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文檔簡介

MTT實驗操作流程一、制定目的及范圍本流程旨在規范MTT實驗的操作步驟，提高實驗的準確性和重復性，確保實驗結果的可靠性。MTT實驗主要用于細胞增殖和細胞毒性檢測，適用于生物醫學研究、藥物篩選等領域。本文將詳細描述MTT實驗的各個環節，包括試劑準備、細胞培養、實驗操作及數據分析等。二、實驗原理MTT實驗基于細胞內酶的還原作用。活細胞能夠將MTT（黃色）還原為甲臜（紫色），通過測定紫色產物的吸光度，可以間接反映細胞的活性和增殖情況。實驗中，細胞的存活率與MTT還原能力成正比，因此可以通過測量吸光度來評估細胞的生長狀態。三、實驗材料與設備1.試劑MTT試劑（5mg/mL，溶于PBS或DMEM）DMSO（用于溶解甲臜）細胞培養基（如DMEM或RPMI-1640）PBS緩沖液2.設備細胞培養箱（37°C，5%CO2）酶標儀（用于測定吸光度）細胞計數板或自動細胞計數儀吸管及移液器四、實驗步驟1.細胞培養細胞應在無菌條件下培養，選擇適合的培養基，培養溫度為37°C，CO2濃度為5%。細胞生長至對數期時進行實驗，使用細胞計數板或自動細胞計數儀確定細胞濃度，通常選擇1×10^4至1×10^5個細胞/mL。2.細胞接種將細胞懸液均勻分配至96孔板中，每孔接種100μL細胞懸液。根據實驗設計，設置不同濃度的藥物處理組和對照組。接種后，將96孔板放入細胞培養箱中培養24小時，以確保細胞附壁。3.藥物處理經過24小時培養后，向各孔中加入不同濃度的藥物處理液，設置空白對照組（僅培養基）和陰性對照組（無藥物處理）。繼續培養24至72小時，具體時間根據實驗需求而定。4.MTT染色在藥物處理結束后，向每孔中加入20μLMTT溶液，繼續培養4小時。此時，活細胞會將MTT還原為紫色的甲臜。5.溶解反應將培養基吸去，向每孔中加入150μLDMSO，輕輕搖晃以溶解甲臜。此步驟可在室溫下進行，確保甲臜完全溶解。6.吸光度測定使用酶標儀在570nm波長下測定每孔的吸光度。根據吸光度值計算細胞存活率，公式為：存活率(%)=(實驗組吸光度/對照組吸光度)×100%五、數據分析實驗結束后，收集各組的吸光度數據，使用統計軟件進行分析。可以繪制劑量-反應曲線，計算IC50值（半數抑制濃度），以評估藥物的細胞毒性。數據分析應包括重復實驗的結果，以確保結果的可靠性。六、注意事項1.實驗過程中應保持無菌操作，避免污染。2.MTT試劑和DMSO均為化學試劑，操作時應佩戴手套和護目鏡。3.吸光度測定應在同一時間段內進行，以減少環境因素對結果的影響。4.實驗結果應進行多次重復，以確保數據的準確性和可重復性。七、實驗記錄與報告實驗結束后，應詳細記

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