高效液相色譜法檢測四種磺胺類獸藥殘留HPLC檢測食品中的四種磺胺類獸藥磺胺類藥物

主要用于抗菌消炎，如磺胺嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺瞇、菌得清、新諾明等。近年來，磺胺類藥物在動物性食品中的殘留超標現象，在所有獸藥當中是最嚴重的。長期攝入含磺胺類藥物殘留的動物性食品后，藥物可不斷在體內蓄積。HPLC檢測食品中的四種磺胺類獸藥磺胺類藥物的毒性作用損害泌尿系統

磺胺類藥主要經腎臟排出，在尿中濃度較高，其溶解度又較低，尤其當尿液偏酸性時，可在腎盂、輸尿管或膀胱內析出結晶，產生刺激和阻塞，造成泌尿系統損傷，引起結晶尿、血尿、管型尿。

引起過敏反應抑制造血系統導致細菌產生抗藥性HPLC檢測食品中的四種磺胺類獸藥磺胺類藥物結構

磺胺類藥物的基本結構為對氨苯磺酰胺，簡稱磺胺的衍生物，具有芳氨基和磺酰胺基，多為兩性化合物。常用的磺胺類藥物的化學結構式：

HPLC檢測食品中的四種磺胺類獸藥磺胺類藥物的分子結構

HPLC檢測食品中的四種磺胺類獸藥磺胺類藥物在獸醫臨床上的應用

磺胺藥對大多數革蘭氏陽性和陰性細菌都有抑制作用，在食源性動物的飼養中，磺胺類藥物不僅作為獸藥被廣泛用于獸醫臨床對細菌感染性疾病的防治，有時也被用作飼料添加劑。磺胺藥的藥代動力學

磺胺藥主要在肝臟中代謝，常見的方式是在對位氨基處發生乙酰化，其次是羥基化作用。有的磺胺藥其乙酰代謝物的水溶性低，易在腎小管內析出結晶，而有些代謝物雖水溶性較高，但在酸性尿中也容易結晶析出，容易引起結晶尿和腎并發癥。HPLC檢測食品中的四種磺胺類獸藥磺胺類藥物對食品的污染使用過磺胺類藥物的動物，如果不遵守適當的休藥期，其肌肉組織、蛋和奶中就會被殘留的磺胺類藥物污染；短期大劑量或長期小劑量給藥，很容易造成磺胺類藥物在動物各組織中蓄積；當飼料或飲水被磺胺類藥物污染后，也可導致動物性食品中磺胺類藥物殘留量嚴重超標；很多研究表明豬肉及其制品中磺胺藥物超標現象時有發生，特別是致癌性的磺胺二甲基嘧啶殘留給人類的健康帶來了威脅。HPLC檢測食品中的四種磺胺類獸藥食品中磺胺類藥物的最高殘留限量英、美等國家對磺胺類藥物在肉類及乳品中的允許殘留量限制為100μg·kg-1；歐盟第675/92號令中規定了，在肉類及牛奶中磺胺的最大殘留總量不得超過100μg·kg-1；日本要求的最高殘留限量更嚴格，單個磺胺殘留限量為20μg·kg-1，最大殘留總量不得超過100μg·kg-1；我國對磺胺類藥物在肉類及乳品中的允許殘留量限制為100μg·kg-1。HPLC檢測食品中的四種磺胺類獸藥提取和凈化方法

磺胺類藥物不易溶于非極性溶劑，而在極性較大的溶劑中溶解性較好，一般常用乙睛、氯仿、二氯甲烷、丙酮、或乙酸乙酯提取。凈化方法主要有柱色譜，TLC，液液萃?。↙LE），固相萃取（SPE）和基質固相分散萃?。∕SPD）等。

HPLC檢測食品中的四種磺胺類獸藥磺胺類藥物的HPLC法色譜條件常采用反相硅膠柱對待測物進行分離，主要有C18，C8或者C4柱，有時也采用離子對色譜柱。流動相主要由乙睛-水，甲醇-水或者乙睛-甲醇-水按不同比例組成，也有文獻報道采用乙醇-水系統。在以上流動相系統中加入適量乙酸或者十二烷基磺酸鈉（SDS）常用于提高分離效率。HPLC檢測食品中的四種磺胺類獸藥目前常用磺胺類獸藥的檢測方法分光光度法氣相色譜法高效液相色譜法酶聯免疫吸附分析法高效液相色譜與質譜聯用分析法HPLC檢測食品中的四種磺胺類獸藥實驗目的了解檢測磺胺類獸藥殘留的方法，掌握高效液相色譜法檢測磺胺類獸藥殘留的方法；了解高效液相色譜法測定獸藥多殘留的方法；了解建立高效液相色譜法測定獸藥多殘留的方法步驟及需要測定的參數。HPLC檢測食品中的四種磺胺類獸藥磺胺類藥物在紫外區（波長一般在250-280nm）有吸收，可以選擇高效液相色譜（配紫外檢測器）對上述化合物進行分離，定性定量測定。

實驗原理HPLC檢測食品中的四種磺胺類獸藥

儀器：島津高效液相色譜分析儀配有UV100紫外檢測器隔膜真空抽濾器（津騰）超聲波清洗器電子天平SHB-Ⅲ循環水式多用真空泵GDYQ-701S樣品提取儀101-3型電熱鼓風干燥箱PHS-25PH計儀器與試劑HPLC檢測食品中的四種磺胺類獸藥磺胺噻唑純度99.9℅磺胺嘧啶純度99.9℅磺胺甲基嘧啶純度99.9℅磺胺二甲嘧啶純度99.9℅色譜純甲醇儀器與試劑HPLC檢測食品中的四種磺胺類獸藥溶液配制

標準樣品溶液配制準確稱取四種SAs藥物標準品10mg，置于10ml容量瓶中，用甲醇定容至刻度，配置成1mg/ml的標準儲備液?；旌蠘藴嗜芤簻蚀_稱取四種SAs的標準品10mg，共同置于25ml容量瓶中，用甲醇定容，配置成400mg/L的標準儲備液。

HPLC檢測食品中的四種磺胺類獸藥色譜柱：SymmetryCl8反相色譜柱(4．6×250mmi.d)檢測波長：270nm；流動相：甲醇：1%（ψ）乙酸

=25：75進樣量：20ul流動相流速:1ml/min色譜條件HPLC檢測食品中的四種磺胺類獸藥標準曲線的繪制

由四種樣品混合標準液400ppm,進行等度稀釋成質量濃度為8ppm、6ppm、4ppm、2ppm、1ppm、0.4ppm的標準系列，各取20ul由高效液相色譜儀進樣分析，據峰面積與相應質量濃度進行線性回歸，繪制標準曲線。HPLC檢測食品中的四種磺胺類獸藥定性實驗

將標準樣品的四種單品及混合樣品溶液分別進行稀釋至8ppm，并經HPLC進樣分析，根據四種單品各自出峰時間及混合樣品中四種單樣的出峰時間比較進行定性HPLC檢測食品中的四種磺胺類獸藥水樣經過0.45um膜過濾后直接進樣濃度計算樣品的測定其中：C——樣品中磺胺類獸藥的含量，mgL-1；A——標準曲線的斜率Y——測定樣品的峰面積；B——標準曲線的截距；m——稱取樣品的量，L。HPLC檢測食品中的四種磺胺類獸藥液相色譜柱的使用和維護注意事項

樣品的前處理最好使用流動相溶解樣品。使用預處理柱除去樣品中的強極性或與柱填料產生不可逆吸附的雜質。使用0.45μm的過濾膜過濾除去微粒雜質。避免壓力和溫度的急劇變化及任何機械震動．溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會影響柱內的填充狀況；柱壓突然升高或降低也會沖動柱內填料，因此在調節流速時應該緩慢進行，在閥進樣時，閥的轉動不能過緩。HPLC檢測食品中的四種磺胺類獸藥柱的使用和維護注意事項②應逐漸改變溶劑的組成，特別是反相色譜中，不應從有機溶劑直接改變為水，反之亦然．③一般說來色譜柱不能反沖，只有生產者指明該柱可以反沖時，才可以反沖除去柱頭的雜質，否則反沖會迅速降低柱效．HPLC檢測食品中的四種磺胺類獸藥柱的使用和維護注意事項④選擇使用適宜的流動相（尤其是pH），以避免固定相被破壞．有時可以連接一預柱，分析柱是鍵合硅膠，預柱為硅膠，可使流動相在進入分析柱之前預先被硅膠＂飽和＂，避免分析柱中的硅膠基質被溶解．⑤避免將基質復雜的樣品尤其是生物樣品直接注入柱內，需要對樣品進行預處理或者在進樣器和色譜柱之間連接一保護柱．保護柱一般是填有固定相的短柱．保護柱可以而且應該經常更換．HPLC檢測食品中的四種磺胺類獸藥柱的使用和維護注意事項⑥經常用強溶劑沖洗色譜柱，清除保留在柱內的雜質，在進行清洗時，對流路系統中流動相的置換應以相混溶的溶劑逐漸過渡，每種流動相的體積應是柱體積的20倍左右，常規分析需要50-75ｍL。HPLC檢測食品中的四種磺胺類獸藥柱的使用和維護注意事項正相硅膠柱以正已烷（或庚烷），二氯甲烷（或氯仿）和甲醇依次沖洗，然后再以相反順序依次沖洗，所有溶劑都必須嚴格脫水。反相柱以水、甲醇、乙腈、一氯甲烷（或氯仿）依次沖洗，再以相反順序依次沖洗。如果下一步分析用的流動相不含緩沖液，可以省略最后一步用水沖洗。陽離子交換柱可用稀酸緩沖液沖洗，陰離子交換柱可用稀堿緩沖液沖洗，除去交換性能強的鹽，然后用水、甲醇、水依次沖洗。HPLC檢測食品中的四種磺胺類獸藥柱的使用和維護注意事項⑦保存色譜柱時應將柱內充滿乙腈或甲醇，柱接