第二章儀器檢測技術(shù)色譜法一、概述1、色譜法：利用不同物質(zhì)在不同的兩相中所表現(xiàn)的物理化學(xué)性質(zhì)上的差異來進(jìn)行分離、分析的方法。（1）相：指一個(gè)均勻的體系（2）固定相：固定在一定支持物上的相。在色譜分析中固定不動，對化學(xué)成分產(chǎn)生保留的相。（3）流動相：色譜過程中與固定相處于平衡狀態(tài)，攜帶待測組分向前移動的物質(zhì)。又稱洗脫劑或展開劑2、色譜法分類（1）根據(jù)分離方法分類1）紙色譜PC2）薄層色譜TLC3）柱色譜CC4）氣相色譜法GC5）高效液相色譜法HPLC（2）根據(jù)兩相所處的狀態(tài)分類1）液—固色譜2）液—液色譜3）氣—液色譜（3）根據(jù)色譜過程的機(jī)制分類1）吸附色譜2）分配色譜3）離子交換色譜4）凝膠色譜二、薄層色譜法1、薄層色譜法：系指將供試品溶液點(diǎn)于薄層板上，經(jīng)展開、檢視所得的色譜圖，與適宜的對照物質(zhì)按同法所得的色譜圖作對比，用于藥物的鑒別、雜質(zhì)檢查和含量測定。2、常用的吸附劑：硅膠、氧化鋁、聚酰胺目數(shù)：150-200目3、展開劑的選擇應(yīng)具有良好的化學(xué)穩(wěn)定性，不與展開系統(tǒng)內(nèi)所有的物質(zhì)發(fā)生化學(xué)反應(yīng)。Rf值：0.2-0.8各Rf值之差＞0.054、操作（1）薄層板制備鋪板：1份固定相+3份水（或0.5%CMC-Na）在研缽中向一個(gè)方向研磨混勻、鋪板，在空氣中自然干燥，110℃活化30分鐘，置于干燥器中備用。（2）點(diǎn)樣在距離薄板的一端2cm處用鉛筆輕輕地劃一條直線，作為起始線，在線上做點(diǎn)樣位置的記號，用毛細(xì)管0.5mm或微量注射器點(diǎn)樣，點(diǎn)樣斑點(diǎn)＜3mm，各點(diǎn)間距離1-2cm（以不影響斑點(diǎn)檢出），反復(fù)點(diǎn)樣時(shí)應(yīng)吹干后再點(diǎn)第二次。（3）展開展開劑浸入薄層板下端的高度不宜超過0.5-1.0cm（注意：點(diǎn)樣點(diǎn)不得浸入展開劑中），展距一般約15cm。（4）顯色、檢視5、應(yīng)用（1）定性西咪替丁片的薄層色譜法鑒別。鑒別方法：取本品的細(xì)粉適量（約相當(dāng)于西咪替丁0.1g），加甲醇10ml，振搖使西咪替丁溶解，濾過，作為供試品溶液；另取西咪替丁對照品，加甲醇制成每1ml中含西咪替丁10mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法（通則0502）試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇（5∶1）為展開劑，展開后，晾干，置飽和的碘蒸氣中顯色，供試品溶液所顯主斑點(diǎn)的顏色和位置應(yīng)與對照品溶液的主斑點(diǎn)相同。CompanyLogo（2）雜質(zhì)檢查枸櫞酸乙胺嗪中N-甲基哌嗪的檢查方法。方法：取本品，加甲醇制成每1ml中含50mg的溶液，作為供試品溶液；另取N-甲基哌嗪對照品，加甲醇制成每1ml中含50μg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各10μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，用三氯甲烷-甲醇-氨溶液（13:5:1）為展開劑，展開后，晾干，置碘蒸氣中顯色。供試品溶液如顯與對照品溶液相應(yīng)的雜質(zhì)斑點(diǎn)，其顏色與對照品溶液的主斑點(diǎn)比較，不得更深。（3）定量1）目視定量法2）洗脫定量法3）薄層掃描法三、高效液相色譜法1、常用術(shù)語（1）理論塔板數(shù)（n）柱效指標(biāo)（2）保留時(shí)間（t）定性依據(jù)（3）峰面積（A）定量依據(jù)（4）分離度

R應(yīng)≥1.52、液相色譜儀的基本組成（1）輸液系統(tǒng)（2）進(jìn)樣系統(tǒng)（3）分離系統(tǒng)常用固定相：C18柱（十八烷基硅烷鍵合硅膠）（4）檢測系統(tǒng)（5）記錄系統(tǒng)貯液器和吸濾器：貯液器:1-2L的玻璃瓶溶劑吸濾器:Ni合金，孔約0.45

m，防止顆粒物進(jìn)行泵內(nèi)。

用來連續(xù)監(jiān)測經(jīng)色譜柱分離后的流出物的組成和含量變化的裝置。常用檢測器：紫外檢測器（最常用的通用型檢測器）、蒸發(fā)光散射檢測器（適于無紫外吸收、無電活性和不發(fā)熒光的樣品的檢測）、熒光檢測器等色譜工作站在線顯示自動采集處理儲存自動控制

HPLC儀器3、應(yīng)用（1）定性1）與純物質(zhì)比較例：在含量測定項(xiàng)下記錄的色譜圖中，供試品溶液主峰的保留時(shí)間應(yīng)與對照溶液主峰的保留時(shí)間一致。2）加入純物質(zhì)增加峰高（2）雜質(zhì)檢查例：…..各雜質(zhì)峰面積的和不得大于對照對照溶液的主峰面積。（3）定量四、氣相色譜法1、