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DB34DB34/T2996—2017豬鏈球菌檢驗操作規程ProtocolofexaminationforStreptococcussuis安徽省質量技術監督局發布I1GB4789.28食品安全國家標準食品微生物學檢驗培SN/T2984檢驗檢疫動物病原微生物實3.4冰箱：2℃~10℃。）：24檢驗程序豬鏈球菌檢驗程序見圖1。檢樣檢樣顯微鏡檢查PCR血清型鑒定結果報告分離培養動物試驗生化反應5.1.3樣品均需采取低溫(4～8℃)保存和運輸常與細菌的種類及生長環境有關，固體培養物以雙球菌為多，少量呈3個～5個排列的短鏈，液體培劃線接種于血液瓊脂平板，36℃±1℃培養24h±2h,如菌落生長緩慢，可延長至48h±2h,使之形成單個菌落，以供鑒定用。3用經火焰滅菌并冷卻的接種環蘸取病料內部組織后劃線接種于血液瓊脂平板，于36℃±1℃培養24h±2h，如菌落生長緩慢，可延長至48h±2h后觀察。同時取病料做組織觸片，姬姆薩染色后鏡5.3.5在血液瓊脂平板和選擇性普通瓊5.5.2小鼠模型：將肺、腦、脾、肝、淋巴結磨碎，用滅菌生理鹽水制成1:5組的肉湯純培養物用于動物試驗。小鼠皮下注射組織懸液0.2m4個血清型。大多數致病性菌株為1～9血清型，其中豬鏈球菌2型為最常見和5培養基的配制將38～39g氯化鈉加入100mL蒸餾水中，充將A.3.1中各成分溶于蒸餾水中，加熱溶解6將A.4.1中THB培養基溶于蒸餾水中，加熱溶解，127PCR擴增儀、1.5mL離心管、0.2mLPCR反應管、水浴鍋、高2×PCRMasterMix、滅菌超純水、瓊脂糖、10mg/ML溴化乙錠（EB（10×LoadingBuffer）、相對分子質量MagdhGCAGCGTATTCTGTCAAACGCCATGGACAGATAAcps1IGGAATAAAGCGGAGTACAGCGTCCTGCACGGTATTcps2JCAAACGCAAGGAATTACGGTATCGAGTATCTAAAGAATGcps7HGGAAAGAGACACGTTGGTATCGGACACGTAAAGACTcps9HGGCTACATATAATGGAAGCCCCCGAAGTATCTGGG8DB34/T29檢測過程應同時做陽性和陰性空白對照。陽性對照模板為豬1、2、7、9型鏈球菌，陰性空白對照表B.2PCR反應條件檢測基因溫度/時間溫度/時間溫度/時間延伸溫度/時間數延伸溫度/時間575555流100A,電泳30min。用凝膠成像儀觀察、拍照、記錄電泳結果。豬鏈球菌的目的基因大小為688bp,1、2、7、9型目的基因大小分別為陽性對照擴增出目的基因條帶的大小，陰性空白對照孔未見有PCR擴增條帶，表明試驗成立，否則應重做。試驗成立，被檢樣品孔如發現有688、210、675、395、390bp大小的擴增條帶，則判定陽性(十),豬鏈球菌及1、2、7、9型PCR檢測結果電泳圖見圖B.1、圖B.2、圖B.3、圖B.4、圖B.5;被檢樣品孔如未發現有目的條帶大小的擴增條帶，則判為陰性(一)。9

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