…………○…………內…………○…………裝…………○…………內…………○…………裝…………○…………訂…………○…………線…………○…………※※請※※不※※要※※在※※裝※※訂※※線※※內※※答※※題※※…………○…………外…………○…………裝…………○…………訂…………○…………線…………○…………第=page22頁，總=sectionpages22頁第=page11頁，總=sectionpages11頁2025年粵人版選擇性必修3生物下冊月考試卷含答案考試試卷考試范圍：全部知識點；考試時間：120分鐘學校：______姓名：______班級：______考號：______總分欄題號一二三四五六總分得分評卷人得分一、選擇題(共5題，共10分)1、下列有關DNA連接酶的說法，正確的是（）A.DNA連接酶和限制酶的作用恰好相反，DNA連接酶可以將限制酶切開的雙鏈DNA片段“縫合”起來B.DNA連接酶和DNA聚合酶一樣能連接單鏈DNA片段C.EcoliDNA連接酶可以連接有平末端的DNA片段，也能連接有黏性末端的DNA片段D.T4DNA連接酶只能連接有平末端的DNA片段2、有關生物技術的安全性的敘述，不合理的是（）A.轉基因農作物對于解決糧食、能源等問題起到了積極作用，同時也存在一定風險B.轉基因耐儲藏番茄延長了番茄的貨架期，對環境不存在任何安全性問題C.有關農業轉基因生物安全法規的制定既維護了消費者的權益，又最大程度地保證了轉基因技術的安全性D.生物技術雖然推動了社會的發展，但應科學控制、合理使用3、在做“分離分解尿素的細菌”實驗時，A同學從對應培養基中篩選出大約150個菌落，而其他同學只選擇出大約50個菌落。下列有關敘述不正確的是（）A.A同學出現這種結果的原因是土樣不同B.可以將A同學配制的培養基在不加土樣的情況下進行培養作為空白對照，以證明培養基是否受到污染C.讓其他同學用與A同學一樣的土壤進行實驗，如果結果與A同學一樣，則可證明A同學無誤D.B選項的實驗思路遵循了實驗的對照原則，C選項也有對照實驗4、CD47是一種跨膜糖蛋白；它可與巨噬細胞表面的信號調節蛋白結合，從而抑制巨噬細胞的吞噬作用。肺癌；結腸癌等多種腫瘤細胞表面的CD47含量比正常細胞高1．6~5倍，導致吞噬細胞對腫瘤細胞的清除效果減弱。科學家推測，抗CD47的單克隆抗體可以解除CD47對巨噬細胞的抑制作用，為此他們按照如下流程進行了實驗。下列說法錯誤的是（）

A.多次進行步驟①的目的是獲得更多分泌抗CD47抗體的漿細胞B.步驟②后可篩選出既能產生抗CD47抗體又能大量增殖的細胞C.實驗組中巨噬細胞和腫瘤細胞的共培養體系需放入CO2培養箱D.對照組中吞噬細胞的吞噬指數顯著高于實驗組可驗證上述推測5、在實驗室培養微生物需要人工為微生物提供各種營養和適宜的環境條件。下列關于培養基配制的說法正確的是（）A.培養基中必須要添加瓊脂B.培養基中需要碳源、氮源、水和無機鹽齊全C.培養基需要進行滅菌處理D.配制培養細菌的培養基，需要將pH調至酸性評卷人得分二、多選題(共7題，共14分)6、在紀錄片《舌尖上的中國》中多次講到了利用不同微生物發酵來制作美味食品。桑葚果實富含多種營養成分及黃酮類化合物（一般難溶或不溶于水，易溶于乙醇等有機溶劑），目前以桑葚為原料開發的桑葚酒深受大眾歡迎。醬豆是人們利用大豆制作的一道地方美食，具體做法如下：大豆煮熟→霉菌發酵→加入蔬菜→加鹽、加調味酒和香辛料→乳酸發酵。下列相關內容的敘述，錯誤的是（）A.桑葚酒制作時榨出的果汁需經過高壓蒸汽滅菌后，才能裝進發酵瓶密閉發酵B.若要提取桑葚中的黃酮苷，可以采用萃取的方法C.醬豆最后在環境溫暖、氧氣充足的條件下發酵形成D.醬豆中有機物的種類和含量均減少7、生物興趣小組的三位同學吃冰激凌后有兩人嚴重腹瀉，他們懷疑冰激凌中大腸桿菌超標。衛生部門規定1000mL自來水37℃培養48h后大桿菌菌落數不能超過3個，于是他們設計實驗對此冰激凌進行檢測。下列實驗操作，不合理的是（）A.再去小店買一個同樣品牌的同種冰激凌，然后配制伊紅美藍培養基（該培養基可用來鑒別大腸桿菌），滅菌、倒平板B.取10mL剛融化的冰激凌作為原液進行梯度稀釋、稀釋倍數為1×10～1×105C.取各個稀釋濃度的冰激凌液各0.lmL，用涂布平板法進行接種，每個濃度涂3個平板，共培養18個平板，在適宜溫度下培養48hD.統計菌落數目，以菌落數代表大腸桿菌數會導致統計結果比實際值偏小8、下圖表示動物細胞培養的基本流程。有關敘述正確的是（）

A.在C瓶中進行的細胞培養稱為原代培養B.培養瓶D可以通過松蓋處理滿足細胞培養的氣體環境需要C.培養瓶D無需放置在CO2培養箱中，但需要保持恒溫D.D瓶細胞出現接觸抑制時，用胰蛋白酶處理，再用離心法收集細胞分瓶培養9、某實驗小組利用下圖所示質粒和目的基因來構建基因表達載體，將目的基因導入大腸桿菌細胞并表達。下列敘述正確的是（）

A.圖中的質粒用酶A切割后，會產生4個游離的磷酸基團B.在構建重組質粒時，可用酶A和酶C切割質粒和目的基因C.成功導入目的基因的大腸桿菌可在含四環素的培養基中生長D.若用酶B和酶C切割，可以避免質粒的自身環化10、大腸桿菌能在基本培養基上生長；X射線照射后產生的代謝缺陷型大腸桿菌不能在基本培養基上生長，但可以在完全培養基上生長。利用夾層培養法可篩選代謝缺陷型大腸桿菌，具體的操作是：在培養皿底部倒一層基本培養基，冷凝后倒一層含經X射線處理過的菌液的基本培養基，冷凝后再倒一層基本培養基。培養一段時間后，對首次出現的菌落做好標記。然后再向皿內倒一層完全培養基，再培養一段時間后，會長出形態較小的新菌落。下列說法正確的是（）A.X射線誘發染色體變異進而導致大腸桿菌代謝缺陷B.首次出現的菌落做標記時應標記在皿蓋上C.夾層培養法可避免細菌移動或菌落被完全培養基沖散D.形態較小的新菌落可能是代謝缺陷型大腸桿菌11、玉米秸稈轉化為綠色能源酒精是解決能源危機的措施之一，具體的工藝流程如圖所示。下列敘述正確的是（）

A.用酸或堿預處理有利于酶與底物充分接觸，提高催化效率B.步驟③中，酵母菌在發酵初期更多分布在發酵液的上層C.隨培養次數的增加，分離出的菌落類型越少表示純度越高，其遺傳基因型越穩定D.發酵過程中酒精濃度升高會抑制酵母菌代謝活動，同時使發酵液pH降低，發酵停止12、發酵工程與農業、食品工業、醫藥工業及其他工業生產有著密切的聯系。下列對發酵工程及其應用的敘述，正確的是（）A.啤酒的工業化生產過程中，酒精的產生積累主要在后發酵階段完成B.食品添加劑雖能改善食品的口味、色澤和品質，但會降低食品的營養C.將乙肝病毒的抗原基因轉入酵母菌，再結合發酵工程可生產乙肝疫苗D.利用放線菌產生的井岡霉素防止水稻枯紋病是生物防治的有效手段評卷人得分三、填空題(共9題，共18分)13、一般包括______、______等技術14、體細胞核移植技術存在的問題：

克隆動物存在著健康問題、表現出______缺陷等。15、平板劃線法是通過____________在_______________培養基表面______________的操作，將__________的菌種______________分散到培養基的表面。在數次劃線后培養，可以分離到由____________繁殖而來的肉眼可見的_______________，這就是_______________________。稀釋涂布平板法則是將菌液進行一系列的______________，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到_____________培養基的表面，進行培養。在稀釋度足夠高的菌液里，聚集在一起的微生物將被分散成____________，從而能在培養基表面形成___________________。16、1.基因檢測引發的倫理問題。

（1）基因身份證：基因身份證指把個人的_____和_____檢測出來；記錄在磁卡上，而做成的個人基因身份證。

（2）基因檢測引發的爭論①_____②_____③_____④_____⑤_____⑥_____

。項目。

反對。

支持。

技術方面。

目前人類對①及基因間的相互作用尚缺乏足夠的認識；通過基因檢測達到②的目的是很困難的；基因檢測結果會給受檢者帶來巨大的③。

通過基因檢測可以對遺傳性疾病及早采取④；適時進行治療，達到挽救患者生命的目的。

道德方面。

基因資訊的泄露造成⑤；如個人婚姻困難；人際關系疏遠，更明顯的是造成一支遺傳性失業大軍。

對于基因歧視現象；可以通過正確的科學知識傳播；⑥教育和立法得以解決。

2.試管嬰兒與設計試管嬰兒的比較①_____②_____③_____④_____

。項目。

設計試管嬰兒。

試管嬰兒。

技術手段。

胚胎移植前①（填“需要”或“不需要”）進行遺傳學診斷這一環節。

②（填“需要”或‘不需要”）進行遺傳學診斷。

實踐應用。

用于白血病；貧血病等遺傳性疾病的預測。

解決不孕不育問題。

聯系。

二者都是③受精；體外進行早期胚胎發育，再進行胚胎移植，從生殖方式上都為④

17、統計的菌落數往往比活菌的實際數目_____________。這是因為______________________。因此，統計結果一般用而不是用活菌數來表示。除了上述的活菌計數法外，______________也是測定微生物數量的常用方法。18、最常用的載體是______，它是一種裸露的、結構簡單的、獨立于細菌染色體之外，并具有______能力的_____。19、醋酸菌的最適生長溫度為____________________℃。20、常用的轉化方法：

將目的基因導入植物細胞：采用最多的方法是_______，其次還有______和______等。

將目的基因導入動物細胞：最常用的方法是_______。此方法的受體細胞多是_______。

將目的基因導入微生物細胞：原核生物作為受體細胞的原因是_______，最常用的原核細胞是_____，其轉化方法是：先用______處理細胞，使其成為______，再將______溶于緩沖液中與感受態細胞混合，在一定的溫度下促進感受態細胞吸收DNA分子，完成轉化過程。21、_______mol/L濃度下，DNA溶解度最大。評卷人得分四、判斷題(共3題，共18分)22、胚胎發育早期，細胞的數量不斷增加，胚胎的總體積也增加。()A.正確B.錯誤23、我國政府一再重申四不原則：不贊成、不允許、不支持、不接受任何生殖性克隆人實驗。（選擇性必修3P108）()A.正確B.錯誤24、生殖性克隆是指通過克隆技術產生獨立生存的新個體。（選擇性必修3P106）()A.正確B.錯誤評卷人得分五、實驗題(共4題，共12分)25、下圖是泡菜的制作及測定亞硝酸鹽含量的實驗流程示意圖；請據圖回答：

（1）泡菜是乳酸菌發酵的產物，乳酸菌的代謝類型是___________________。制作泡菜宜選用新鮮的蔬菜，原因是____________________________。

（2）將鹽與清水按照一定的比例配制鹽水，待鹽水煮沸冷卻后，注入裝好原料的泡菜壇中，同時加入一定量的“老汁”(陳泡菜水)。將鹽水煮沸冷卻的目的是____________________；加入“老汁”的作用是____________________________。

（3）測定亞硝酸鹽含量的方法是_________________。即在鹽酸酸化條件下，亞硝酸鹽與____________________________發生重氮化反應后，與N－1－萘基乙二胺鹽酸鹽結合后形成_______________色的染料，然后將顯色反應后的樣品與已知濃度的____________進行目測比較，大致估算出亞硝酸鹽的含量。26、【生物技術實踐】

科學家發現家蠅體內存在一種抗菌活性蛋白；這種蛋白質具有極強的抗菌能力，受到研究者重視。

（1）分離該抗菌蛋白可用電泳法，其原理是根據蛋白質分子的______________、大小及形狀不同，在電場中的________不同而實現分離。

（2）可用金黃色葡萄球菌來檢驗該蛋白的抗菌特性。抗菌實驗中所用培養基中的牛肉膏和蛋白胨主要為細菌生長提供_________和_______________。

（3）分別在加入和未加入該抗菌蛋白的培養基中接種等量菌液。培養一定時間后，比較兩種培養基中菌落的_____________；確定該蛋白質的抗菌效果。

（4）細菌培養常用的接種方法有_______和___________。實驗結束后，對使用過的培養基應進行_____________處理。27、干燥綜合征（SS）是臨床常見的一種自身免疫病；患者血清中存在多種抗體，其中以SSB抗體特異性最強。下圖表示科研人員利用基因工程技術獲得SSB蛋白及利用SSB蛋白對小鼠進行免疫的過程。回答下列問題：

(1)利用RNA通過①過程獲得cDNA需要________酶。已知真核生物mRNA在3'端加有PolyA（多聚腺嘌呤核糖核苷酸）保護尾部不被降解。為了針對性獲得cDNA，應如何設計逆轉錄第一步時的DNA引物______，設計引物的目的是______。

(2)為確保與pET41a質粒定向連接，對逆轉錄得到的cDNA擴增時，應在相應引物的_______（填“5'”或“3'”）端加上______酶切位點。

(3)③過程用重組質粒轉染大腸桿菌時，需要用Ca2+處理大腸桿菌，目的是______，然后將處理后的大腸桿菌先接種在添加_______的培養基（A）上培養，待長出菌落后再利用無菌膜同位置轉移到添加______的培養基（B）上培養，收集_______菌落進一步純化后將菌體破碎處理；篩選得到SSB蛋白。

(4)將改造后的大腸桿菌生產的SSB蛋白注入到小鼠體內是為了檢測該蛋白是否具有抗原性，則后續實驗內容應為抽取小鼠血液_______。28、研究者改造與腸道共生的大腸桿菌；口服該工程菌后激活機體特異性免疫，實現腫瘤的預防和治療。

(1)部分腸道細菌能夠分泌外膜囊泡（OMV）；如圖1．OMV能穿越腸道上皮屏障活化腸黏膜內豐富的免疫細胞。細菌溶素A（ClyA）是外膜囊泡上含量較高的特異蛋白。

研究者利用含圖2所示元件的表達載體轉化大腸桿菌制備工程菌，ClyA基因的作用是_____；Fc表達產物能夠與樹突狀細胞表面的特異性受體結合，提高樹突狀細胞_____OMV的能力。

(2)為研究上述工程菌在人為可控條件下引發特異性免疫反應的效果，研究者用健康小鼠進行如下實驗：。組別第0、3、8天口服工程菌每次服用工程菌12小時后，飲用含阿拉伯糖的水結果檢測第1組空載體+第12天，每組隨機取5只小鼠等量的脾臟細胞與黑色素瘤細胞共培養，檢測殺傷率，結果如圖3．第2組ClyA-Fc+第3組ClyA-OVA+第4組第5組

注：“+”；“-”代表是否飲用；

口服工程菌12小時后其在腸道內存在數量較多。

①第4、5組的操作是_____。圖3結果說明工程菌在人為可控條件下引發特異性免疫反應，理由是_____。

②為進一步驗證上述結論，研究者進行如下實驗：先加入_____（填選項前字母）保溫后漂洗，再加入_____（填選項前字母）保溫后漂洗，檢測熒光細胞的數目，若第5組_____為最大值；則上述結論成立。

A．帶有紅色熒光標記的OVA抗原肽復合物。

B．帶有綠色熒光標記的細胞毒性T細胞特異性抗體。

C．第1-5組小鼠脾臟細胞。

③腫瘤患者術后極易復發，研究者重復上表實驗，并在第3次口服工程菌后第50天給小鼠注射黑色素瘤細胞。目的是_____。

(3)該工程菌的研發為不同腫瘤的精準治療和預防提供了可能。依據本研究，設計針對肺癌治療的工程菌表達載體元件：_____。評卷人得分六、綜合題(共4題，共32分)29、自然界中某些細菌可通過代謝將原油轉化為穩定無害的終產物；科學家為獲得能有效修復原油污染土壤的工程菌展開相關研究。

（1）獲得能降解原油的目標菌可從_______取樣，樣品經____________（無菌水/蒸餾水）稀釋后涂布于以原油為唯一碳源的固體培養基上培養；分離純化后獲得目標菌A。

（2）目標菌A成膜性差，不能有效控制原油向深層土壤滲透。研究人員將假單胞菌的bdlA基因（約1300bp）導入目標菌A體內；嘗試構建成膜性好的工程菌。

①假單胞菌遭受環境壓力時，會分泌大量胞外復合物將自身包裹于其中形成細菌聚集膜樣物（生物被膜），體現了生物對環境的___________。

②圖1為bdlA基因與pX系列質粒連接構建的重組質粒模式圖，為初步檢測構建是否成功，可選用限制酶____________對其切割，并對酶切產物及重組質粒進行凝膠電泳檢測，結果如圖2。據圖可初步判斷重組質粒構建成功，依據是____________。

（3）上述方法獲得的兩種工程菌命名為KT2和KT5，在不同時間測定實驗組中工程菌及對照組中___________的生物被膜總量相對值，結果如圖3所示。該結果表明__________。

（4）若要將以上工程菌用于原油污染土壤的修復，舉一例說明下一步還應進行哪些方面的研究__________?30、自新冠疫情發生以來；人類消耗了大量的一次性口罩，這些口罩不及時處理會對環境造成一定的污染。某科研人員欲篩選出能高效降解一次性口罩(主要成分是由C；H兩種元素組成的聚丙烯纖維)的細菌，設計了如下圖所示的流程。回答下列問題：

(1)土壤是微生物的天然培養基，該培養基能為微生物的生長提供的四大營養物質分別是碳源、_____________。

(2)通過相關實驗來選擇較合適的土壤樣品，該實驗的自變量是_____________，因變量是_____________。

(3)圖中“甲”指的是_____________，將分離純化得到的不同菌種分別接種到鑒別培養基上，鑒別培養基以_____________為唯一碳源；并加入了能與之結合的顯色染色劑，從而方便挑選菌群。

(4)分離純化聚丙烯纖維降解菌時，為了使培養皿上出現的菌落盡可能都是單菌落，應采用的方法是_____________。采用該方法的原因是_____________。31、如圖是利用發酵技術獲得產品的過程圖；①；②都表示這一過程中的步驟或者操作，根據該圖以及學過的相關知識回答問題：

(1)寫出數字標號處的操作：①________________；②________。其中②的目的是防止發酵過程中混入________；進而影響生產的效率，甚至導致發酵失敗。

(2)配制培養基時，一般要保證培養基中具有幾類基本成分，分別是碳源、氮源、__________、________。

(3)在發酵過程中，我們要不間斷地監測發酵罐中的情況，了解發酵進程，必要時要添加營養物質，同時要嚴格控制發酵條件，如溫度、________、________等，因為環境條件的改變，不僅影響菌種的生長繁殖，而且可能會影響____________的形成。

(4)為了進一步保持發酵液的無菌環境，我們在培養基中加入了青霉素，則該培養基不能用來培養________（填“細菌”或“真菌”）類微生物，而且要注意在最后處理發酵液的時候，不能將發酵液直接排到自然水體，其原因是：①發酵液中富含________，可能會導致水體富營養化而出現水華等；②發酵液中加入的青霉素可能會導致自然界的細菌出現________種群，對人類的健康不利。32、新型冠狀病毒可通過表面的刺突蛋白（S蛋白）與人呼吸道黏膜上皮細胞的ACE2受體結合；侵入人體，引起肺炎。圖1為病毒侵入后，人體內發生的部分免疫反應示意圖。單克隆抗體可阻斷病毒的黏附或入侵，故抗體藥物的研發已成為治療新冠肺炎的研究熱點之一。圖2為篩選；制備抗S蛋白單克隆抗體的示意圖。請據圖回答下列問題。

(1)圖1中人體內抗原呈遞細胞吞噬病毒，并將病毒的抗原暴露在細胞表面，被____細胞表面的受體識別后激活該細胞。

(2)B細胞識別入侵的病毒后，在細胞因子作用下，經過細胞的___，形成__細胞。

(3)為判斷疑似患者是否為新型冠狀病毒感染者，采集鼻咽拭子主要用于病原學檢查，檢測病毒的__；采集血液樣本主要用于血清學檢查，檢測__。

(4)據圖2所示，研制抗S蛋白單克隆抗體，需先注射___免疫小鼠以激活小鼠的免疫細胞；再提取激活的B細胞與骨髓瘤細胞融合，用HAT培養基篩選獲得。

___細胞。因為同一種抗原可能激活__細胞，還需繼續篩選才能獲得分泌單克隆抗體的細胞株。參考答案一、選擇題(共5題，共10分)1、A【分析】【分析】

DNA連接酶：（1）根據酶的來源不同分為兩類：EcoliDNA連接酶、T4DNA連接酶。這二者都能連接黏性末端，此外T4DNA連接酶還可以連接平末端；但連接平末端時的效率比較低。（2）DNA連接酶連接的是兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵。（3）DNA連接酶和DNA聚合酶的區別：①DNA連接酶是在兩個DNA片段之間形成磷酸二酯鍵，而DNA聚合酶只能將單個脫氧核苷酸加到已有的核苷酸片段上，形成磷酸二酯鍵；②DNA連接酶是同時連接雙鏈的切口，而DNA聚合酶只是在單鏈上將一個個脫氧核苷酸連接起來；③DNA連接酶不需要模板，而DNA聚合酶需要模板。

【詳解】

A；DNA連接酶和限制酶的作用恰好相反；限制酶可將DNA雙鏈片段切斷，而DNA連接酶可以將限制酶切開的雙鏈DNA片段“縫合”起來，A正確；

B；DNA連接酶不能連接單鏈DNA片段；DNA聚合酶是將單個脫氧核苷酸加到已有的核苷酸片段上，B錯誤；

C；EcoliDNA連接酶只能連接有黏性末端的DNA片段；C錯誤；

D、T4DNA連接酶既可以連接有黏性末端的DNA片段；也可以連接有平末端的DNA片段，D錯誤。

故選A。2、B【分析】【分析】

轉基因生物的安全性問題包括：（1）食物安全：滯后效應；出現過敏源、食物的營養成分改變等；（2）生物安全：基因擴散導致對生物多樣性的威脅；（3）環境安全：對生態系統穩定性及環境的影響。

【詳解】

A；轉基因農作物對于解決糧食、能源等問題起到了積極作用；同時也存在一定風險，如在食品安全方面可能會出現營養成分改變等現象，A正確；

B；轉基因耐儲藏番茄延長了番茄的貨架期；但其對環境也可能存在安全性問題，如造成基因污染，B錯誤；

C；有關農業轉基因生物安全法規的制定既維護了消費者的權益；又最大程度地保證了轉基因技術的安全性，消費者對轉基因產品有知情權和選擇權，C正確；

D；生物技術雖然推動了社會的發展；但應科學控制、合理使用，故我國出臺了一系列相關法規和政策，D正確。

故選B。3、A【分析】【分析】

1；生物實驗應遵循對照原則、等量原則、單一變量原則和控制無關變量原則。

2；A同學的實驗結果可能是培養基污染造成的；還可能是A同學實驗操作過程中污染造成的，也可能是與其他同學所取土壤樣品不同造成的，關鍵是設法排除影響結果的因素。

【詳解】

A；A同學出現這種結果的原因可能是土樣不同；也可能是操作中污染造成的，A錯誤；

B；A同學的實驗結果可能是培養基污染造成的；可以將A同學配制的培養基在不加土樣的情況下進行培養作為空白對照，以證明培養基是否受到污染，B正確；

C；讓其他同學用與A同學一樣的土壤進行實驗；如果結果與A同學一樣，則可證明A同學無誤，C正確；

D；B、C選項的實驗思路都遵循了實驗的對照原則；D正確。

故選A。

【點睛】4、D【分析】【分析】

單克隆抗體制備流程：先給小鼠注射特定抗原使之發生免疫反應；之后從小鼠脾臟中獲取已經免疫的B淋巴細胞；誘導B細胞和骨髓瘤細胞融合，利用選擇培養基篩選出雜交瘤細胞；進行克隆化培養和抗體檢測，篩選出能產生特定抗體的雜交瘤細胞；最后從培養液或小鼠腹水中獲取單克隆抗體。

【詳解】

A；多次向免疫動物注射抗原（CD47）的目的是使刺激小鼠特異性免疫；使動物小鼠產生大量的效應B淋巴細胞即漿細胞，A正確；

B；經步驟②將脾臟中的B細胞和骨髓瘤細胞融合；經選擇后可以獲得既能產生抗CD47抗體又能大量增殖的細胞，B正確；

C；動物細胞培養應放在二氧化碳培養箱；C正確；

D；根據單一變量原則可知應設置不加單克隆抗體的巨噬細胞+腫瘤細胞的共培養體系為對照；抗CD47的單克隆抗體可以解除CD47對巨噬細胞的抑制作用，沒有抗體抑制，CD47對巨噬細胞有抑制作用，對照組中吞噬細胞的吞噬指數顯著低于實驗組可驗證上述推測，D錯誤。

故選D。5、C【分析】【分析】

培養基一般含有水；碳源、氮源、無機鹽。培養基還需要滿足微生物生長對pH、特殊營養物質以及氧氣的要求。如培養乳酸桿菌時需添加維生素；培養霉菌時需將pH調至酸性，培養細菌時需將pH調至中性或微堿性。液體狀態的培養基稱為液體培養基，配制成的固體狀態的稱為固體培養基，在液體培養基中加入凝固劑瓊脂后，就制成固體培養基。獲得純凈的培養物關鍵是防止外來雜菌的入侵。

【詳解】

A；固體培養基需加入瓊脂；液體培養基不用加入，A錯誤；

B、培養基一般含有水、碳源、氮源、無機鹽。培養某些微生物時，可以缺少部分物質，如培養自養微生物，可以不加碳源，其利用空氣中CO2；培養固氮微生物；可以不加氮源，其利用空氣中氮氣，B錯誤；

C；獲得純凈的培養物關鍵是防止外來雜菌的入侵。培養基需要進行高壓蒸汽滅菌；C正確；

D；配制培養細菌的培養基；需要將pH調至中性或微堿性，D錯誤。

故選C。二、多選題(共7題，共14分)6、A:C:D【分析】【分析】

根據題意可知；醬豆制作時，首先要利用霉菌進行發酵，霉菌等微生物產生的酶可以將大分子物質分解成小分子物質，最后進行乳酸發酵時所需的乳酸菌是厭氧生物，需要在無氧條件下進行。

【詳解】

A；桑葚酒制作時榨出的桑葚汁不能進行高壓蒸汽滅菌；否則會殺死桑葚表皮上的酵母菌菌種，A錯誤；

B；因桑葚中的黃酮苷一般難溶或不溶于水；易溶于乙醇等有機溶劑，所以提取桑葚中的黃酮苷可采用萃取的方法，B正確；

C；醬豆制作最后是進行乳酸發酵；乳酸發酵中的乳酸菌為厭氧型生物，故乳酸發酵應在無氧條件下進行，C錯誤；

D；在微生物的作用下；大豆所含的蛋白質、脂肪等大分子物質被分解成易于吸收的小分子物質，同時微生物的呼吸要消耗大豆中的營養物質，并形成多種中間產物，所以醬豆中有機物的種類增加，含量減少，營養價值增加，D錯誤。

故選ACD。

【點睛】7、A:B:C【分析】【分析】

1；微生物常見的接種的方法：平板劃線法和稀釋涂布平板法；稀釋涂布平板法可用于微生物的計數。

2；稀釋涂布平板法統計菌落數目的原理：①當樣品的稀釋度足夠高時；培養基表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌；②通過統計平板上的菌落數來推測樣品中大約含有的活菌數。

【詳解】

A；若只對一個冰激凌進行檢測；樣品太少則不能確定是某個冰激凌的質量問題還是這個品牌冰激凌的質量問題，正確的做法是再去小店隨機買多個同樣品牌的同種冰激凌，A錯誤；

B、測定細菌的數量，一般選用104、105、106倍的稀釋液進行培養，應取10mL剛融化的冰激凌作為原液進行梯度稀釋、稀釋倍數為1×10～1×106；B錯誤；

C；實驗應該設置對照；取各個稀釋濃度的冰激凌液各0.lmL，用涂布平板法進行接種，每個濃度涂3個平板，再取一個平板接種等量無菌水（作為對照），共培養19個平板，在適宜溫度下培養48h，當對照組無菌落生長時，選擇菌落數在30-300的平板進行計數，C錯誤；

D；因為當兩個或多個細胞連在一起時；平板上觀察到的只是一個菌落，故統計菌落數目，以菌落數代表大腸桿菌數會導致統計結果比實際值偏小，該說法合理，D正確。

故選ABC。8、A:B:D【分析】【分析】

動物細胞培養的過程：取動物組織塊→剪碎組織→用胰蛋白酶處理分散成單個細胞→制成細胞懸液→轉入培養液中（原代培養）→放入二氧化碳培養箱培養→貼滿瓶壁的細胞用酶分散為單個細胞；制成細胞懸液→轉入培養液（傳代培養）→放入二氧化碳培養箱培養。

【詳解】

A；將動物組織分散為單個細胞制成細胞懸液中進行的第一次培養為原代培養；因此在C瓶中進行的細胞培養稱為原代培養，A正確；

BC、進行動物細胞培養時，通常采用培養皿或松蓋培養瓶，將其置于含95%空氣和5%CO2的混合氣體的培養箱中進行培養，以滿足細胞培養的氣體環境需要，其中氧氣是細胞呼吸必需的，CO2是為了維持培養液的pH；B正確；C錯誤；

D；D瓶細胞出現接觸抑制時；應用胰蛋白酶處理使其分散為單個細胞，再用離心法收集細胞分瓶以進行傳代培養，D正確。

故選ABD。9、A:D【分析】【分析】

分析題圖：圖中質粒和外源DNA都含有限制酶A；B、C的識別序列和切割位點；若用酶A切割會同時破壞質粒上的兩個抗性基因。

【詳解】

A；質粒中含有2個酶A的酶切位點；所以切割后會產生4個游離的磷酸基團，A正確；

B；如果用酶A和酶C同時切割質粒；會破壞質粒的標記基因，B錯誤；

C；根據B項分析；需要用酶B和酶C切割質粒和目的基因，導致四環素抗性基因被破壞，所以不能在含四環素的培養基中生長，C錯誤；

D；若用酶B和酶C切割；產生不同的黏性末端，可避免質粒自身環化，D正確。

故選AD。10、C:D【分析】【分析】

微生物常見的接種的方法：①平板劃線法：將已經熔化的培養基倒入培養皿制成平板；接種，劃線，在恒溫箱里培養。在線的開始部分，微生物往往連在一起生長，隨著線的延伸，菌數逐漸減少，最后可能形成單個菌落。②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經過大量稀釋后，均勻涂布在培養基表面，經培養后可形成單個菌落。

【詳解】

A；大腸桿菌是原核生物；沒有染色體，A錯誤；

B；首次出現的菌落做標記時應標記在皿底上；B錯誤；

C；夾層培養法不需要對大腸桿菌進行再次接種；可避免細菌移動或菌落被完全培養基沖散，C正確；

D；由于代謝缺陷型大腸桿菌不能在基本培養基上生長；所以形態較小的新菌落可能是代謝缺陷型大腸桿菌，D正確。

故選CD。11、A:B:C【分析】【分析】

用玉米秸稈生產燃料酒精是利用微生物進行生物發酵的過程；所利用的微生物為酵母菌，通過酒精發酵將葡萄糖轉化為酒精，玉米秸稈中含有的糖類主要是纖維素，因此需要先將纖維素水解成葡萄糖，再進行發酵。

【詳解】

A；由于纖維素組成成分復雜、結構穩定；生物降解時難以迅速進行，常用酸或堿進行預處理，初步打斷纖維素內部的化學鍵，降低聚合度，利于酶與底物充分接觸，提高催化效率，A正確；

B；在有氧的條件下酵母菌進行出芽生殖；上層培養液與空氣接觸部位氧氣較多，短時間內酵母菌更多分布在發酵液的上層，B正確；

C；在選擇培養基中經多次培養；分離出的菌落類型越少表示純度越高，其遺傳基因型越穩定，C正確；

D、發酵液pH下降是因為產生了CO2；D錯誤。

故選ABC。12、C:D【分析】【分析】

發酵工程的基本環節：選育菌種：性狀優良的菌種可以從自然界中篩選出來；也可以通過誘變育種或基因工程育種獲得。發酵罐內發酵：這是發酵工程的中心環節。在發酵過程中，要隨時檢測培養液中的微生物數量；產物濃度等，以了解發酵進程。還要及時添加必需的營養組分，要嚴格控制溫度、pH和溶解氧等發酵條件。分離、提純產物：如果是發酵產品是微生物細胞本身，可在發酵結束之后，采用過濾、沉淀等方法將菌體分離和干燥，即可得到產品。如果產品是代謝物，可根據產物的性質采取恰當的提取、分離和純化措施來獲得產品。

【詳解】

A；啤酒發酵過程分為主發酵和后發酵兩個階段。酵母菌的繁殖、大部分糖的分解和代謝物的生成都是在主發酵階段完成；因此啤酒的工業化生產過程中，酒精的產生積累主要在主發酵階段完成，A錯誤；

B；食品添加劑能改善食品的口味、色澤和品質；可以增加食品的營養，B錯誤；

C；通過基因工程技術；將乙肝病毒的抗原基因轉入酵母菌，再結合發酵工程可生產乙肝疫苗，C正確；

D；利用放線菌產生的井岡霉素防止水稻枯紋病；不會對環境造成污染，是生物防治的有效手段，D正確。

故選CD。三、填空題(共9題，共18分)13、略

【解析】①.動物細胞培養和核移植技術、②.動物細胞融合與單克隆抗體14、略

【解析】遺傳和生理15、略

【解析】①.接種環②.瓊脂固體③.連續劃線④.聚集⑤.逐步稀釋⑥.一個細胞⑦.子細胞群體⑧.菌落⑨.梯度稀釋⑩.瓊脂固體?.單個細胞?.單個的菌落16、略

【分析】【分析】

1.基因檢測可以把人體內的致病基因和易感基因檢測出來；通過采取一定的預防措施預防遺傳病的發生，但同時可能會帶來基因歧視等倫理道德方面的問題。

2.設計試管嬰兒不同于試管嬰兒；試管嬰兒是為了解決不孕不育的問題，而設計試管嬰兒是為了解決器官移植方面的醫療問題。

【詳解】

1.（1）基因身份證是指把每個人的致病基因和易感基因都檢測出來；并記錄在磁卡上，這樣到醫院看病時，只要帶上這種身份證，醫生就可以“對證”治療。

（2）反對基因檢測的人認為：目前人類對基因結構及基因間相互作用尚缺乏足夠的認識；要想通過基因檢測達到預防疾病的目的是困難的；況且人類的多基因病，既與基因有關，又與環境和生活習慣有關，有某種致病基因的人不見得就會患病。但是，基因檢測結果本身就已經足以給受檢者帶來巨大的心理壓力。個人基因資訊的泄露所造成的基因歧視，勢必造成奇特的失業大軍，即遺傳性失業大軍。個人基因資訊被暴露之后，還會造成個人婚姻困難；人際關系疏遠等嚴重后果。支持基因檢測的人認為：通過基因檢測可以對遺傳性疾病及早采取預防措施，適時進行治療，達到挽救患者生命的目的。對于基因歧視現象，可以通過正確的科學知識傳播、倫理道德教育和立法得以解決。

2.設計試管嬰兒需要因而具有特定的性別或遺傳性狀；因此胚胎移植前需要進行遺傳學診斷這一環節，而試管嬰兒是為了解決不孕不育問題，不需要考慮嬰兒的性別等問題，不需要進行遺傳學診斷。二者的共同點是：兩者都是體外受精，并進行體外早期胚胎培養，都要經過胚胎移植，都是有性生殖。

【點睛】

1.基因與疾病的關系：具有致病基因的個體不一定患遺傳病；因為生物的性狀還受到環境因素的影響；沒有致病基因也可能患病，因為基因表達的蛋白質，在加工或修飾過程中出現錯誤，也會出現癥狀。

2.明確設計試管嬰兒和試管嬰兒目的的不同是解答本題的關鍵之一。【解析】致病基因易感基因基因結構預防疾病心理壓力預防措施基因歧視倫理道德需要不需要體外有性生殖17、略

【分析】【分析】

【詳解】

略【解析】低當兩個或多個細胞連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落菌落數18、略

【分析】【分析】

【詳解】

略【解析】質粒自我復制雙鏈環狀DNA分子19、略

【分析】【分析】

【詳解】

略【解析】30～3520、略

【分析】【分析】

【詳解】

略【解析】農桿菌轉化法基因槍法花粉管通道法顯微注射技術受精卵繁殖快、多為單細胞、遺傳物質相對較少大腸桿菌Ca2+感受態細胞重組表達載體DNA分子21、略

【分析】【分析】

【詳解】

略【解析】0．14四、判斷題(共3題，共18分)22、B【分析】【詳解】

胚胎發育早期；細胞數量不斷增加，但胚胎總體積不變或略有縮小。

故錯誤。23、A【分析】【詳解】

生殖性克隆存在倫理道德等方面的問題，我國政府一再重申四不原則：不贊成、不允許、不支持、不接受任何生殖性克隆人實驗。本說法正確。24、A【分析】【詳解】

生殖性克隆，即通常所說的克隆人，通過克隆技術產生獨立生存的新個體，即通常所說的克隆人，該說法正確。五、實驗題(共4題，共12分)25、略

【分析】【分析】

1；泡菜的制作所使用的微生物是乳酸菌；代謝類型是異養厭氧型，在無氧條件下乳酸菌能夠將蔬菜中的葡萄糖氧化為乳酸。

2；泡菜的制作過程：按照清水與鹽的質量比為4：1的比例配制鹽水；將鹽、水煮沸冷卻。將經過預處理的新鮮蔬菜混合均勻，裝入泡萊壇內，裝至半壇時，放入蒜瓣、生姜及其他香辛料，繼續裝至八成滿，再徐徐注入配制好的鹽水，使鹽水沒過全部菜料，蓋好壇蓋。向壇蓋邊沿的水槽中注滿水，以保證壇內乳酸菌發酵所需的無氧環境。在發酵過程中要注意經常向水槽中補充水。發酵時間長短受室內溫度的影響。

3；泡菜中的亞硝酸鹽含量可以用比色法測定；即在鹽酸酸化條件下，亞硝酸鹽與對氨基苯磺酸發生重氮化反應生成重氮鹽，重氮鹽與N1萘基乙二胺鹽酸鹽結合形成玫瑰紅色染料。

（1）

乳酸菌的代謝類型是異養厭氧型；制作泡菜宜選用新鮮的蔬菜或其他原料；這是因為新鮮的蔬菜亞硝酸鹽的含量低。

（2）

將鹽水煮沸冷卻的目的是煮沸的目的是除去鹽水中的空氣和殺菌；冷卻的目的是防止高溫殺死原料中的乳酸菌（乳酸菌的生命活動不受影響）；加入“老汁”的作用是“老汁”中含有大量的乳酸菌；可使其在短時間內成為優勢菌。

（3）

測定亞硝酸鹽含量的方法是比色法。即在鹽酸酸化條件下；亞硝酸鹽與對氨基苯磺酸發生重氮化反應后，與N－1－萘基乙二胺鹽酸鹽結合后形成玫瑰紅色的染料，然后將顯色反應后的樣品與已知濃度的標準顯色液進行目測比較，大致估算出亞硝酸鹽的含量。

【點睛】

本題考查制作泡菜，要求考生識記制作泡菜的原理和過程，理解用比色法測定亞硝酸鹽的含量，意在考查考生的識記能力和分析能力。【解析】（1）異養厭氧型亞硝酸鹽的含量低。

（2）煮沸的目的是除去鹽水中的空氣和殺菌；冷卻的目的是防止高溫殺死原料中的乳酸菌（乳酸菌的生命活動不受影響）“老汁”中含有大量的乳酸菌；可使其在短時間內成為優勢菌。

（3）比色法對氨基苯磺酸玫瑰紅標準顯色液26、略

【分析】【詳解】

（1）電泳法分離蛋白質；是根據蛋白質分子的電荷；大小及形狀不同，在電場中的遷移速度不同而實現分離。

（2）牛肉膏和蛋白胨中蛋白質較多；可作為碳源和氮源。

（3）加入抗菌蛋白的培養基中；金黃色葡萄球菌應該不能生長或生長很少，未加入抗菌蛋白的培養基中金黃色葡萄球菌應該能生長，菌落較多。

（4）平板劃線法、稀釋涂布平板法都能使接種的菌種在固體培養上充分分散，對使用過的培養基應進行滅菌處理，是為了防止細菌擴散污染。【解析】①.電荷（帶電情況）②.遷移速度③.碳源④.氮源⑤.數量⑥.平板劃線法⑦.稀釋涂布平板法（稀釋混合平板法）⑧.滅菌27、略

【分析】【分析】

1；基因工程的四個步驟：目的基因的篩選與獲取、基因表達載體的構建、將目的基因導入受體細胞、目的基因的檢測與鑒定。

2、在基因工程操作中，常用原核生物作為受體細胞，其中以大腸桿菌應用最為廣泛。研究人員一般先用Ca2＋處理大腸桿菌細胞；使細胞處于一種能吸收周圍環境中DNA分子的生理狀態，然后再將重組的基因表達載體導入其中。

【詳解】

（1）利用RNA通過①過程（逆轉錄）獲得cDNA需要逆轉錄酶；已知真核生物基因的mRNA在3'端加有PolyA（多聚腺嘌呤核糖核苷酸）保護尾部不被降解。逆轉錄第一步以mRMA為模板合成DNA單鏈；新鏈與模板鏈反向平行，由于新鏈只能由5'端向3'端延伸，所以逆轉錄第一步的引物應與mRNA尾部的PolyA（多聚腺嘌呤核糖核苷酸）互補配對，即用多聚胸腺嘧啶脫氧核苷酸序列為引物；設計引物的目的是使DNA聚合酶能夠從引物的3'端開始連接脫氧核苷酸。

（2）對逆轉錄得到的cDNA擴增時；引物的5'端結合母鏈的3'端之后DNA聚合酶開始擴增DNA。為確保其與pET41a質粒定向連接，應使用不同種的限制酶切割質粒和目的基因，由圖可知，使用EcoRI酶會破環SSB基因，故應在相應引物的5'端加上BamHI和XhoⅠ酶切位點。

（3）由題圖分析可知：質粒上存在卡那霉素和氯霉素抗性基因，由于XhoⅠ酶破壞了氯霉素抗性基因，所以成功組裝的重組質粒不能在添加了氯霉素的培養基上生長，③過程用重組質粒轉染大腸桿菌時，需要用Ca2+處理大腸桿菌；目的是使大腸桿菌成為易于吸收外源DNA的狀態，然后分別將處理后的大腸桿菌先接種在添加卡那霉素的培養基（A）上培養，待長出菌落后再利用無菌膜同位置轉移到添加氯霉素的培養基（B）上培養，收集能在含卡那霉素的培養基上生長而不能在含氯霉素培養基上生長的菌落進一步純化后將菌體破碎處理，經篩選即可得到SSB蛋白。

（4）將改造后的大腸桿菌生產的SSB蛋白注入到小鼠體內是為了檢測該蛋白是否具有抗原性，如果該蛋白有抗原性，會引起機體的免疫反應，產生相應抗體。則后續實驗內容應為抽取小鼠血液提取其中的抗體，利用抗原—抗體雜交的方法檢測其是否含有抗SSB的抗體。【解析】(1)逆轉錄用多聚胸腺嘧啶脫氧核苷酸序列為引物

使DNA聚合酶能夠從引物的3'端開始連接脫氧核苷酸

(2)5’BamHⅠ和XhoI

(3)使大腸桿菌成為易于吸收外源DNA的狀態卡那霉素氯霉素能在含卡那霉素的培養基上生長而不能在含氯霉素培養基上生長的。

(4)提取其中的抗體，利用抗原—抗體雜交的方法檢測其是否含有抗SSB的抗體28、略

【分析】【分析】

樹突狀細胞為抗原呈遞細胞；可識別；攝取和傳遞抗原信息。

【詳解】

（1）細菌溶素A（ClyA）是外膜囊泡上含量較高的特異蛋白；而OMV能穿越腸道上皮屏障活化腸黏膜內豐富的免疫細胞。所以，ClyA基因的作用為表達出細菌溶素A（ClyA），使OVA和Fc定位至OMV表面，進而融合基因可以被免疫細胞識別。Fc表達產物能夠與樹突狀細胞表面的特異性受體結合，進而提高樹突狀細胞識別；攝取和傳遞抗原信息的能力。

（2）①根據表格和柱狀圖可知；服用的工程菌采用“加法原理”，逐漸增加部件，且第4組和第5組工程菌都是完整的，即第4組:ClyA-OVA-Fc第5組:ClyA-OVA-Fc，但是第4組飲用含阿拉伯糖的水，進而激活融合基因的表達；第5組不飲用含阿拉伯糖的水，不能激活融合基因的表達。所以，第3；5組含有OVA，在人為控制口服阿拉伯糖后產生OMV，激活特異性免疫，對腫瘤細胞的殺傷率較高；1、2組缺乏OVA，第4組無阿拉伯糖誘導，殺傷率均低。

②小鼠脾臟細胞具有免疫細胞；可在抗原刺激下引起特異性免疫。帶有紅色熒光標記的OVA抗原肽復合物可引起小鼠脾臟細胞發生特異性免疫，故先加入第1-5組小鼠脾臟細胞和帶有紅色熒光標記的OVA抗原肽復合物進行保溫，判斷特異性免疫的強度；

故選AC。

再加入帶有綠色熒光標記的細胞毒性T細胞特異性抗體；目的是檢測OVA抗原肽復合物是否能夠產生特異性細胞毒性T細胞。

故選B。

若第5組同時被紅色和綠色熒光標記的細胞數目占比越多；說明工程菌在人為可控條件下引發特異性免疫反應，結論成立。

③腫瘤患者術后極易復發；說明特異性免疫功能減弱。所以，可多次注射黑色素瘤細胞，進而研究該口服工程菌是否能夠誘發長期免疫記憶，從而抑制腫瘤復發。

（3）本實驗中融合基因里面有OVA（黑色素瘤細胞特異性抗原），所以只需將OVA替換為肺癌細胞特異性抗原即可。即將元件中的OVA替換為肺癌細胞特異性表達的抗原基因。【解析】(1)表達ClyA；使OVA和Fc定位至OMV表面識別；攝取。

(2)第4組:ClyA-OVA-Fc和-第5組:ClyA-OVA-Fc和+第3；5組含有OVA；在人為控制口服阿拉伯糖后產生OMV，激活特異性免疫，對腫瘤細胞的殺傷率較高;1、2組缺乏OVA，第4組無阿拉伯糖誘導，殺傷率均低ACB同時被紅色和綠色熒光標記的細胞數目占比研究該口服工程菌是否能夠誘發長期免疫記憶，從而抑制腫瘤復發。

(3)將元件中的OVA替換為肺癌細胞特異性表達的抗原基因六、綜合題(共4題，共32分)29、略

【分析】【分析】

如圖：圖片右邊M是Marker；標記大小的；1；2號泳道是兩個質粒全長；3、4號泳道是酶切后目的基因和質粒的大小。

【詳解】

（1）能降解原油的目標菌存在于原油污染土壤；為避免雜菌污染應用無菌水稀釋。

（2）①假單胞菌形成生物被膜；是生物對環境的適應。

②兩種重組質粒含有的目的基因應該一致，用Csp45I、XbaI對重組質粒切割；看切下的目的基因是否一致，初步判斷重組質粒構建是否成功。

（3）本實驗的對照組應該是導入普通質粒的目標菌A。實驗結果表明在36t/h時KT2和KT5兩種工程菌的生物被膜量相對值顯著提高。

（4）若要將以上工程菌用于原油污染土壤的修復；下一步還應進行許多研究，如：如何擴大培養。

【點睛】

本題主要考查目的菌的篩選、轉基因技