ICS67.020

CCSX04

團體標準

T/CIRAXXXXX—2023

輻照法滅活烈性病毒劑量確定方法

Methodfordeterminingtheinactivationdoseofvirulentvirusbyirradiation

點擊此處添加與國際標準一致性程度的標識

（征求意見稿）

2023/11/6

XXXX-XX-XX發布XXXX-XX-XX實施

中國同位素與輻射行業協會發布

T/CIRAXXXXX—2023

輻照法滅活烈性病毒劑量確定方法

1范圍

本文件規定了輻照設備要求、病毒滅活評價方法與結果判定、類比病毒預備試驗、烈性病毒輻照滅

活試驗等規范要求。

本文件適用于在BSL3、BSL4實驗室，使用小型加速器輻照裝置確定烈性病毒最低有效滅活劑量的實

驗方法。

2規范性引用文件

下列文件中的內容通過文中的規范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

消毒技術規范（2002年版）衛生部(衛法監發〔2002〕282號)

WS/T775-2021新型冠狀病毒消毒效果實驗室評價標準

3術語和定義

下列術語和定義適用于本文件。

3.1

病毒滅活virusinactivation

通過物理或化學方法使病毒失去感染性。

3.2

吸收劑量absorbeddose

電離輻射授予質量為dm的物質的平均能量dε除以物質質量dm的商。吸收劑量單位為“戈瑞”符號為

Gy，1Gy=1J/kg。

3.3

最低有效滅活劑量minimumeffectivedose

為達到滅活病毒目的所需要的最低吸收劑量，即工藝劑量下限值。

3.4

病毒滴度Virustiter

單位體積液體中具有感染能力病毒的數目。

3.5

TCID50（Mediantissuecultureinfectivedose）

半數組織培養感染劑量,即指能在半數細胞培養板孔引起細胞病變(cytopathiceffect,CPE)的病毒量，

是病毒滴度常用的測量方法。

4輻照設備要求

1

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4.1技術要求

使用小型電子加速器對病毒進行滅活處理，設備要求如下：

a)電子束能量大于150keV；

b)單次輻照吸收劑量0～150kGy；

c)泄露劑量：＜1.0uSv/h（距離設備表面10cm處）；

d)設備尺寸能進入BSL3、BSL4實驗室。

4.2使用要求

a)使用單位應取得《輻射安全許可證》或地方環保部門的行政許可；

b)操作人員需參加設備操作的專題培訓。

5病毒滅活評價方法與結果判定

5.1試驗原理

用細胞感染法測定輻照處理前后（或對照組與實驗組）樣本中病毒的量。以細胞病變作為判斷指標，

使用TCID50方法確定各組病毒的感染滴度，觀察不同輻照吸收劑量對病毒的滅活效果。

5.2病毒感染性定量測定方法

TCID50細胞體外感染法，用Behrens和Karber法計算TCID50值。

5.3病毒滅活輻照劑量判定

滅活試驗結果符合以下全部條件，可判定輻照滅活病毒的有效性：

a)陰性對照組細胞生長正常；

b)陽性對照組病毒滴度對數值應≥4.0；

c)滅活試驗組細胞無病變，與陰性對照組細胞生長情況一致。

其中滿足上述判定標準獲得的輻照劑量做小值，即為最低有效輻照滅活劑量。

6類比病毒預備試驗

6.1類比病毒篩選

對烈性病毒進行輻照滅活試驗時，可先選用類比病毒進行預實驗，具體如下：

a)所選類比病毒應和擬開展試驗的烈性病毒屬于同一種屬；

b)所選類比病毒應屬于低致病性或宿主為非靈長類的病毒，可在低安全等級實驗室開展相關試驗。

6.2類比試驗要求

a)對類比病毒采取的輻照滅活試驗方法、條件等應與擬開展試驗的烈性病毒一致，輻照滅活劑量結

果以供后續參考；

b)最終結果以擬進行輻照滅活試驗的烈性病毒為準，類比病毒試驗結果僅供參考。

7烈性病毒輻照滅活試驗

7.1病毒載體材料

2

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不銹鋼鋼片和聚丙烯塑料片。不銹鋼鋼片為12mm直徑圓形片(厚0.5mm)，聚丙烯塑料片為10mm

×10mm方形。

7.2操作步驟

a)病毒載體的制備:取滅菌載體片，滴染病毒晾干備用。

b)滅活試驗:取病毒載體置于細胞培養板中，并進行密封處理，再放入小型輻照儀器內腔中，設置

輻照劑量后，作用至規定的時間取出，放入1mL維持培養基中，作用10min,混勻洗脫。

c)對照組試驗:陽性對照組為病毒對照組，觀察病毒生長是否良好，病毒滴度是否達到試驗要求；

陰性對照組用維持培養基作為陰性對照，觀察有無污染，細胞生長是否良好。

d)以上各組按照終點稀釋法分別進行病毒滴度測定。試驗重復3次。

e)根據5.2測定方法和5.3判定標準，確定2種載體下最低有效滅活劑量，最后取兩者較大者為試驗

滅活劑量。

具體參照《新型冠狀病毒消毒效果實驗室評價標準》中載體制備和載體法滅活試驗。

3

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附錄A

（規范性附錄）

輻照設備劑量標定方法

一、劑量計：采用GEX公司生產的B3薄膜劑量片。

二、測試儀器和工具：

1、分光光度計：能提供520光波波長；波長精度±2；波長重復性≤1；投射比準確度

±0.5%（T）（SRM930D）；透射比重復性0.3%（T）；光譜帶寬6；雜光≤0.5%（T）（360，）。

2、烘箱：烘箱內部帶有風機；溫度控制精度為±1℃；溫度范圍10℃~100℃可調。（用于對劑量片

進行測量前的烘烤加熱）

3、測試支架：安裝于分光光度儀內，用于固定劑量薄膜位置。

4、鑷子：用于夾取劑量片，防止其它拿取方式污染薄膜劑量片。

5、手套：無粉乳膠手套。（用于保證操作過程中不污染薄膜劑量片）

三、測試步驟:

1、將一張A4紙平鋪在托盤上（公司提供的標準高度24mm托盤），要求紙張要與金屬托盤貼合在一

起。

2、將紙張多余部分去除。

3、在托盤上標注數個測量點。測量點要求以托盤正中心為中間點，紙張長方向的對稱軸（穿過中

心點）為測量點中心點，然后像左、右間隔60mm標注一個測量點（一側1個，共3個點）。如下圖所示：

托盤上劑量片放置點位示意圖

4、劑量片標注位置標注好后將劑量片放置于點的正中。如下圖所示：

4

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劑量片在托盤上的放置位置示意圖

注意：托盤紙張上面除放置劑量片（以及固定劑量片的紙膠帶）外不得放置其它物品。它會對劑量

片接收的劑量產生干擾。

5、劑量片放置好后需要對其進行固定（設備在輻照時設備會通入氮氣，流動的氮氣會將輕薄的劑

量片吹移位置）。固定方法是在劑量片的邊緣采用紙膠帶粘接固定。粘接固定需要固定在對角上的兩個

點，同時需要注意劑量片要平貼在A4紙上。粘接方法如下圖所示：

劑量片紙膠帶粘接方法示意圖

6、劑量片固定好后邊可以放入設備進行劑量測量標定

7、標定劑量均勻性時，啟動設備，點擊裝樣，待載物小車出來后將托盤放在小車上，設置好能量

和劑量點擊啟動。

8、輻照完成后將劑量片依次貼在紙上其放入烘箱（烘箱溫度60℃）保溫15分鐘，然后采用分光

光度儀讀取參數δ。分光光度儀使在用前需要預熱30分鐘。

9、在使用分光光度儀讀數前需要對儀器進行校驗。首先打開電源開關等待30分鐘預熱，預熱完成

后按下述步驟操作：

A、按“MODE”鍵進入“T”檔。

B、蓋上蓋子，按“ABS0/100%T”鍵，顯示“100.0”。

C、打開蓋子，放入黑塊，再蓋上蓋子，按“0%T”鍵，顯示“000.0”。

D、拿出黑塊，按“MODE”鍵，回到“ABS”。

5

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在完成上述操作就可以進行劑量片的讀數了。

10、開始對劑量片進行測量時，首先用鑷子夾取劑量片放入分光光度儀里，蓋上蓋子，讀取屏幕上

的參數做好記錄。然后用參數的劑量對照表讀取三個讀取參數、、分別所對應的劑量讀

數值記為、。然后根據下面公式計算輻照平均劑量。

D1D2、D3

DDD

D123

3