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1/1sars冠狀病毒核衣殼蛋白對細胞色素氧化酶cyp450cyp4f3a酶活性影響的研究I摘要SARS冠狀病毒核衣殼蛋白對細胞色素氧化酶CYP450(CYP4F3A)酶活性影響的研究摘要核衣殼蛋白（N蛋白）是SARS冠狀病毒(SARS-CoV)的主要結構蛋白之一，與病毒RNA結合形成核衣殼，能夠誘導強烈的細胞免疫和體液免疫，在SARS的診斷和預防上具有重要的應用。

與其它冠狀病毒N蛋白不同，SARS-CoVN蛋白定位于細胞質，參與SARS冠狀病毒RNA合成的調控以及核衣殼的形成。

并且，SARS-CoVN蛋白能結合人親環素(hCypA)解離病毒核心，激活AP-1信號轉導途徑，從而干擾宿主細胞分裂，在生長因子缺乏的情況下誘導細胞凋亡。

前期工作發現N蛋白可能在SARS冠狀病毒感染過程中起重要作用。

為了研究SARS-CoVN蛋白參與炎癥反應的分子機理，以全長N蛋白為誘餌蛋白，利用酵母雙雜交篩選人胎肝cDNA文庫時，發現細胞色素P450（CYP4F3A）與SARS-CoVN蛋白相互作用。

CYP4F3A是炎癥反應過程中重要的調節蛋白，其相互作用很可能與SARS病毒的致病性相關。

本研究建立了CYP4F3A在體外的酶促反應體系及其動力學常數測定方法，并通過一系列離子交換層析、分子篩凝膠過濾層析、免疫沉淀、免疫印跡以及ELISA證明，SARS-CoVN蛋白與CYP4F3A結合可以抑制CYP4F3A的-羥化酶活性，從而抑制炎癥因子LTB4的降解。

N蛋白在體外抑制CYP4F3A的酶活，使其Km值從2.5mol/L變為10.2mol/L，而加入229EN蛋白后Km僅變化為4.82mol/L。

我們發現通過尾靜脈注射N蛋白在LPS誘導小鼠炎癥模型中起促進炎癥反應的作用。

Silybin是從植物水飛薊中提取的黃酮類化合物，具有抑制5-酯氧酶的作用，從而間接阻斷了LTB4的合成。

當在LPS注射前1h給予藥物Silybin，LTB4濃度比未給藥組低。

說明Silybin可以通過阻斷炎癥介質的生成來保護LPS誘導產生的急性肺損傷。

并且，當肌肉注射表達N蛋白的質粒并腹腔注射LPS的小鼠血清中LTB4水平與對照組相比升高。

將質粒與MDP-C（胞壁IISARS冠狀病毒核衣殼蛋白對細胞色素P450(CYP4F3A)酶活性影響的研究肽佐劑）一起通過靜脈免疫家兔，動物產生顯著的過敏樣反應。

小鼠和家兔肺部及腸道中性粒細胞浸潤，部分動物表現為肺水腫，這些癥狀與SARS臨床表現類似。

本研究為SARS致病機理的進一步研究提供了重要線索。

關鍵詞：

SARS-CoVN蛋白；CYP4F3A；LTB4；Cyp4f18；HCoV-229EN蛋白；酶促反應動力學；米氏常數；抑制常數；ELISA3ABSTRACTTheeffectsofSARS-CoVnucleocapsid

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