76/7897.4(95.2,100.0)OPA142/14498.6(97.2,100.0)DAB染色液間PPA72/72100.0(94.9,100.0)NPA72/72100.0(94.9,100.0)OPA144/144100.0(97.4,100.0)PPA66/66100.0(94.5,100.0)NPA76/7897.4(95.2,100.0)OPA142/14498.6(97.2,100.0)運行內(nèi)PPA108/108100.0(96.6,100.0)NPA108/108100.0(96.6,100.0)OPA216/216100.0(98.3,100.0)組織閱片的閱片者內(nèi)和閱片者間精密度。本研究使用了100化學(xué)法）進行了染色。在使用FOLR1(FOLR1-2.1)抗體檢測試劑（免疫組織化學(xué)法）評分算法評價EOC組織的FOLR1狀態(tài)之前，對樣本進行選擇和隨機化。三名閱片者（病理學(xué)家）參與了本研究。他們對所有樣本進行兩次評分，兩次閱片之間至少間隔兩標(biāo)準差病例類別病例數(shù)數(shù)量中位數(shù)范圍%TC者內(nèi)閱片者總計陽性結(jié)果百分比320-203.563.885.270.0(0/192)53025-407.900.0(0/30)6042.5-16.7(4/60)臨界陰性53065-72.54.729.9126.7(8/30)臨界陽性2075-853.996.567.6890.8(109/120)2587.5-954.405.457.0099.3(149/150)399-1002.520.372.55100.0(18/18)此外，還對不同精密度進行了定性分析。下表總結(jié)了這些研究的表10.FOLR1(FOLR1-2.1精密度符合率類型樣本數(shù)/總數(shù)%95%CI閱片者內(nèi)APA276/28895.8(93.4,98.2)ANA300/31296.2(93.9,98.4)OPA288/30096.0(93.7,98.3)閱片者間APA266/28892.4(88.2,96.0)ANA290/31292.9(89.3,96.3)OPA278/30092.7(88.7,96.0)注：平均陽性符合率（APA）、平均陰性符合率（ANA）、總體百分比符合率（OPA）。以評價FOLR1(FOLR1-2.1)抗體檢系統(tǒng)上進行了檢測。對每個染色日每份樣本的每組5張染色玻片進行隨機化選擇，并由6名閱片者（每個研究中心2名閱片者）進行評價。每個病例在每個研究中心有10個結(jié)標(biāo)準差（SD）陽性結(jié)果百分比樣本ID大多數(shù)FOLR1結(jié)果%TC%TC范圍（最小值至最大者間研究總計研究中心A研究中研究中總體10.00-10.10.00.00.10.0%(0/10)0.0%(0/10)0.0%(0/10)0.0%(0/30)25.20.0%(0/10)0.0%(0/10)0.0%(0/10)0.0%(0/30)320.05-305.90.0%(0/10)0.0%(0/10)0.0%(0/10))0.0%(0/30)427.52-550.02.90.0%(0/10)0.0%(0/10)0.0%(0/10)0.0%(0/30)540.06-8023.02.840.046.20.0%(0/10)(1/10)0.0%(0/10)3%(1/30)640.010-605.10.0%(0/10)0.0%(0/10)0.0%(0/10)0.0%(0/30)742.515-705.939.343.20.0%(0/10)0.0%(0/10)0.0%(0/10)0.0%(0/30)850.010-7024.02.955.060.00.0%(0/10)0.0%(0/10)0.0%(0/10)0.0%(0/30)950.025-756.80.0(1/10)0.0%(0/10)0.0%(0/10)3%(1/30)50.010-800.040.643.6(1/10)0.0%(0/10)0.0%(0/10)3%(1/30)50.00-7035.641.90.0%(0/10)0.0%(0/10)0.0%(0/10)0.0%(0/30)60.030-805.30.020%(2/10)0.0%(0/10)30%(3/10)(5/30)60.040-700.00.00.00.00.0%(0/10)0.0%(0/10)0.0%(0/10)0.0%(0/30)60.040-807.0(1/10)0.0%(0/10)0.0%(0/10)3%(1/30)75.040-9024.82.946.853.150%(5/10)90%(9/10)40%(4/10)60%(18/30)77.555-950.029.433.160%(6/10)100%(10/10)(1/10)57%(17/30)80.070-956.93.490%(9/10)100%(10/10)90%(9/10)93%(28/30)80.00-904.123.470%(7/10)100%(10/10)63%(5/8)79%(22/28)80.070-956.52.090%(9/10)100%(10/10)100%(10/10)97%(29/30)2080.040-953.829.534.360%(6/10)90%(9/10)60%(6/10)70%(21/30)2181.572-1004.13.3100%(10/10)100%(10/10)90%(9/10)97%(29/30)2290.080-1004.0100%(10/10)100%(10/10)100%(10/10)100%(30/30)2392.575-1007.90.0100%(10/10)100%(10/10)100%(10/10)100%(30/30)2492.580-100100%(10/10)100%(10/10)100%(10/10)100%(30/30)2595.073-1000.00.07.97.9100%(10/10)100%(10/10)90%(9/10)97%(29/30)2695.080-96.4100%(10/10)100%(10/10)100%(10/10)100%(30/30)2798.080-1000.00.04.44.4100%(10/10)100%(10/10)100%(10/10)100%(30/30))2898.50-1003.423.70.023.9100%(10/10)100%(10/10)80%(8/10)93%(28/30)表12.不同%TC范圍內(nèi)FOLR1陽性和陰%TC范圍（中位數(shù)）病例數(shù)量陽性結(jié)果百分比陰性結(jié)果百分比<5070.5%99.5%(50-75)73.8%96.2%75160.0%40.0%(75-85)682.0%18.0%798.6%此外，還對不同精密度進行了定性分析。分析結(jié)果總結(jié)表13.FOLR1(FOLR1-2.1外部重現(xiàn)性符合率類型樣本數(shù)/總數(shù)%95%CI總體PPA371/41888.8(80.8,95.9)NPA411/42097.9(96.4,99.3)OPA782/83893.3(89.2,97.0)研究中心內(nèi)PPA366/39892.0(81.6,96.6)NPA426/44096.8(94.8,98.8)OPA792/83894.5(91.4,97.3)閱片者內(nèi)PPA368/38396.1(93.9,97.9)NPA443/45597.4(96.0,98.7)OPA811/83896.8(95.3,98.1)此外，對FOLR1狀態(tài)進行了研究中心間、閱片者間和日間成表14.FOLR1(FOLR1-2.1外部重現(xiàn)性符合率類型樣本數(shù)/總數(shù)%95%CI研究中心間APA6686/756688.4(80.5,94.6)ANA8274/915490.4(86.1,94.9)OPA7480/836089.5(83.8,94.7)閱片者間APA340/38089.5(81.2,95.7)ANA