附件1：地中海貧血產(chǎn)前診斷技術(shù)規(guī)范

地中海貧血(以下簡稱地貧)是一種由珠蛋白基因缺失或突變導(dǎo)致肽鏈合成障礙而引起的溶血性貧血，是我省發(fā)病率最高的人類單基因遺傳病之一。為規(guī)范我省地貧產(chǎn)前診斷技術(shù)的應(yīng)用，特制定本技術(shù)規(guī)范。

一、地貧產(chǎn)前篩查

（一）基本要求1開展地貧產(chǎn)前篩查技術(shù)服務(wù)的醫(yī)療保健機構(gòu)（以下簡稱產(chǎn)前篩查機構(gòu)）應(yīng)符合《廣東省開展產(chǎn)前篩查技術(shù)服務(wù)的基本條件》；

2、地貧產(chǎn)前篩查機構(gòu)應(yīng)與具有產(chǎn)前診斷技術(shù)服務(wù)資質(zhì)的醫(yī)療保健機構(gòu)（以下簡稱產(chǎn)前診斷機構(gòu)）建立工作聯(lián)系，并納入產(chǎn)前診斷質(zhì)量控制體系。產(chǎn)前診斷機構(gòu)應(yīng)對產(chǎn)前篩查機構(gòu)進行技術(shù)指導(dǎo)和質(zhì)量管理。

（二）技術(shù)規(guī)范。

1、地貧產(chǎn)前初篩。

在地貧高發(fā)地區(qū)，凡未做過地貧篩查的孕婦應(yīng)建議其進行地貧篩查。地貧的初步篩查應(yīng)推廣使用血液紅細胞指數(shù)(MCV,MCH)等適宜技術(shù)。對紅細胞指數(shù)下降的，應(yīng)書面建議進一步做地貧產(chǎn)前篩查，并按規(guī)定轉(zhuǎn)診。

不具備紅細胞指數(shù)檢查條件的醫(yī)療保健機構(gòu)，應(yīng)書面建議當事人到有條件的醫(yī)療保健機構(gòu)進行該項目檢查，或采用其他方法進行篩查。

2、地貧產(chǎn)前篩查。

對產(chǎn)前檢查和血液紅細胞指數(shù)初篩發(fā)現(xiàn)的地貧可疑孕婦，應(yīng)采用血紅蛋白（Hb）電泳技術(shù)或/和高效液相色譜(HPLC)技術(shù)作進一步篩查，對檢測結(jié)果為HbA2降低或臨界值的，則再作血清鐵測定。

臨床醫(yī)生根據(jù)檢測結(jié)果，進行地貧、異常Hb和缺鐵性貧血的鑒別診斷，并提供地貧相關(guān)的產(chǎn)前咨詢及必要的轉(zhuǎn)診服務(wù)。

3、產(chǎn)前篩查報告。

產(chǎn)前篩查報告包括實驗室檢測結(jié)果和遺傳咨詢指導(dǎo)意見兩部分。實驗室檢測結(jié)果應(yīng)包括產(chǎn)前篩查所選用的試驗名稱、參考范圍、測定結(jié)果。遺傳咨詢指導(dǎo)應(yīng)包括是否存在α-或β-地貧的可能性及相應(yīng)的進一步檢查建議等。

實驗室檢測結(jié)果應(yīng)由經(jīng)培訓(xùn)的專業(yè)技術(shù)人員或?qū)嶒炇抑鞴軓?fù)核后，才能簽發(fā)。產(chǎn)前篩查報告應(yīng)當由副高以上職稱的產(chǎn)前篩查技術(shù)培訓(xùn)合格的執(zhí)業(yè)醫(yī)師復(fù)核后，才能簽發(fā)。產(chǎn)前篩查報告由2名以上經(jīng)培訓(xùn)的執(zhí)業(yè)醫(yī)師簽發(fā)。

4、產(chǎn)前篩查后高風(fēng)險對象的處理原則。

（1）對產(chǎn)前篩查結(jié)果為高風(fēng)險的孕婦，產(chǎn)前咨詢醫(yī)生應(yīng)及時給予遺傳咨詢指導(dǎo)；是否實施產(chǎn)前診斷，應(yīng)嚴格遵循知情選擇原則。

（2）醫(yī)療保健機構(gòu)不得擅自為產(chǎn)前篩查結(jié)果為高風(fēng)險的孕婦作終止妊娠的處理。

（3）對產(chǎn)前篩查結(jié)果為高風(fēng)險的孕婦應(yīng)進行隨訪。

5、產(chǎn)前篩查質(zhì)量控制體系。

（1）人員及實驗室條件：從事地貧產(chǎn)前篩查技術(shù)服務(wù)的人員和實驗室應(yīng)符合《廣東省開展產(chǎn)前篩查技術(shù)服務(wù)的基本條件》；

（2）試劑規(guī)格及使用：使用的篩查試劑應(yīng)為國家或地方政府醫(yī)用試劑主管部門準許的臨床生化檢驗用正式產(chǎn)品(含國產(chǎn)和進口試劑產(chǎn)品)。購置試劑要記錄如下信息：購買日期，批號，數(shù)量，有效期，驗收人，保存條件，存放地點等;

（3）質(zhì)量控制:產(chǎn)前篩查機構(gòu)應(yīng)建立以室間質(zhì)控檢測為主要內(nèi)容的綜合質(zhì)量考評制度。并接受與其建立工作聯(lián)系的產(chǎn)前診斷機構(gòu)的技術(shù)指導(dǎo)和質(zhì)量控制。

二、地貧產(chǎn)前診斷

（一）基本要求。

1、開展地貧診斷技術(shù)服務(wù)的醫(yī)療保健機構(gòu)應(yīng)符合《廣東省開展產(chǎn)前診斷技術(shù)服務(wù)的基本條件》;

2、分子診斷實驗室應(yīng)配有高、中、初級職稱技術(shù)人員各1名或以上，技術(shù)人員應(yīng)接受過規(guī)范的技術(shù)培訓(xùn)并取得技術(shù)合格證。

（二）技術(shù)規(guī)范。

1、主要技術(shù)操作及其技術(shù)規(guī)范。

實施單位可根據(jù)自身條件采取以下相應(yīng)技術(shù)：

(1)DNA提取：人基因組DNA從胎兒的羊水細胞、血細胞或絨毛膜組織，或從胎兒雙親和先證者的外周血（一般每人采集2-4ml）細胞中提取。所獲得的DNA樣品用于被測家庭的產(chǎn)前診斷，家系分析是產(chǎn)前診斷必須遵循的原則。每份DNA樣品需嚴格記錄，保證測試用量和備份保存。

(2)α-地貧的診斷：缺失型α-地貧（主要有--SEA、-α3.7和-α4.2三種類型）的分子診斷，推薦采用基于PCR的直接擴增缺失基因斷裂點的方法；對于非缺失型α-地貧（主要有HbConstantSpring[α2，CD142TAA→CAA],HbQuongSze[α2,CD125CTG→CCG]等六種類型）的分子診斷，推薦采用反向點雜交(RDB)技術(shù)。在進行胎兒水腫綜合征高風(fēng)險胎兒的產(chǎn)前診斷時,如有必要，可采用其它分子診斷技術(shù)進一步確診。此外，還可采用以下二種非分子診斷的其他技術(shù)：（A）用胎兒臍帶血Hb電泳分析檢測HbBart’s和HbH含量輔助診斷；（B）用胎兒超聲診斷測定心胸比值等跟蹤輔助診斷。

(3)β-地貧的診斷：基因點突變引起β-地貧的分子診斷,推薦采用RDB技術(shù)。該技術(shù)可以診斷在中國人群中目前已發(fā)現(xiàn)的絕大部分基因突變，其中包括下列基因頻率排在前列的十種β-地貧突變：CDs41-42(-TCTT)，IVS-2-654(C>T)，TATAbox-28(A>G)，CD17(A>T)，CDs71-72(+A)，CD26(G>A)，IVS-1-5(G>C),TATAbox-29(A>G),CD43(G>T)和CDs27-28(+C)。對于有條件的實驗室，也可采用其它具有嚴格質(zhì)量控制體系的分子診斷技術(shù)進行β-地貧的分子診斷。

(4)靜止型地貧的分子產(chǎn)前篩查：靜止型α-地貧基因（-α3.7和-α4.2）也是本地區(qū)常見的α-地貧類型，-α3.7和-α4.2這二種靜止型地貧基因與東南亞型缺失—SEA基因組合可導(dǎo)致嚴重影響個體生存質(zhì)量的HbH病。HbH病高風(fēng)險家庭的遺傳咨詢和診斷是不可忽視。由于在成人血樣中缺乏可靠的針對-α3.7和-α4.2這二種靜止型地貧的表型檢測指標，需采用基于PCR的DNA分子診斷技術(shù)進行產(chǎn)前篩查。

(5)其他類型血紅蛋白病的診斷:目前已知的本地區(qū)其他類型血紅蛋白病主要為中國型βd-地貧和東南亞型HPFH，二者均為β-珠蛋白基因大片段缺失所致，推薦采用基于PCR的直接擴增缺失基因斷裂點的方法對其進行分子診斷。二種常見導(dǎo)致地貧的異常Hb（HbQ和HbE）基因的分子診斷方法與上述α-或β-地貧的常規(guī)方法相同，必要時，可采用DNA序列分析技術(shù)檢測樣品的基因突變。今后在有導(dǎo)致α-或β-地貧的新突變發(fā)現(xiàn)時，可根據(jù)技術(shù)研究進展增補適宜的診斷技術(shù)。

2、地貧產(chǎn)前診斷指征和時機。

(1)地貧產(chǎn)前診斷指征：

①曾生育過重型或中間型α或β地貧患兒的夫婦；

②夫婦雙方均為α地貧攜帶者；夫婦一方為α地貧攜帶者，配偶為β地貧復(fù)合α地貧攜帶者；

③夫婦雙方均為β地貧攜帶者。

(2)產(chǎn)前診斷的時機:

產(chǎn)前診斷宜在孕24周以前進行。早孕絨毛采樣檢查宜在孕8周～11周進行；羊水穿刺檢查宜在孕16周～21周進行；臍靜脈穿刺檢查宜在孕18周～24周進行。

3、醫(yī)學(xué)診斷報告。

產(chǎn)前診斷報告包括分子實驗室檢測結(jié)果和遺傳咨詢指導(dǎo)意見兩部分。分子實驗室檢測結(jié)果應(yīng)包括所采用的技術(shù)、檢測的范圍、α-或β-地貧或其他類型地貧(如中國型βd-地貧和東南亞型HPFH)突變基因型。遺傳咨詢指導(dǎo)應(yīng)包括對診斷結(jié)果的醫(yī)學(xué)指導(dǎo)意見，以及對結(jié)果不確定性的解釋等。

實驗室檢測結(jié)果由實驗室操作者填寫并簽名、經(jīng)實驗室主管復(fù)核后才能發(fā)出。產(chǎn)前診斷報告由2名以上經(jīng)資格認定的執(zhí)業(yè)醫(yī)師簽發(fā)。

4、地貧遺傳咨詢。

地貧產(chǎn)前診斷須在當事人接受遺傳咨詢和知情同意的情況下實施。對胎兒確診為重型α-或β-地貧的，應(yīng)由遺傳咨詢醫(yī)師向當事人提供遺傳咨詢，在當事人知情同意和自主選擇的情況下，可以終止妊娠。

5、地貧產(chǎn)前診斷隨訪。

對進行了產(chǎn)前診斷的孕婦應(yīng)進行隨訪。在條件許可時，應(yīng)盡可能采集到胎兒血樣或組織,用于進一步驗證產(chǎn)前診斷的結(jié)果。

6、質(zhì)量控制體系。

(1)人員及實驗室資質(zhì)：分子診斷的技術(shù)人員必須取得相應(yīng)的技術(shù)資質(zhì)；地貧分子診斷實驗室必須取得相應(yīng)的從業(yè)技術(shù)資質(zhì)；

(2)試劑規(guī)格及使用：使用的試劑須為國家或地方政府醫(yī)用試劑主管部門準許的臨床生化檢驗用正式產(chǎn)品(含國產(chǎn)和進口試劑產(chǎn)品)。購置試劑要記錄如下信息：購買日期，批號，數(shù)量，有效期，驗收人，保存條件，存放地點等；

(3)質(zhì)量控制體系及其制度：分子診斷的操作須在符合規(guī)定