糜蛋白酶活性檢測試劑盒實驗解決方案原理糜蛋白酶，又稱胰凝乳蛋白酶，是胰腺分泌的一種蛋白水解酶，能迅速分解變性蛋白質。糜蛋白酶的功能與胰蛋白酶相似，但是具有分解能力強、毒性低和不良反應小等優點。臨床上糜蛋白酶用于痰液稀化，對膿性和非膿性痰液均有效；也用于創傷手術后傷口愈合，如白內障摘除。糜蛋白酶催化ATEE水解，產物在237nm有特征光吸收；通過測定237nm光吸收增加速率，來計算糜蛋白酶活性。自備耗材·酶標儀或紫外分光光度計（能測237nm處的吸光度）·96孔UV板或微量石英比色皿、可調節式移液槍及槍頭·恒溫水浴鍋、恒溫箱、制冰機、離心機·去離子水·勻漿器或研缽（如果是組織樣本）試劑準備ReagentI：即用型；使用前，平衡到室溫；4℃保存。ReagentII：臨用前配制；48T加入12mL去離子水，96T加入24mL去離子水充分溶解；用不完的試劑4℃避光可以保存3天。樣本制備注意：推薦使用新鮮樣本，如果不立即進行實驗，樣本可在-80℃保存1個月。測定時，應控制解凍的溫度和時間。室溫環境下解凍時，需在4h內完成樣品解凍。動物組織：稱取約0.1g樣本，加入1mLReagentI，冰浴勻漿，8,000g，4℃離心10min，取上清，即粗酶液，置冰上待測。血清（漿）等液體樣本：直接檢測。注意：如需測定蛋白濃度，推薦使用Abbkine貨號：KTD3001的蛋白質定量試劑盒（BCA法）進行樣本蛋白質濃度測定。實驗步驟酶標儀或可見光分光光度計預熱30min以上，調節波長到237nm，紫外分光光度計用去離子水調零。ReagentII置于37℃孵育30min。操作表（下述操作微量石英比色皿或96孔UV板中進行）：試劑測定孔（μL）空白孔（μL）樣本上清200ReagentI020ReagentII200200充分混勻，于237nm測定4min內吸光值變化，分別記為A測定、A空白（從吸光值穩定增加開始計時），計算ΔA測定=A測定-A空白。注意：空白孔只需做1-2次。實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗，如果ΔA測定小于0.01可適當加大樣本量。如果ΔA測定大于1.0，樣本可用ReagentI進一步稀釋，計算結果乘以稀釋倍數，或減少提取用樣本量。結果計算注意：我們為您提供的計算公式，包括推導過程計算公式和簡潔計算公式。兩者完全相等。建議以加粗的簡潔計算公式為最終計算公式。糜蛋白酶活性的計算：（1）按蛋白濃度計算活性單位定義：25℃每mg蛋白每分鐘催化吸光值增加1為一個酶活單位。糜蛋白酶(U/mgprot)=ΔA測定×V反總÷(Cpr×V樣)÷T=2.75×ΔA測定÷Cpr（2）按樣本質量計算活性單位定義：25℃每g組織每分鐘催化吸光值增加1為一個酶活單位。糜蛋白酶(U/g鮮重)=ΔA測定×V反總÷(W×V樣÷V樣總)÷T=2.75×ΔA測定÷W（3）按樣本體積計算活性單位定義：25℃每mL血清每分鐘催化吸光值增加1為一個酶活單位。糜蛋白酶(U/mL)=ΔA測定×V反總÷V樣÷T=2.75×ΔA測定V反總：反應總體積，0.22mL；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；V樣：加入樣本體積，0.02mL；V樣總：加入ReagentI總體積，1mL；T：反應時間，4min；W：樣品質量，g。結果展示Figure1.本試劑盒測定小鼠肝臟和小鼠腎臟中糜蛋白酶的活性相關產品CatalogNo.Produc