團體標準《富硒花生中硒形態的測定高效液相色譜—電感耦合等離子體質譜法》（征求意見稿）編制說明項目來源根據《關于下達2021年第十一批團體標準制修訂項目計劃的通知》（桂標協﹝2021﹞28號）文件精神，由廣西大學提出，廣西大學、廣西西大檢測有限公司、杭州市食品藥品檢驗研究院、蘇州堯智生態環保科技有限公司共同起草的團體標準《富硒花生中硒形態的測定高效液相色譜—電感耦合等離子體質譜法》（項目編號：2021-1101）。項目背景及目的意義食物是人體硒元素的主要來源，通過植物生產將土壤硒轉化為食物硒，提高食物鏈硒水平是預防硒缺乏和調控硒營養的有效途徑。硒在自然界和生物體中有多種形態，自然界中的硒多以無機鹽形式存在，據硒鹽的毒理分析表明，無機硒均為劇毒，其中毒性較大的有硒酸鹽Se（VI）、亞硒酸鹽Se（IV），不易被人體吸收；而有機硒具有較高的生物利用度和生物活性，與人體代謝密切相關的有硒代蛋氨酸（SeMet）、硒代胱氨酸（SeCys2）、甲基硒代半胱氨酸（MeSeCys）等。隨著我國居民保健需求的增加，保健品市場不斷擴大，開發利用硒資源,生產富硒食品、保健品，已逐漸成為我國食品行業的一個新熱點。隨著研究水平和人類身體健康要求的不斷提高，人們認識到元素的生理效應、不光與元素的含量相關，只有當元素以特定形態存在，并處于一定濃度范圍內時，才會對生物體和生命系統發揮作用。與水稻等作物相比花生具有更強的硒元素富集能力，隨著人們保健意識的逐漸提升，對富硒花生的需求量逐漸增加，富硒花生價格30元/公斤，普通花生12元/公斤，價格差異明顯。由于當下有關硒的檢測檢測方法和判定標準多以硒的總量為標準，部分不法商人為牟取高額利潤，通過添加無機硒來提高總硒含量的“富硒”產品，導致富硒市場魚龍混雜，嚴重制約富硒花生產業的發展。本標準《富硒花生中硒形態的測定高效液相色譜—電感耦合等離子體質譜法》的前處理簡便快捷，試劑無毒無害，檢測特異性強、靈敏度高，定量精準，滿足花生中無機硒和多種有機硒形態分析的需要（硒代蛋氨酸、L-硒代胱氨酸、Se-甲基硒代-L-半胱氨酸、硒酸鈉、亞硒酸鈉），為食品中硒形態的分析鑒定提供了切實可行的方法依據。本標準的制定推動硒檢測技術的發展與進步，有助于對硒的生物學功能進行更全面而深入的了解；有助于富硒花生的深度開發利用，提高富硒花生的經濟價值；有助于制定花生中有毒無機硒限量，為科學有效的進行風險評估提供技術支撐和數據支持。目前關于花生硒含量限定主要為GH/T1135-2017《富硒農產品》豆類總硒含量0.1mg/kg～1.00mg/kg,硒代氨基酸總量＞65％、DB45/T1061-2014《富硒農產品硒含量分類要求》油料類總硒含量0.05mg/kg～0.5mg/kg；T/LYFLA004-2018《富硒花生》富硒花生果總硒含量0.1mg/kg～0.3mg/kg,富硒花生仁總硒含量0.2mg/kg～0.3mg/kg；檢測主要為GB5009.93-2017《食品安全國家標準食品中硒的測定》、GB5009.268-2016kw《食品安全國家標準食品中多元素的測定》，關于硒的測定方法主要有氫化物發生－原子熒光光譜法(HG－AFS)、氫化物發生－電感耦合等離子體原子發射光譜法、電化學分析法、氫化物發生－原子吸收光譜法(HG－AAS)、熒光法和極譜法等。當下檢測方法仍以消解為主，硒限量主要為總硒含量或區分2種硒形態，且操作復雜，導致花生中硒含量限量安全閥值較窄，仍以硒總量、或僅可區分硒代氨基酸含量，遠遠不能滿足當下告訴發展的富硒行業。根據調查發現，當下花生硒檢測還存在的問題如下：目前報道花生硒形態的檢測方法主要有分光光度法、毛細管電泳一電化學發光法、液相色譜法等，但均存在樣品前處理復雜或檢測硒形態種類較少等不足，效率低。高效液相色譜一電感耦合等離子體一質譜(HPLC—ICP—MS)聯用技術具有接口簡單、應用廣泛、檢出限低、分離效率及靈敏度高等優點，可同時完成不同硒形態的測定。當前食品中硒形態含量檢測多針對糧谷，而花生研究相對較少，花生組成成分非常復雜，主要包括蛋白質、脂肪和糖，此外還含有有糖類、維生素A、維生素B6、維生素E、維生素K，以及礦物質鈣、鐵等營養成分，含有8種人體所需的氨基酸及不飽和脂肪酸，含卵磷脂、膽堿、胡蘿卜素、粗纖維等物質，且花生基質以脂肪為主，與糧谷相比存在較大差異，但所用酶提取劑未有差異，導致酶提取過程中無法有效破壞植物組織和細胞，細胞內天然物質溶出量低，提取效率較低，不能滿足當前檢測要求。本文件通過引用高效液相色譜－電感耦合等離子體－質譜聯用技術，并選擇花生特異性水解酶（蛋白酶），達到簡化操作、同時檢測5種形態硒的目的，大幅度提高富硒花生硒的檢測水平。標準編制過程（一）成立標準編制工作組團體標準《富硒花生中硒形態的測定高效液相色譜—電感耦合等離子體質譜法》項目任務下達后，成立了標準編制工作組，制定了標準編寫方案，明確任務職責，確定工作技術路線，開展標準研制工作，具體標準編制工作由廣西大學、廣西西大檢測有限公司、杭州市食品藥品檢驗研究院、蘇州堯智生態環保科技有限公司相關人員配合。（二）收集整理文獻資料標準編制工作組收集了國內與高效液相色譜—電感耦合等離子體質譜法測定富硒花生中硒形態相關標準，具體列出如下：GB/T5009.53《食品安全國家標準食品中硒的測定》GB5009.268kw《食品安全國家標準食品中多元素的測定》GB/T13883《飼料中硒的測定》DZ/T0253.2《生態地球化學評價動植物樣品分析方法第2部分：硒量的測定原子熒光光譜法》NY/T3556《糧谷中硒代半胱氨酸和硒代蛋氨酸的測定液相色譜-電感耦合等離子體質譜法》DB45/T1175《植物類中藥材中總硒的測定原子熒光光譜法》DB45/T1061《富硒農產品硒含量分類要求》（三）研討確定標準主體內容標準編制工作組在對收集的資料進行整理研究之后，標準編制工作組召開了標準編制會議，對標準的整體框架結構進行了研究，并對標準的關鍵性內容進行了初步探討。經過研究，標準的主體內容確定為術語和定義、原理、試劑和材料、儀器和設備、試樣制備、分析步驟、結果計算、精密度。（四）調研、形成文本草案、征求意見稿2020年6月-2021年4月，標準起草工作小組進行了廣泛調研工作，查閱了大量的國內外文獻資料，對食品中硒形態的檢測方法進行系統總結，并以富硒花生為試材，選擇花生特異性水解酶及確定儀器條件，進行大量實驗。經編制組反復討論，形成了標準的基本構架，對主要內容進行了討論并對項目的工作進行了部署和安排。2021年5月～2021年10月，在前期工作的基礎之上，通過理清邏輯脈絡，整合已有參考資料中有關高效液相色譜—電感耦合等離子體質譜法測定富硒花生中硒形態檢測方法，并結合前期預實驗的實驗結果，按照簡化、統一等原則編制完成團體標準《富硒花生中硒形態的測定高效液相色譜—電感耦合等離子體質譜法》（草案）。2021年11月～2022年3月，標準編制工作組在南寧市組織全區相關領域專家對團體標準《富硒花生中硒形態的測定高效液相色譜—電感耦合等離子體質譜法》（草案）進行征求意見。并針對該檢測方法于廣西大學、農業農村部亞熱帶果品蔬菜質量監督檢驗測試中心、杭州市食品藥品檢驗研究院進行驗證試驗，針對檢測結果經過多次討論、研究，最終形成團體標準《富硒花生中硒形態的測定高效液相色譜—電感耦合等離子體質譜法》（征求意見稿）和編制說明。標準制定原則（一）實用性原則本文件是在充分收集相關資料和文獻，根據現有食品中硒含量的檢測方法如，氫化物發生－原子熒光光譜法(HG－AFS)、氫化物發生－電感耦合等離子體原子發射光譜法、電化學分析法、氫化物發生－原子吸收光譜法(HG－AAS)、熒光法和極譜法等，優化富硒花生中硒形態檢測方法，在現有國家、行業標準相關富硒花生中硒形態檢測方法的基礎上，結合多年經驗而總結起草的。符合當前富硒花生中硒形態檢測的要求，有利于行業的長遠發展，具有較強的實用性和可操作性。（二）協調性原則本文件編寫過程中注意了高效液相色譜—電感耦合等離子體質譜法測定富硒花生中硒形態的技術要求與相關法律法規的協調問題，在內容上與現行法律法規、標準協調一致。（三）規范性原則本文件嚴格按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分：標準的結構和編寫》的要求和規定編寫本標準的內容，保證標準的編寫質量。（四）前瞻性原則本文件以的當前食品中硒含量檢測方法為基礎，以富硒花生為原料，通過高效液相色譜—電感耦合等離子體質譜法同時測定富硒花生中5種形態硒形態含量，為我國富硒花生中硒形態檢測、富硒產業健康發展提供新途徑，在標準中體現了個別特色性、前瞻性和先進性條款，作為對富硒花生中硒形態檢測技術的指導。標準主要章節內容及確定依據自2020年起，廣西大學、廣西西大檢測有限公司等起草單位就已經開始對富硒農產品中不同硒形態進行檢測，期間進行了上百個樣品的檢測，數據量十分豐富，在不斷的試驗過程中試驗方法得到不斷完善，最終形成準確度高、可操作性強的富硒花生中5種形態硒形態的檢測方法。（一）原理試樣中5種硒形態用酶提取，經過反相液相色譜分離，電感耦合等離子體質譜儀測定，外標法定量。（二）試劑和材料1.以下所用試劑，除特殊注明外，均為優級純試劑；實驗用水應符合GB/T6682中一級水的要求。2.七氟丁酸（C4HF7O2，98%）。3.磷酸二氫鉀（KH2PO4），優級純。4.甲醇（CH3OH）：色譜純。5.鏈霉蛋白酶E（PronaseE，Solarbio）。6.微孔濾膜(PES)：47mm，0.22μm。7.流動相（30mmol/L磷酸二氫鉀-0.15％七氟丁酸-2％甲醇）：稱取8.1654g磷酸二氫鉀（KH2PO4）(精確到0.0001g）于2L水中，攪拌至溶解，過0.22μm微孔濾膜（PES)，再量取磷酸二氫鉀濾液1000mL于1L潔凈廣口瓶中，加入1.5mL七氟丁酸和20mL甲醇溶液，超聲30min，現配現用。8.標準品1）硒代蛋氨酸（化學式：C5H11NO2Se，CAS號：2578-28-1），純度≥98％。2）L-硒代胱氨酸（化學式：C6H12N2O4Se2，CAS號：29621-88-3），純度≥98％。3）Se-甲基硒代-L-半胱氨酸(化學式：C4H9NO2Se，CAS號：26046-90-2)，純度≥98％。4）硒酸鈉（化學式：Na2O4Se，CAS號：13410-01-0），純度≥98％。5）亞硒酸鈉（化學式：Na2SeO3，CAS號：10102-18-8），純度≥98％。9.標準溶液1）硒代蛋氨酸標準儲備液（100mg/L，按Se計）：稱取2.43mg硒代蛋氨酸標準品，用水溶解并定容至10mL。0℃～4℃避光保存，有效期3個月。2）L-硒代胱氨酸標準儲備液（100mg/L，按Se計）：稱取4.15mgL-硒代胱氨酸標準品，用水溶解并定容至10mL。0℃～4℃避光保存，有效期3個月。3）Se-甲基硒代-L-半胱氨酸標準儲備液（100mg/L，按Se計）：稱取2.26mgSe-甲基硒代-L-半胱氨酸標準品，用水溶解并定容至10mL。0℃～4℃避光保存，有效期3個月。4）硒酸鈉標準儲備液（100mg/L，按Se計）：稱取2.34mg硒酸鈉標準品，用水溶解并定容至10mL。0℃～4℃避光保存，有效期3個月。5）亞硒酸鈉標準儲備液（100mg/L，按Se計）：稱取2.15mg亞硒酸鈉標準品，用水溶解并定容至10mL。0℃～4℃避光保存，有效期3個月。6）混合標準中間儲備液(1mg/L)：分別準確吸取1.0mL硒代蛋氨酸標準儲備液(100mg/L)、L-硒代胱氨酸標準儲備液(100mg/L)、Se-甲基硒代-L-半胱氨酸標準儲備液(100mg/L)、硒酸鈉標準儲備液(100mg/L)、亞硒酸鈉標準儲備液(100mg/L)于100mL容量瓶中，加水稀釋并定容至刻度。0℃～4℃避光保存，有效期3個月。7）混合標準儲備液(硒代蛋氨酸、L-硒代胱氨酸、Se-甲基硒代-L-半胱氨酸500μg/L；硒酸鈉100μg/L；亞硒酸鈉50μg/L）：分別準確吸取50.0mL硒代蛋氨酸標準儲備液(1mg/L)、L-硒代胱氨酸標準儲備液(1mg/L)、Se-甲基硒代-L-半胱氨酸標準儲備液(1mg/L)；10.0mL硒酸鈉標準儲備液(1mg/L)、5.0mL亞硒酸鈉標準儲備液(1mg/L)于100mL容量瓶中，加水稀釋并定容至刻度。0℃～4℃避光保存，有效期2個月。8）混合標準使用液:取混合標準儲備液（5.8.4）0.1mL、0.5mL、1mL、2.5mL、5mL置于50mL容量瓶中，用超純水稀釋至刻度，混勻，得到以下系列標準使用液：—— 硒代蛋氨酸濃度為（1μg/L、5μg/L、10μg/L、25μg/L、50μg/L）（以Se計）；—— L-硒代胱氨酸濃度為（1μg/L、5μg/L、10μg/L、25μg/L、50μg/L）（以Se計）；—— Se-甲基硒代-L-半胱氨酸濃度為（1μg/L、5μg/L、10μg/L、25μg/L、50μg/L）（以Se計）；—— 硒酸鈉濃度為（0.2μg/L、1μg/L、2μg/L、5μg/L、10μg/L）（以Se計）；—— 亞硒酸鈉濃度為（0.1μg/L、0.5μg/L、1μg/L、2.5μg/L、5μg/L）（以Se計），現用現配。9.甲烷：純度99.999％。10.液氬：純度99.999％。（三）儀器和設備1.高效液相色譜-電感耦合等離子體質譜儀:配碰撞反應池。2.分析天平:感量為0.1mg和0.01mg。3.谷物粉碎機。4.恒溫振蕩器:振蕩轉速≥300r/min05.超聲波清洗器。6.離心機:轉速15000r/min。7.渦旋混合器。8.旋轉蒸發儀。（四）測定步驟1.試樣制備將花生樣品干樣放入粉碎機中粉碎，全部過0.850mm的標準網篩，混勻，制備好的試樣平均分成兩份，裝入潔凈的盛樣容器內，密封并標明標記。試樣常溫干燥保存。2.試樣提取稱取0.2g(精確至0.0001g)富硒花生樣品于50mL離心管中，加入20mg鏈霉蛋白酶E和20mL超純水，渦旋混勻，置于37℃水浴振蕩器中，振蕩提取2h,待提取結束后，于10000r/min離心30min，吸取上清液37℃旋轉蒸發濃縮5倍，用1ml超純水渦旋2min，超聲復溶，過0.22μm的雙層水系濾膜，待測。3.測定（1）液相色譜條件—— 色譜柱：Hypersi1GOLDC8250mm×4.6mm，5μm液相色譜柱；—— 流動相：30mmol/L磷酸二氫鉀-0.15％七氟丁酸-2％甲醇；—— 流動相流速：1.0mL/min；—— 進樣量：50μL。（2）電感耦合等離子體質譜條件—— 霧化器：同心霧化器；—— 炬管內徑：2.5mm；—— 釆樣錐/截取錐(Ni)孔徑：1.0/0.4mm；—— 采集質量數：80；—— 采集模式：反應模式；—— 高頻等離子體發射功率：1300W；—— 霧化器流量：0.88L/min；—— 甲烷氣體流量：0.6mL/min；—— 低質量截取：0.45；—— 蠕動泵轉速：35rpm；—— 駐留時間：1000ms。4.標準曲線取混合標準使用液，按濃度由低到高依次進樣測定，以各硒形態色譜峰面積和濃度作圖，繪制標準曲線。5.試樣溶液測定取試樣溶液進樣測定，根據標準溶液的色譜保留時間定性，從標準曲線得到的樣液中硒代蛋氨酸、L-硒代胱氨酸、Se-甲基硒代-L-半胱氨酸、硒酸鈉、亞硒酸鈉濃度。試樣溶液中5種硒形態的響應值均應在標準曲線線性范圍內；當試液超出線性范圍時，應用流動相（30mmol/L磷酸二氫鉀-0.15％七氟丁酸-2％甲醇）進行適當稀釋后進樣測定。6.空白試驗除不加試樣外，按2和3步驟，隨同試樣進行空白試驗。（五）計算及結果分析試樣中硒代蛋氨酸、L-硒代胱氨酸、Se-甲基硒代-L-半胱氨酸、硒酸鈉、亞硒酸鈉含量（以Se計）用質量分數ωi計，單位以毫克每千克（mg/kg）表示，按式（1）計算。 ωi=（Ci式中：ωi——試樣中硒代蛋氨酸、L-硒代胱氨酸、Se-甲基硒代-L-半胱氨酸、硒酸鈉、亞硒酸鈉含量，單位為毫克每千克（mg/kg）；Ci——樣液中硒代蛋氨酸、L-硒代胱氨酸、Se-甲基硒代-L-半胱氨酸、硒酸鈉、亞硒酸鈉濃度，單位為微克每升(μg/L）；C0——空白試液中硒代蛋氨酸、L-硒代胱氨酸、Se-甲基硒代-L-半胱氨酸、硒酸鈉、亞硒酸鈉濃度，單位為微克每升（μg/L）；V——試液最終定容體積，單位為毫升（mL）；N ——試液稀釋倍數；m ——試樣溶液所代表試樣的質量，單位為克（g）；1000——換算系數。方法驗證報告（一）檢出限表A1-1檢出限測試數據表（廣西大學農學院）項目花生Se(IV)Se(VI)SeCys2SeMeCysSeMet檢出限(μg/L)0.10.10.10.20.2備注注：為實驗室編號。Se(IV)—亞硒酸根;Se(VI)—硒酸根;SeCys2—硒代胱氨酸;SeMeCys—硒甲基硒代半胱氨酸;SeMet—硒代蛋氨酸。表A1-2檢出限測試數據表（農業農村部亞熱帶果品蔬菜質量監督檢驗測試中心）項目花生Se(IV)Se(VI)SeCys2SeMeCysSeMet檢出限(μg/L)0.10.10.10.20.2備注注：為實驗室編號。Se(IV)—亞硒酸根;Se(VI)—硒酸根;SeCys2—硒代胱氨酸;SeMeCys—硒甲基硒代半胱氨酸;SeMet—硒代蛋氨酸。（二）精密度表A2-1方法精密度測試數據（廣西大學農學院）平行測定次數樣品Se(IV)Se(VI)SeCys2SeMeCysSeMet測定結果（mg/kg）10.0980.016未檢出未檢出0.3920.0880.024未檢出未檢出0.4230.0920.023未檢出未檢出0.4540.0970.016未檢出未檢出0.3750.0840.019未檢出未檢出0.4560.0820.018未檢出未檢出0.3370.0790.017未檢出未檢出0.4680.0870.018未檢出未檢出0.4290.0860.021未檢出未檢出0.38100.0890.025未檢出未檢出0.32平均值(mg/kg）0.0880.020//0.40相對標準偏差(%）6.916.9//12.4注：為實驗室編號。Se(IV)—亞硒酸根;Se(VI)—硒酸根;SeCys2—硒代胱氨酸;SeMeCys—硒甲基硒代半胱氨酸;SeMet—硒代蛋氨酸。表A2-2方法精密度測試數據（農業農村部亞熱帶果品蔬菜質量監督檢驗測試中心）平行測定次數50μg/L混標Se(IV)Se(VI)SeCys2SeMeCysSeMet測定結果（cps）10.0780.025未檢出未檢出0.3720.0850.019未檢出未檢出0.430.0910.02未檢出未檢出0.4540.0870.017未檢出未檢出0.4750.0890.018未檢出未檢出0.4560.0830.021未檢出未檢出0.3570.0760.022未檢出未檢出0.4280.0770.022未檢出未檢出0.4490.0760.016未檢出未檢出0.48100.0870.025未檢出未檢出0.37平均值(cps）0.0830.021//0.42相對標準偏差(%）6.915.1//10.8注：為實驗室編號。Se(IV)—亞硒酸根;Se(VI)—硒酸根;SeCys2—硒代胱氨酸;SeMeCys—硒甲基硒代半胱氨酸;SeMet—硒代蛋氨酸。表A2-3方法精密度測試數據（杭州市食品藥品檢驗研究院）樣品編號Se(IV)含量（mg/kg）Se(VI)含量（mg/kg）SeCys2含量（mg/kg）SeMeCys含量（mg/kg）SeMet含量（mg/kg）10.0920.019未檢出未檢出0.4520.0990.022未檢出未檢出0.4330.0900.019未檢出未檢出0.4540.0950.018未檢出未檢出0.4150.0860.018未檢出未檢出0.4260.0780.015未檢出未檢出0.3670.0760.015未檢出未檢出0.3680.0880.018未檢出未檢出0.3690.0860.018未檢出未檢出0.33100.0760.015未檢出未檢出0.36平均值（mg/kg）0.0870.018//0.39相對標準偏差RSD(%)9.212.5//11.1（三）回收率表A3-1樣品加標回收率測試數據（廣西大學農學院）平行測定次數樣品低濃度加標回收率Se(IV)Se(VI)SeCys2SeMeCysSeMet測定結果(μg/L）12.42.62.52.92.622.52.52.72.62.532.52.72.42.82.3平均值(μg/L）2.52.62.52.82.6加標量(μg/L）3.03.03.03.03.0平均加標回收率（%）82.286.784.492.285.6注：為實驗室編號。Se(IV)—亞硒酸根;Se(VI)—硒酸根;SeCys2—硒代胱氨酸;SeMeCys—硒甲基硒代半胱氨酸;SeMet—硒代蛋氨酸。樣品中5種硒形態含量均為未檢出。表A3-2樣品加標回收率測試數據（廣西大學農學院）平行測定次數樣品中濃度加標回收率Se(IV)Se(VI)SeCys2SeMeCysSeMet測定結果(μg/L）112.113.511.913.114.0212.813.712.013.614.0312.013.811.313.214.9平均值(μg/L）12.313.711.713.314.3加標量(μg/L）15.015.015.015.015.0加標回收率（%）82.091.178.288.795.3注：為實驗室編號。Se(IV)—亞硒酸根;Se(VI)—硒酸根;SeCys2—硒代胱氨酸;SeMeCys—硒甲基硒代半胱氨酸;SeMet—硒代蛋氨酸。樣品中5種硒形態含量均為未檢出。表A3-3樣品加標回收率測試數據（廣西大學農學院）平行測定次數樣品高濃度加標回收率Se(IV)Se(VI)SeCys2SeMeCysSeMet測定結果(μg/L）145.949.045.144.245.2246.946.545.944.645.9346.746.846.245.946.7平均值(μg/L）46.547.445.744.945.9加標量(μg/L）50.050.050.050.050.0加標回收率（%）93.094.991.589.891.9注：為實驗室編號。Se(IV)—亞硒酸根;Se(VI)—硒酸根;SeCys2—硒代胱氨酸;SeMeCys—硒甲基硒代半胱氨酸;SeMet—硒代蛋氨酸。樣品中5種硒形態含量均為未檢出。表A3-4樣品加標回收率測試數據（農業農村部亞熱帶果品蔬菜質量監督檢驗測試中心）平行測定次數樣品低濃度加標回收率Se(IV)Se(VI)SeCys2SeMeCysSeMet測定結果(μg/L）12.72.62.82.52.522.52.52.72.42.732.62.42.62.22.7平均值(μg/L）2.62.52.72.42.6加標量(μg/L）3.03.03.03.03.0加標回收率（%）86.783.390.078.986.7注：為實驗室編號。Se(IV)—亞硒酸根;Se(VI)—硒酸根;SeCys2—硒代胱氨酸;SeMeCys—硒甲基硒代半胱氨酸;SeMet—硒代蛋氨酸。樣品中5種硒形態含量均為未檢出。表A3-5樣品加標回收率測試數據（農業農村部亞熱帶果品蔬菜質量監督檢驗測試中心）平行測定次數樣品中濃度加標回收率Se(IV)Se(VI)SeCys2SeMeCysSeMet測定結果(μg/L）111.511.612.213.612.6211.211.512.412.912.2311.811.812.512.513.6平均值(μg/L）11.511.612.413.012.8加標量(μg/L）15.015.015.015.015.0加標回收率（%）76.777.682.486.785.3注：為實驗室編號。Se(IV)—亞硒酸根;Se(VI)—硒酸根;SeCys2—硒代胱氨酸;SeMeCys—硒甲基硒代半胱氨酸;SeMet—硒代蛋氨酸。樣品中5種硒形態含量均為未檢出。表A3-6樣品加標回收率測試數據（農業農村部亞熱帶果品蔬菜質量監督檢驗測試中心）平行測定次數樣品高濃度加標回收率Se(IV)Se(VI)SeCys2SeMeCysSeMet測定結果(μg/L）132.335.634.834.435.3230.935.231.532.934.0332.533.831.635.835.5平均值(μg/L）31.934.932.634.434.9加標量(μg/L）40.040.040.040.040.0加標回收率（%）79.887.281.685.987.3注：為實驗室編號。Se(IV)—亞硒酸根;Se(VI)—硒酸根;SeCys2—硒代胱氨酸;SeMeCys—硒甲基硒代半胱氨酸;SeMet—硒代蛋氨酸。樣品中5種硒形態含量均為未檢出。表A3-7樣品加標回收率測試數據（杭州市食品藥品檢驗研究院）回收率實驗分離情況良好■較差□濃度組分水平13.0μg/L水平215.0μg/L水平350.0μg/L測量值（μg/L）回收率%測量值（μg/L）回收率%測量值（μg/L）回收率%Se(IV)2.32.22.276.711.412.412.376.046.544.444.093.073.382.788.873.382.088.0Se(VI)2.92.72.696.712.813.412.885.348.748.047.697.490.089.396.086.785.395.2SeCys22.62.42.486.711.712.412.278.047.046.145.994.080.082.792.280.081.391.8SeMeCys2.32.72.476.712.114.013.580.747.341.644.594.690.093.383.280.090.089.0SeMet2.62.52.386.713.813.712.892.045.045.843.090.083.391.391.676.785.386.0（四）準確度表A4-1樣品測試數據（廣西大學農學院）平行測定次數低濃度樣品Se(IV)Se(VI)SeCys2SeMeCysSeMet測定結果(mg/kg）10.0540.019未檢出未檢出0.2220.0580.015未檢出未檢出0.2730.0510.017未檢出未檢出0.25平均值(mg/kg）0.0540.017//0.25相對標準偏差(%）6.511.8//10.2注：為實驗室編號。Se(IV)—亞硒酸根;Se(VI)—硒酸根;SeCys2—硒代胱氨酸;SeMeCys—硒甲基硒代半胱氨酸;SeMet—硒代蛋氨酸。樣品中5種硒形態含量均為未檢出。表A4-2樣品測試數據（廣西大學農學院）平行測定次數中濃度樣品Se(IV)Se(VI)SeCys2SeMeCysSeMet測定結果(mg/kg）10.0890.018未檢出未檢出0.4620.0980.019未檢出未檢出0.4930.0740.017未檢出未檢出0.48平均值(mg/kg）0.0870.018//0.48相對標準偏差(%）13.95.6//3.2注：為實驗室編號。Se(IV)—亞硒酸根;Se(VI)—硒酸根;SeCys2—硒代胱氨酸;SeMeCys—硒甲基硒代半胱氨酸;SeMet—硒代蛋氨酸。樣品中5種硒形態含量均為未檢出。表A4-3樣品測試數據（廣西大學農學院）平行測定次數高濃度樣品Se(IV)Se(VI)SeCys2SeMeCysSeMet測定結果(mg/kg）10.0770.009未檢出未檢出0.7620.0810.008未檢出未檢出0.7930.0790.008未檢出未檢出0.68平均值(mg/kg）0.0790.008//0.74相對標準偏差(%）2.56.9//7.6注：為實驗室編號。Se(IV)—亞硒酸根;Se(VI)—硒酸根;SeCys2—硒代胱氨酸;SeMeCys—硒甲基硒代半胱氨酸;SeMet—硒代蛋氨酸。樣品中5種硒形態含量均為未檢出。表A4-4樣品測試數據（農業農村部亞熱帶果品蔬菜質量監督檢驗測試中心）平行測定次數低濃度樣品Se(IV)Se(VI)SeCys2SeMeCysSeMet測定結果(mg/kg）10.0530.015未檢出未檢出0.2820.0590.011未檢出未檢出0.2230.0550.012未檢出未檢出0.23平均值(mg/kg）0.0560.013//0.24相對標準偏差(%）5.516.4//13.2注：為實驗室編號。Se(IV)—亞硒酸根;Se(VI)—硒酸根;SeCys2—硒代胱氨酸;SeMeCys—硒甲基硒代半胱氨酸;SeMet—硒代蛋氨酸。樣品中5種硒形態含量均為未檢出。表A4-5樣品測試數據（農業農村部亞熱帶果品蔬菜質量監督檢驗測試中心）平行測定次數中濃度樣品Se(IV)Se(VI)SeCys2SeMeCysSeMet測定結果(mg/kg）10.0950.025未檢出未檢出0.4720.0900.018未檢出未檢出0.4430.0870.019未檢出未檢出0.38平均值(mg/kg）0.0910.021//0.43相對標準偏差(%）4.518.3//10.7注：為實驗室編號。Se(IV)—亞硒酸根;Se(VI)—硒酸根;SeCys2—硒代胱氨酸;SeMeCys—硒甲基硒代半胱氨酸;SeMet—硒代蛋氨酸。樣品中5種硒形態含量均為未檢出。表A4-6樣品測試數據（農業農村部亞熱帶果品蔬菜質量監督檢驗測試中心）平行測定次數高濃度樣品Se(IV)Se(VI)SeCys2SeMeCysSeMet測定結果(mg/kg）10.0740.007未檢出未檢出0.7120.0790.008未檢出未檢出0.7730.0760