ICS65.020.202301IDB2301/T200—2024前言 II 2規范性引用文件 3術語和定義 4田間樣本采集 4.1取樣地點 4.2取樣時期 4.3取樣方法 4.4樣本記錄 5室內檢測 5.1大豆疫霉分離及鑒定 5.2菌株的純化 5.3菌株的保存 6生理小種鑒定 6.1大豆植株的培養 6.3病情調查 6.4生理小種確定 7種群動態監測 7.1監測內容 7.2監測時間 7.3數據分析與匯總 7.4監測結果 9檔案管理 IIDB2301/T200—2024本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結構和起草規則》的規定起草。請注意本文件的某些內容可能涉及專利。本文件發布機構不承擔識別專利的責任。本文件由哈爾濱市農業農村局提出并歸口。本文件起草單位：哈爾濱市農業科學院。本文件主要起草人：陳秋明、田甜、于松濤、王杰、李慧、張金鳳、李亮、鄭凱、丁爽、劉志洋、張卓群、曹廣祿、張琰。1DB2301/T200—2024大豆疫霉種群動態監測技術規程本文件規定了大豆疫霉種群動態監測的田間樣本采集、室內檢測、生理小種鑒定、種群動態監測、滅活和檔案管理。本文件適用于大豆疫霉生理小種的種群動態監測。2規范性引用文件下列文件中的內容通過文中的規范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。NY/T2114—2012大豆疫霉病菌檢疫檢測與鑒定方法DB2301/T151大豆疫霉根腐病菌生理小種鑒定技術規程3術語和定義本文件沒有需要界定的術語和定義。4田間樣本采集4.1取樣地點在大豆主栽區生產田和品種試驗田的長期定位點調查和采集大豆疫霉根腐病病樣（病株和病土）。4.2取樣時期取樣時期為每年的6月～8月。4.3取樣方法4.3.1病株取樣采集定位點具有典型病癥的大豆疫霉根腐病病株，每個地塊取樣5株～10株，用滅菌牛皮紙袋帶回實驗室。4.3.2病土取樣每個定位點隨機取樣10份，每份取根際土為200g，混勻后帶回實驗室，自然陰干。4.4樣本記錄2DB2301/T200—2024每個樣本需記錄樣本數量、樣本來源、品種名稱、取樣部位、采集日期和采集人信息。5室內檢測5.1大豆疫霉分離及鑒定大豆疫霉分離及鑒定應按NY/T2114中的7.1和7.3的規定執行。5.2菌株的純化篩選出的目標菌落轉移至V8培養基上純化4次～6次，轉移至V8培養基試管斜面上注明菌株編號、培養日期。5.3菌株的保存待菌絲長滿斜面后至于8℃恒溫箱中保存用于后續生理小種檢測，菌株需每隔6個月～8個月繼代活化一次。6生理小種鑒定6.1大豆植株的培養將8個鑒別寄主和感病品種分別挑選15粒飽滿種子播種于以無菌蛭石的培養缽中，出苗前溫度控制6.2接種大豆苗長至真葉期，將25℃黑暗培養8d含有大豆疫霉菌菌絲的培養基，用滅菌解剖刀切成3mm×3mm的方塊菌碟，應用下胚軸傷口接種法進行接種。6.3病情調查6.3.1調查時間接種后5d～7d對大豆苗下胚軸進行病情調查。6.3.2致病性測定大豆植株病斑反應型分為3種，≥70%植株死亡記為感病(S)、≤30%植株死亡記為抗病(R)、30%~70%植株死亡記為中間類型(IRT)，試驗重復3次。6.3.3有效性判別當設置的感病對照材料鑒定為感病，該批次鑒定視為有效。6.4生理小種確定調查各菌株與8個鑒別寄主互作反應結果，列出感病互作中Rps基因，即為該菌株致病型。生理小7種群動態監測3DB2301/T200—20247.1監測內容主要監測種群的數量與分布，包括生理小種類別、生理小種數量、地理位置、分離頻率等。7.2監測時間監測工作每年進行1次。7.3數據分析與匯總7.3.1統計種群分布根據長期定位點每年監測內容，記錄大豆疫霉種群在不同時空的范圍與數量分布情況。7.3.2種群動態分析比較各年度大豆疫霉種群動態監測結果，包括大豆疫霉種群生理小種多樣性、毒性結構演變、群體致病力，分析大豆疫霉種群在時空上的動態變化。7.4監測結果每年編制大豆疫霉種群監測報告，構建監測數據庫，明確區域內大豆疫霉生理小種及毒性結構在時空上的變化更迭。8滅活8.1將分離后的田間采集樣本、接種鑒定的接種體、基質等集中到容器中用高壓蒸汽滅菌鍋121