ICSFORMTEXT65.020.20CCSFORMTEXTB16DBFORMTEXT32DBFORMTEXT32/TXXXX—FORMTEXTXXXXFORMTEXT?????小麥品種（系）抗莖基腐病鑒定技術(shù)規(guī)程Technicalcodeforresistanceevaluationofwheatvarieties(lines)againstFusariumcrownrotFORMTEXTXXXX-FORMTEXTXX-FORMTEXTXX發(fā)布XXXX-FORMTEXTXX-FORMTEXTXX實(shí)施FORMTEXT江蘇省市場監(jiān)督管理局發(fā)布DB32/TXXXX—XXXX前??言本文件按照GB/T1.1-2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本文件由江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院提出。本文件由江蘇省農(nóng)作物標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)歸口。本文件起草單位：江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院。本文件主要起草人：李偉、陳懷谷、楊學(xué)明、鄧淵鈺、孫海燕、曹淑琳、張昕、林玲。小麥品種（系）抗莖基腐病鑒定技術(shù)規(guī)程1范圍本文件規(guī)定了小麥品種（系）抗莖基腐病鑒定的病原物接種體制備、抗性鑒定圃設(shè)置、接種方法、病情分級和抗性評價(jià)的技術(shù)要求。本文件適用于小麥品種（系）對莖基腐病抗性的鑒定和評價(jià)。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB4404.1-2008糧食作物種子第1部分：禾谷類3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。3.1接種體通過人工制備能夠侵染寄主并引起相應(yīng)病害的病原體。3.2抗性評價(jià)根據(jù)采用的技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)判別寄主植物對特定病害反應(yīng)程度和抵抗水平的定性描述。4病原物接種體制備4.1接種菌株的分離從發(fā)病小麥莖基部典型病斑上以常規(guī)組織分離法分離莖基腐病原物。分離物經(jīng)單孢分離純化、形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)鑒定確認(rèn)為假禾谷鐮孢（Fusariumpseudograminearum）后，經(jīng)致病性測定，篩選強(qiáng)致病力菌株轉(zhuǎn)至PDA培養(yǎng)基斜面，保存于4℃冰箱。4.2孢子液制備將假禾谷鐮孢強(qiáng)致病力菌株從冰箱取出活化，轉(zhuǎn)接于裝有6%綠豆湯培養(yǎng)液的三角瓶中，在25℃和200rpm下震蕩培養(yǎng)3d后進(jìn)行鏡檢，確認(rèn)大量產(chǎn)生分生孢子后，配制孢子液。在顯微鏡下用血球計(jì)數(shù)板測定培養(yǎng)液中分生孢子的濃度，用無菌水將其稀釋至1.0×105個(gè)·mL-1。若暫時(shí)不用，可將孢子液置于4℃冰箱中臨時(shí)保存5d~6d。4.3接種體制備將小米粒按50g/瓶分裝至250mL三角瓶中滅菌，滅菌后每瓶加10mL上述孢子液，用無菌棒攪拌均勻后，于25℃下靜置培養(yǎng)7d~10d，直至菌絲充分生長并將小米粒粘結(jié)成塊。用玻璃棒將粘結(jié)成塊的小米粒搗散，倒于托盤上并進(jìn)一步捏碎，用紗布覆蓋，置于陰涼通風(fēng)處1d，期間數(shù)次翻動(dòng)以使小米粒干燥程度一致。將接種病原菌的小米粒過篩以去除粘結(jié)的菌絲塊，然后將小米粒與蛭石按1∶3的重量比混勻，制成接種體。接種體可裝入保鮮袋中置于4℃冰箱中短期保存（不超過7d）。5抗性鑒定圃設(shè)置5.1鑒定圃選址鑒定圃設(shè)置在小麥莖基腐病適發(fā)區(qū)，選擇具備良好的自然發(fā)病環(huán)境和灌溉條件、地勢平坦、土壤肥力中等偏上、地力均勻的地塊。5.2鑒定對照品種選擇感病對照品種矮抗58。5.3種植管理播種時(shí)間、土壤肥力水平和耕作管理與當(dāng)?shù)卮筇锷a(chǎn)一致。同一重復(fù)內(nèi)鑒定材料播種、施肥、灌溉等農(nóng)事操作必須在同一天完成。鑒定圃內(nèi)不施用任何殺菌劑。鑒定小麥種子符合GB4404.1-2008標(biāo)準(zhǔn)，每份鑒定材料種植2次重復(fù)，每重復(fù)每份材料（50粒種子）種植1行，每50份鑒定材料設(shè)1組感病對照品種材料。5.4接種方法接種前按以下要求整地：鑒定圃內(nèi)開播種行，行長100cm，深10cm，行距25cm。將每品種（系）待鑒定的50粒小麥種子均勻撒入行內(nèi)，用經(jīng)10目過篩的細(xì)土顆粒覆蓋種子，覆蓋厚度約為0.5cm。再將10g接種體均勻撒入每個(gè)行內(nèi)，用每行同側(cè)的土壤將接種體覆蓋。6病情調(diào)查6.1調(diào)查方法于小麥灌漿后期進(jìn)行1次調(diào)查，每行調(diào)查50個(gè)單莖。6.2病情分級田間病情調(diào)查重點(diǎn)部位為小麥基部莖稈，其嚴(yán)重度分級及對應(yīng)的癥狀如表1：表1人工病圃鑒定小麥莖基腐病嚴(yán)重度級別劃分及癥狀描述嚴(yán)重度分級癥狀描述0無可見發(fā)病癥狀1莖基部輕微變褐，但第一莖節(jié)無癥狀2地上部第一莖節(jié)變褐色3地上部第二莖節(jié)變褐色4地上部超過第二莖節(jié)變褐色，但未出現(xiàn)白穗5地上部超過第二莖節(jié)變褐色，產(chǎn)生白穗，或因發(fā)病未抽穗或整株死亡6.3病情指數(shù)計(jì)算病情指數(shù)計(jì)算公式：DI=其中，DI為病情指數(shù)，i為病級數(shù)（0~n），Xi為i級的單元數(shù)，Si為i級嚴(yán)重度的代表值，Smax為嚴(yán)重度最高級值，∑為累加符號，從０級（無病單位）開始累加。7抗性評價(jià)7.1抗性評價(jià)當(dāng)鑒定圃內(nèi)的感病對照材料（矮抗58）達(dá)到中感或感病時(shí)，則該批次抗莖基腐病鑒定視為有效，見表2：表2人工病圃鑒定小麥對莖基腐病抗性評價(jià)抗性評價(jià)病情指數(shù)免疫（I）0抗病（R）0<DI≤20中抗（MR）20<DI≤40中感（MS）40<DI≤60感病（S）DI>607.2重復(fù)鑒定同一品種重復(fù)鑒定兩年，每年設(shè)計(jì)2次重復(fù)。當(dāng)年的抗性鑒定結(jié)果以該鑒定材料2次重復(fù)鑒定中病情指數(shù)較高的為準(zhǔn)。根據(jù)兩年抗性鑒定結(jié)果對鑒定材料進(jìn)行抗病性評價(jià)，抗性評價(jià)以最高病情指數(shù)對應(yīng)的抗性程度為準(zhǔn)。8鑒定記載表格小麥抗莖基腐病鑒定結(jié)果記載表格見附錄B

附錄A（資料性）小麥莖基腐病菌的基本信息A.1病原菌小麥莖基腐病（FusariumCrownRot）是一種由多種鐮孢菌引起的土傳病害，在江蘇省采集的表現(xiàn)莖基腐病癥狀的小麥病株上能分離到假禾谷鐮孢（Fusariumpseudograminearum）、禾谷鐮孢（F.graminearum）和亞洲鐮孢（F.asiaticum）三種鐮孢菌，但其中的優(yōu)勢菌為假禾谷鐮孢。假禾谷鐮孢（F.pseudograminearum）是1999年從禾谷鐮孢（F.graminearum）中獨(dú)立出來的一個(gè)新種。在不同的培養(yǎng)條件下，假禾谷鐮孢形成的菌落邊緣整齊或波浪狀，顏色通常為紅色、深紅色、紅褐色或白色，無氣味或微甜味。該菌在SNA上的菌絲寬度為1.5μm~9μm，分生孢子類型單一，通常呈鐮刀形至棒狀，有時(shí)略呈圓柱形，中間最寬，兩端均勻收縮和彎曲，具有明顯的弧形頂端和明顯的基部足細(xì)胞。2012年，河南省首次報(bào)道假禾谷鐮孢引起小麥莖基腐病，此后該病害在黃淮海麥區(qū)迅速擴(kuò)展、暴發(fā)成災(zāi)。小麥莖基腐病在江蘇省連云港、徐州、宿遷等旱茬麥區(qū)發(fā)生普遍，危害嚴(yán)重。

附錄B（規(guī)范性）表B.1小麥品種（系）抗莖基腐病鑒定結(jié)果記載表編號品種名稱來源重復(fù)病級及發(fā)病株數(shù)病情指數(shù)抗性評價(jià)0級1級2級3級4級5級