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文檔簡介

實驗八中性粒細胞吞噬功能檢測實驗七思考題：為何常用密度為1.077土0.002的分層液分離人單個核細胞？答：這和人外周血中各類成分密度有關。血小板：1.030-1.035，淋巴細胞：1.075-1.090，粒細胞:1.092，紅細胞：1.093，因此將血液疊加在1.077土0.002的分層液上面，經離心會單個核細胞會處于血漿和分離液中間，從而達到分離目的。實驗八中性粒細胞吞噬功能檢測臨床微生物及免疫學檢驗教研室一、實驗目的掌握中性粒細胞吞噬功能試驗的原理。熟悉中性粒細胞吞噬功能試驗的操作方法。二、實驗原理中性粒細胞具有吞噬細菌和異物顆粒的能力。在體外將中性粒細胞與細菌或異物顆粒共同孵育后，即可被中性粒細胞吞噬、攝入，顯微鏡觀察可見中性粒細胞內有細菌或異物顆粒。二、實驗原理計算吞噬有細菌或異物顆粒的中性粒細胞數占中性粒細胞總數的百分率和每個中性粒細胞平均吞噬細菌或異物顆粒數，可反應中性粒細胞的吞噬功能。三、實驗器材標本：人抗凝血被吞噬物：金黃色葡萄球菌培養基：肉湯培養基試劑：瑞－吉氏染液、無菌生理鹽水器材：枸櫞酸鈉抗凝管、試管、載玻片、

恒溫箱、顯微鏡等。制備被吞噬物：金葡菌接種于肉湯培養基中培養12h后，置4℃備用。2.準備被檢測標本：枸櫞酸鈉抗凝血1ml。四、實驗步驟實驗步驟混合培養：在1ml抗凝血中加入金葡菌懸液3-5滴，混勻，置37℃水浴箱中，孵育30min，期間每10min搖勻1次。制備細胞推片，瑞-吉染色：油鏡觀察：計數200個中性粒細胞，記錄吞噬細菌的細胞數和每個中性粒細胞吞入的細菌數。五、結果判斷中性粒細胞核深染且分葉，胞漿淡紅色，細菌呈紫色-吞噬百分率（%）=×100％吞噬指數=參考區間：吞噬率（91

+

5.8）%；吞噬指數大于1計數的中性粒細胞吞噬細菌總數計數的中性粒細胞總數吞噬細菌的中性粒細胞數計數的中性粒細胞總數

-六、注意事項1.抗凝劑的選擇：肝素抗凝時白細胞著色不佳，經瑞-吉染色后易出現深藍色背景；EDTA影響

白細胞的吞噬功能；構椽酸鈉抗凝最合適。2.細菌的濃度和孵育溫度：3.血涂片的質量：七、應用與評價本試驗可用于檢測有吞噬功能障礙的病癥，如結合NBT（硝基藍四氮唑還原試驗），在一定程度上可反映機體的免疫功能狀態，也可用于有免疫調節活性藥物的篩選。此法操作簡便，不需特殊設備

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