專題突破練12細胞工程和基因工程一、單項選擇題1.(2021山東濟南聯考)芥酸會降低菜籽油的品質。油菜有兩對獨立遺傳的等位基因(H和h,G和g)控制菜籽的芥酸含量。下圖是獲得低芥酸油菜新品種(HHGG)的技術路線,已知油菜單個花藥由花藥壁(2n)及大量花粉(n)等組分組成,這些組分的細胞都具有全能性。據圖分析,下列敘述錯誤的是()A.①②過程均需要植物激素來誘導細胞脫分化B.與④過程相比,③過程可能會產生二倍體再生植株C.圖中3種途徑中,利用花粉培養篩選低芥酸油菜新品種(HHGG)的效率最高D.F1植株的細胞進行減數分裂時,H基因所在的染色體會與G基因所在的染色體發生聯會2.(2021山東濟南針對性訓練)NRP1是人體血管內皮生長因子的受體,在腫瘤新生血管形成與腫瘤細胞遷移、黏附、侵襲等方面起重要調控作用。為探究NRP1MAb(NRP1的單克隆抗體)對乳腺癌的治療作用,研究人員以兔子為實驗材料進行了相關實驗,得到如下圖所示的結果。下列敘述錯誤的是()A.據圖推測,NRP1MAb能夠有效降低腫瘤的體積,中、高劑量抗體的降低效果比低劑量的更顯著B.NRP1MAb的制備過程中利用滅活病毒誘導兩細胞融合,其原理是利用了病毒表面的糖蛋白和相關酶能夠與細胞膜表面的糖蛋白發生作用C.反復給兔子注射NRP1,提取已免疫的B淋巴細胞與骨髓瘤細胞融合,再經選擇培養基篩選獲得的雜交瘤細胞都能產生NRP1MAbD.治療機理可能為NRP1MAb與NRP1特異性結合,阻止了NRP1與血管內皮生長因子的結合,從而抑制了腫瘤血管的生成以及腫瘤細胞的分散和轉移3.(2021山東濱州二模)細胞融合不僅在自然條件下常見,在現代生物技術中也經常應用。下圖表示細胞融合的簡要過程。下列說法正確的是()A.細胞融合過程都涉及細胞膜的流動性,常用聚乙二醇融合法、電融合法等進行處理B.若細胞a、b分別取自優良奶牛,則采集的卵母細胞和精子可直接體外受精C.若細胞a、b分別代表白菜、甘藍細胞,則完成融合的標志為細胞核的融合D.若細胞d是雜交瘤細胞,則在選擇培養基中篩選后即可大規模培養生產單克隆抗體4.(2021山東聊城二模)單克隆抗體可抑制病毒對宿主細胞的侵染。下列關于單克隆抗體制備的敘述,錯誤的是()A.為提高單克隆抗體制備的成功率,往往需要多次給實驗動物注射同一種抗原B.給實驗動物注射抗原后,相應抗體檢測呈陽性,說明發生了體液免疫C.單克隆抗體的制備過程中需用到PCR技術和抗原—抗體雜交技術D.動物體內存在很多種B淋巴細胞,每種B淋巴細胞只能產生一種抗體5.(2021山東日照二模)實踐表明,普通的單克隆抗體易被人體的免疫系統識別為異源蛋白質而被清除。為解決這一問題,科研工作者對人源單克隆抗體進行了研究,具體的操作過程如下:先用人的抗體基因取代小鼠的抗體基因,獲得轉基因小鼠;然后從接受抗原刺激的轉基因小鼠體內獲取B淋巴細胞,使這些B淋巴細胞與骨髓瘤細胞融合,經過篩選之后獲得雜交瘤細胞用于單克隆抗體的制備。下列敘述錯誤的是()A.獲取轉基因小鼠時,常用顯微注射法將目的基因導入小鼠受精卵B.B淋巴細胞與骨髓瘤細胞融合時,可以利用滅活病毒進行誘導C.對融合后獲得的雜交瘤細胞進行培養即可獲得大量的單克隆抗體D.人源單克隆抗體具有特異性強、靈敏度高、抗原性低等特點6.(2021山東泰安二模)細胞毒素可有效殺傷腫瘤細胞,但沒有特異性,在殺傷腫瘤細胞的同時還會對健康細胞造成傷害。抗體—藥物偶聯物(ADC)通過將細胞毒素與能特異性識別腫瘤抗原的單克隆抗體結合,實現了對腫瘤細胞的選擇性殺傷。ADC通常由抗體、接頭和藥物(如細胞毒素)三部分組成,它的作用機制如下圖所示。下列敘述正確的是()A.單克隆抗體制備過程中需要使用TaqDNA聚合酶B.ADC進入腫瘤細胞需要膜上載體蛋白的協助C.細胞毒素具有與腫瘤細胞膜上的糖蛋白發生特異性結合的能力D.溶酶體裂解導致其中的水解酶釋放,加速了腫瘤細胞凋亡7.(2021山東濟南聯考)材料11890年,Heape將2個4細胞時期的安哥拉兔胚胎移植到一只受精的比利時兔的輸卵管中,產下了4只比利時兔和2只安哥拉兔,這是第一次成功移植哺乳動物胚胎。材料2Dziuk等研究了利用促卵泡素進行超數排卵的方法,有報道指出,使用透明質酸作為稀釋劑注射1或2次促卵泡素的效果與用鹽水為稀釋劑多次注射促卵泡素的效果一致。下列有關敘述正確的是()A.胚胎工程是對早期胚胎細胞進行多種顯微操作和處理的技術B.比利時兔產下2種兔的生理學基礎是比利時兔已經受精形成自己的受精卵,安哥拉兔的胚胎可與比利時兔建立正常的生理和組織上的聯系,在比利時兔體內安哥拉兔的遺傳特性不受影響C.材料2中得到的眾多卵細胞一定需要體外培養D.從材料2中可得出超數排卵的數量只與稀釋劑的種類有關8.(2021山東青島三模)精子載體法(SMGT)是將精子適當處理,使其攜帶外源基因,通過人工授精、體外受精等途徑獲得轉基因動物的方法。該技術也是目前所報道的轉基因效率最高的方法之一。下圖是某研究所利用SMGT法獲得轉基因鼠的示意圖。下列相關敘述錯誤的是()A.完成過程①時需要將標記的外源基因與載體連接,以構建基因表達載體B.將外源基因整合到精子的染色體上,是保證外源基因穩定遺傳的關鍵C.過程②為受精作用,所需卵細胞應為初級卵母細胞D.進行過程④操作前,通常需要用一定的激素處理代孕母體9.(2021山東泰安二模)經研究發現,PVYCP基因位于某種環狀DNA分子中。將PVYCP基因導入馬鈴薯,使之表達即可獲得抗PVY病毒的馬鈴薯。下圖表示構建基因表達載體的過程,相關酶切位點如下表所示。下列說法錯誤的是()A.推測Klenow酶的功能與DNA聚合酶類似B.由步驟③獲取的目的基因有1個黏性末端C.步驟④應選用的限制酶是BamHⅠ和SmaⅠD.NPTⅡ基因可能是用于篩選的標記基因10.(2021山東煙臺一模)研究人員通過基因工程技術將T細胞激活,并裝上定位導航裝置CAR(腫瘤嵌合抗原受體),改造成CART細胞。它能專門識別體內腫瘤細胞,并通過免疫作用釋放多種效應因子,高效地殺滅腫瘤細胞。下列說法錯誤的是()A.CART細胞免疫療法需要從腫瘤患者血液中分離出T細胞并純化B.改造T細胞時可利用病毒載體把CAR基因導入T細胞C.擴增培養CART細胞時,培養液中需要通入純凈的O2D.CART細胞經體外擴增后需通過靜脈回輸到患者體內,該免疫療法屬于體外基因治療11.(2021山東聯考)PC1基因表達能誘導正常鼠成纖維細胞的惡性轉化。在PC1分子N端(氨基端)有46個氨基酸組成的特異序列,這是許多轉錄因子激活靶基因轉錄所具有的共同序列特征;在哺乳動物細胞中驗證了PC1的轉錄激活作用,通過缺失突變的基因改造,發現該作用存在于該分子N端的46個氨基酸組成的特異序列區域,說明PC1全長分子極大部分的特異功能均由N端的此區域表達,為制備特異性更高的抗PC146單克隆抗體提供了依據。下列說法正確的是()A.PC1分子通過激活靶基因轉錄誘導鼠成纖維細胞的惡性轉化B.擴增PC1基因只需用此特異性序列所對應的核苷酸序列作引物C.用哺乳動物細胞轉基因的方法驗證PC1的轉錄激活作用時,必須用受精卵作受體細胞D.可將PC1基因導入骨髓瘤細胞制備抗PC146單克隆抗體12.(2021山東濱州一模)構建基因表達載體時,可利用堿性磷酸單酯酶催化載體的5'P變成5'OH,如下圖所示。將經過該酶處理的載體與外源DNA連接時,由于5'OH與3'OH不能連接而形成切口(nick)。下列說法錯誤的是()A.經堿性磷酸單酯酶處理的載體不會發生自身環化B.外源DNA也必須用堿性磷酸單酯酶處理C.T4DNA連接酶可連接黏性末端和平末端D.重組DNA經過2次復制可得到不含nick的子代DNA二、不定項選擇題13.(2021山東臨沂二模)為了檢測藥物X、Y和Z的抗癌效果,在細胞培養板的每個孔中加入相同數量的肺癌細胞,使其貼壁生長。實驗組分別加入等體積相同濃度的溶于二甲基亞砜(溶劑)的藥物X、Y或Z,培養過程及結果如下圖所示。下列敘述正確的是()A.細胞培養液中通常需要加入一定量的抗生素防止病毒污染B.計數時用胃蛋白酶處理貼壁細胞,使肺癌細胞脫落下來C.對照組中應加入等體積的二甲基亞砜溶劑排除體積和溶劑等無關變量的影響D.根據實驗結果,藥物X的抗癌效果比藥物Y好,藥物Z沒有抗癌作用14.(2021山東濟寧二模)下圖是我國科學家制備小鼠孤雄單倍體胚胎干細胞的相關研究流程,其中Oct4基因在維持胚胎干細胞全能性和自我更新中發揮極其重要的作用。下列敘述正確的是()A.受精卵發育過程中桑葚胚前的細胞都是全能性細胞B.推測Oct4基因的表達有利于延緩衰老C.過程③胚胎干細胞細胞核大,核仁明顯D.從卵巢中獲取的卵母細胞可直接用于過程①15.(2021山東德州二模)戊型肝炎病毒是一種RNA病毒,其基因組中ORF2基因編碼的pORF2蛋白是戊型肝炎病毒的表面抗原。我國科研人員利用基因工程,將編碼pORF2的基因導入大腸桿菌細胞,最終從大腸桿菌中提取pORF2蛋白并制成疫苗。下列分析正確的是()A.利用特定引物對病毒RNA進行PCR擴增即可獲得目的基因B.戊型肝炎病毒與大腸桿菌的遺傳物質相同,所以能實現基因重組C.構建基因表達載體時,需將編碼pORF2的基因與啟動子連接D.利用該方法獲得的疫苗不會誘發細胞免疫但可以產生記憶細胞三、非選擇題16.(2021山東泰安三模)子宮內膜異位癥患者常伴有不孕癥狀,患者腹腔液中含有較高濃度的白細胞介素(IL)。為探明腹腔液中存在的IL對生殖活動的影響,科研人員利用重組人IL1β、IL5、IL6對小鼠體外受精及胚胎早期發育的影響進行了研究。回答下列問題。(1)實驗過程中,需要從雌性小鼠體內獲得多枚卵母細胞,一般可采取的方法是。用電刺激法刺激雄性小鼠的射精中樞獲得精子,經處理后,將精子與成熟的卵母細胞在HTF基礎培養液中混合培養,完成受精。為了培養的細胞能正常生長繁殖,需要保持培養液的環境。

(2)將處理后的精子和卵細胞置于HTF基礎培養液中進行不同處理,培養適宜時間后,觀察受精情況,得到的實驗結果如下圖所示。實驗組的處理方法是。培養后取培養液用顯微鏡觀察,若觀察到,則卵細胞已完成受精。分析實驗結果,可得出的結論是。

(3)若要研究IL對小鼠胚胎早期發育的影響,則需要利用上述培養液,繼續觀察統計。

17.(2021山東濟南聯考)下圖是利用工程菌(大腸桿菌)生產人生長激素的實驗流程。所用的pBR322質粒含有限制酶PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ的切割位點各一個,且3種酶切割形成的末端各不相同,而AmpR表示氨芐青霉素抗性基因,TetR表示四環素抗性基因。請回答下列相關問題。(1)目的基因主要是指編碼蛋白質的基因,也可以是一些具有的因子。①過程所用到的組織細胞是,過程③的目的是,過程⑤常用處理大腸桿菌細胞。

(2)如果用限制酶PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ對圖中質粒進行切割,形成的DNA片段種類有種,這些種類的DNA片段中含有完整氨芐青霉素抗性基因的DNA片段和四環素抗性基因的DNA片段分別有種和種。

(3)如果只用限制酶PstⅠ切割目的基因和質粒,完成過程④⑤后(受體大腸桿菌不含AmpR、TetR),將錐形瓶內的大腸桿菌先接種到甲培養基上,形成菌落后用無菌牙簽挑取培養基甲上的單個菌落,分別接種到乙和丙兩個培養基的相同位置上,一段時間后,菌落的生長狀況如上圖中乙、丙所示。接種到甲培養基上的目的是篩選的大腸桿菌;接種到乙培養基上的大腸桿菌菌落,能存活的大腸桿菌體內導入的是。含有目的基因的大腸桿菌在乙和丙兩個培養基上的生存情況是。

18.(2021山東濰坊二模)DBN9936是國內首批獲得農業轉基因生物安全證書的玉米品種,對危害玉米的玉米螟等主要鱗翅目害蟲具有良好的抗性,同時能耐受較高濃度的草甘膦(除草劑的有效成分)。其基因操作的受體是玉米品種DBN318,目的基因cry1Ab來源于蘇云金桿菌,其表達產物能夠專一有效地抑制玉米螟、棉鈴蟲及黏蟲等玉米鱗翅目害蟲;目的基因epsps來源于土壤農桿菌,其表達產物使轉化體可耐受草甘膦除草劑。同樣獲批安全證書的國產轉基因玉米品種DBN9858耐除草劑,但不抗蟲,可作為DBN9936的庇護材料使用。回答下列問題。(1)DBN9936的轉化過程之一是將含有epsps基因表達載體的與玉米DBN318幼胚經過程形成的愈傷組織共同培養,該過程需在培養基中添加酚類化合物,且在無菌、(填“黑暗”或“光照”)的環境中進行。

(2)利用PCR技術,可以鑒定共同培養后的愈傷組織中是否含有基因epsps。epsps基因的部分序列如下所示。5'——ATGGCT……AGGAAC——3'3'——TACCGA……TCCTTG——5'根據上述序列應制備引物(填序列)對基因epsps進行PCR,鑒定后得到的轉基因愈傷組織經過程獲得DBN9936幼苗。幼苗移栽至大田前還需“煉苗”,“煉苗”時需逐漸降低濕度、(填“增加”或“降低”)光照強度。

(3)DBN9858和DBN9936兩個玉米品種混合種植,更有利于生態可持續發展。請從生物進化的角度闡釋兩個品種混合種植的優點:

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(4)玉米為異花傳粉,花粉飄散的距離很遠,容易造成基因漂移,有同學提出將DBN9936的目的基因cry1Ab整合到玉米受體細胞的葉綠體基因組中。你同意該同學的觀點嗎?請說明理由。

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19.(2021山東棗莊模擬)CEA癌胚抗原是在1965年首先從結腸癌和胚胎組織中提取出的一種腫瘤相關抗原,是一種酸性糖蛋白。常用CEA抗體檢測血清中的CEA含量,進行相關疾病的臨床診斷。下圖是CEA單克隆抗體的制備流程示意圖。請據圖回答下列問題。(1)①表示從cDNA文庫中擴增獲取大量目的基因的過程,那么A和人體內的CEA基因的結構上的區別是。制備重組質粒過程時,為確保目的基因與質粒準確連接,應采用圖示中的酶的切割位點。過程②常用法。

(2)誘導融合成為雜交瘤細胞時,常用的方法有(答出三點即可)。細胞培養過程中需要的氣體條件是

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(3)③表示過程,獲得的C細胞的特點是。

(4)應用獲得的單克隆抗體搭載抗癌藥物制成“生物導彈”治療癌癥,具有的優點是

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專題突破練12細胞工程和基因工程1.D解析:由題意可知,①②過程均為脫分化,都需要植物激素(生長素和細胞分裂素)的誘導,A項正確。單個花藥由花藥壁(2n)及大量花粉(n)等組分組成,因此③過程可能產生二倍體再生植株,而④過程只能產生單倍體植株,B項正確。題圖3種途徑中,利用花粉培養篩選低芥酸油菜新品種(HHGG)的周期短,得到低芥酸油菜新品種(HHGG)的概率高,C項正確。減數分裂時,發生聯會的染色體是同源染色體,而H基因所在的染色體與G基因所在的染色體為非同源染色體,不會發生聯會,D項錯誤。2.C解析:由題圖可知,NRP1MAb能夠有效降低腫瘤的體積,中、高劑量抗體的降低效果比低劑量的更顯著,A項正確。滅活病毒誘導細胞融合的原理是病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能夠與細胞膜上的糖蛋白發生作用,使細胞互相凝集,細胞膜上的蛋白質分子和脂質分子重新排布,細胞膜打開,細胞發生融合,B項正確。經過選擇培養基篩選的雜交瘤細胞并不能產生單一的抗體,還需要進行克隆化培養和抗體陽性檢測,最終篩選出只能產生NRP1MAb的雜交瘤細胞,C項錯誤。由題干可知,NRP1MAb可能與NRP1特異性結合,阻止NRP1與血管內皮生長因子的結合,從而抑制了腫瘤血管的生成以及腫瘤細胞的分散和轉移,D項正確。3.A解析:利用細胞膜具有流動性的結構特點,使用電融合法、PEG融合法等方法都能誘導細胞融合,A項正確。精子獲能后才能與培養成熟的卵母細胞融合,完成受精作用,B項錯誤。植物細胞融合完成的標志是再生出新的細胞壁,C項錯誤。單克隆抗體的制備過程中需要進行兩次篩選,第一次選擇培養基篩選得到的是雜交瘤細胞,第二次單孔培養基篩選才能得到產生單一抗體的雜交瘤細胞,D項錯誤。4.C解析:為提高單克隆抗體制備的成功率,往往需要多次給實驗動物注射同一種抗原,使其產生更多的B淋巴細胞,A項正確。抗體是體液免疫中B淋巴細胞產生的,給實驗動物注射抗原后,相應抗體檢測呈陽性,說明發生了體液免疫,B項正確。基因工程中需用到PCR技術和抗原—抗體雜交技術,單克隆抗體的制備中沒有用到PCR技術,C項錯誤。每種成熟的B淋巴細胞表面只有一種抗原受體,只能識別一種抗原,因此每種B淋巴細胞只能產生一種抗體,D項正確。5.C解析:在動物轉基因技術中,常采用顯微注射法將目的基因導入動物的受精卵,A項正確。常用滅活病毒誘導動物細胞融合,其原理是病毒表面的糖蛋白和一些酶能夠與細胞膜上的糖蛋白發生作用,使細胞相互凝聚,細胞膜上的蛋白質分子和脂質分子重新排布,細胞膜打開,細胞發生融合,B項正確。用特定的選擇培養基培養之后,篩選得到的雜交瘤細胞需經過克隆化培養和抗體檢測,多次篩選才能獲得分泌單一抗體的雜交瘤細胞,C項錯誤。經過轉基因技術改造小鼠之后,獲得的抗體是由人的抗體基因編碼的,所以稱為人源單克隆抗體,能夠有效解決鼠源單克隆抗體被人體識別為異源蛋白質的問題,即具有特異性強、靈敏度高、抗原性低等特點,D項正確。6.D解析:PCR過程中要用到TaqDNA聚合酶,單克隆抗體制備過程包括細胞融合和細胞培養,該過程中不需要使用TaqDNA聚合酶,A項錯誤。ADC進入腫瘤細胞是通過胞吞的方式,不需要膜上載體蛋白的協助,B項錯誤。細胞毒素殺傷腫瘤細胞沒有特異性,能與腫瘤細胞膜上的糖蛋白發生特異性結合的是抗體,C項錯誤。溶酶體裂解使其中的蛋白酶等多種水解酶釋放出來,破壞細胞結構,加速腫瘤細胞凋亡,D項正確。7.B解析:胚胎工程是指對生殖細胞、受精卵或早期胚胎細胞進行多種顯微操作和處理,然后將獲得的胚胎移植到雌性動物體內生產后代,以滿足人類的各種需求,A項錯誤。由材料1可知,比利時兔已經受精形成自己的受精卵,安哥拉兔的胚胎可與比利時兔建立正常的生理和組織上的聯系,在比利時兔體內安哥拉兔的遺傳特性不受影響,因而比利時兔能產下2種兔,B項正確。若從輸卵管中沖出卵細胞則無需體外培養,若是從卵巢中獲得卵母細胞需體外培養至減數分裂Ⅱ中期,因此材料2中得到的眾多卵細胞不一定需要體外培養,C項錯誤。由材料2可知,超數排卵的數量與稀釋劑的種類和注射的次數有關,D項錯誤。8.C解析:完成過程①時需要將標記的外源基因與載體連接,以構建基因表達載體,然后將基因表達載體通過顯微注射的方法導入受體細胞中,A項正確。將外源基因整合到精子的染色體上,使外源基因可以隨精子染色體的復制而復制,是保證外源基因穩定遺傳的關鍵,B項正確。過程②為受精作用,卵細胞應培養至MⅡ期才能進行受精,此時為次級卵母細胞,C項錯誤。進行過程④胚胎移植操作前,通常需要用一定的激素對代孕母體進行同期發情處理,D項正確。9.C解析:由題圖可知,步驟②中用Klenow酶處理后,黏性末端變成平末端,說明Klenow酶能催化DNA鏈的合成,從而將DNA片段的黏性末端變成平末端,故Klenow酶的功能與DNA聚合酶類似,A項正確。經過步驟③后,目的基因(PVYCP)的一側是BamHⅠ切割形成的黏性末端,目的基因(PVYCP)的另一側是平末端,B項正確。由于目的基因只有一個黏性末端,質粒是順時針轉錄,使用BamHⅠ切割會導致目的基因無法轉錄,需選擇一種黏性末端相同的限制酶,另一種選擇平末端限制酶,故步驟④中選用的限制酶是BglⅡ和SmaⅠ,C項錯誤。NPTⅡ基因可能是用于篩選的標記基因,D項正確。10.C解析:由題意可知,CART細胞免疫療法需要從腫瘤患者血液中分離出T細胞并純化,A項正確。將目的基因導入受體細胞,可以先將CAR基因整合到逆轉錄病毒載體中,再利用病毒的侵染性導入并將CAR基因整合到T細胞的染色體DNA上,B項正確。在培養動物細胞(如CART細胞)時,培養液中需要通入CO2,作用是維持pH的穩定,C項錯誤。將一個含有能識別腫瘤細胞且激活T細胞的嵌合抗原受體的病毒載體轉入T細胞,把T細胞改造成CART細胞,這屬于基因工程技術;故CART細胞經體外擴增后需通過靜脈回輸到患者體內,該免疫療法屬于體外基因治療,D項正確。11.A解析:PC1分子具有激活靶基因轉錄的共同序列特征,可誘導正常鼠成纖維細胞的惡性轉化,A項正確。目的基因的全序列或其兩側的序列,可以通過合成一對與模板DNA互補的引物,從而十分有效地擴增出含目的基因的DNA片段,故擴增PC1基因不能只用此特異性序列所對應的核苷酸序列作引物,B項錯誤。用哺乳動物細胞轉基因的方法驗證PC1的轉錄激活作用時,應用成纖維細胞作受體細胞,C項錯誤。抗體是B淋巴細胞產生的,只有骨髓瘤細胞不能產生抗體,且PC1基因表達出來的是抗原,D項錯誤。12.B解析:將經過該酶處理的載體與外源DNA連接時,由于5'OH與3'OH不能連接而形成切口(nick),因此經堿性磷酸單酯酶處理的載體不會發生自身環化,A項正確。外源DNA不能用堿性磷酸單酯酶處理,如用堿性磷酸單酯酶處理,載體與外源DNA連接不能連接形成重組DNA,B項錯誤。DNA連接酶可以連接DNA鏈的3'OH末端和另一條DNA鏈的5'P末端,使二者形成磷酸二酯鍵,從而使相鄰的DNA片段相連,T4DNA連接酶可連接黏性末端和平末端,C項正確。DNA的復制方式是半保留復制,重組DNA經過2次復制,可得到2個不含nick的子代DNA,D項正確。13.CD解析:抗生素具有殺菌作用,為防止培養液被細菌污染,可在培養液中加入一定量的抗生素,但其不能殺滅病毒,A項錯誤。要使貼壁細胞從瓶壁上分離下來,需要用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理,B項錯誤。加入等體積的二甲基亞砜溶劑作為空白對照,排除體積和溶劑等無關變量的影響,C項正確。由題表可知,加入藥物X的癌細胞個數是6.7×104個,加入藥物Y的癌細胞個數是5.3×105個,說明藥物X的抗癌效果比藥物Y好,加入藥物Z的癌細胞個數是8.0×106個,與空白對照相比無抗癌作用,D項正確。14.ABC解析:由于桑葚胚期的細胞沒有出現分化,桑葚胚前的細胞都具有發育成完整胚胎的潛能,是全能性細胞,A項正確。由題干可知,Oct4基因在維持胚胎干細胞全能性和自我更新中發揮極其重要的作用,可推測Oct4基因的表達有利于延緩衰老,B項正確。過程③胚胎干細胞具有胚胎細胞的特性,體積較小,細胞核大,核仁明顯,C項正確。卵巢中取出來的是未成熟的卵細胞,要培養到減數分裂Ⅱ中期才能受精,不能直接用于過程①,D項錯誤。15.CD解析:需先將病毒的RNA逆轉錄成DNA,再根據DNA序列設計出特異性的引物進行PCR擴增目的基因,A項錯誤。戊型肝炎病毒的遺傳物質是RNA,大腸桿菌的遺傳物質是DNA,B項錯誤。基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子、標記基因等,要使目的基因在受體細胞中特異性表達,在構建基因表達載體時,需將目的基因ORF2與啟動子等調控組件重組在一起,C項正確。該蛋白疫苗不會侵染細胞,不產生細胞免疫,但疫苗屬于抗原,會刺激機體產生體液免疫,可以產生記憶細胞(記憶B細胞),D項正確。16.答案(1)向多只雌性小鼠體內注射一定量的促性腺激素,從輸卵管中沖出多枚卵母細胞獲能無菌、無毒(2)向每組HTF基礎培養液中按比例分別添加IL1β、IL5、IL6中的一種,控制IL的質量濃度分別為0.05ng/mL、0.5ng/mL、5ng/mL、30ng/mL兩個極體或者雌、雄原核IL能抑制小鼠的受精,且隨質量濃度的升高,抑制作用增強(3)不同發育時期胚胎的發育情況(成活率)解析:(1)促性腺激素能促進超數排卵,獲得更多的卵母細胞,實驗過程中,需要從雌性小鼠體內獲得多枚卵母細胞,具體方法是向多只雌性小鼠體內注射一定量的促性腺激素,從輸卵管中沖出多枚卵母細胞。精子經獲能處理后才能受精。為了培養的細胞能正常生長繁殖,需要保持培養液無菌、無毒的環境。(2)對照組在培養液中不添加IL,實驗組的處理方法是向每組HTF基礎培養液中按比例分別添加IL1β、IL5、IL6中的一種,控制IL的質量濃度分別為0.05ng/mL、0.5ng/mL、5ng/mL、30ng/mL。培養后取培養液用顯微鏡觀察,若觀察到兩個極體或者雌、雄原核,則卵細胞已完成受精。分析實驗結果,與對照組相比,可得出的結論是IL能抑制小鼠的受精,且隨質量濃度的升高,抑制作用增強。(3)若要研究IL對小鼠胚胎早期發育的影響,則需要利用上述培養液,繼續觀察統計不同發育時期胚胎的發育情況(成活率)。17.答案(1)調控作用人垂體組織細胞將平末端處理為黏性末端Ca2+(2)933(3)含四環素抗性基因完整的pBR322質粒(或含有AmpR、TetR的質粒)在丙中能存活,在乙中不能存活解析:(1)目的基因主要是指編碼蛋白質的基因,也可以是一些具有調控作用的因子,垂體產生生長激素,過程①所用到的組織細胞是人垂體組織細胞。過程③表示獲取人生長激素基因,需要用限制酶切割,將平末端處理為黏性末端。過程⑤將基因表達載體導入大腸桿菌,常用Ca2+處理大腸桿菌細胞,使細胞處于一種能吸收周圍環境中DNA分子的生理狀態。(2)假設PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ3種酶的切割位點分別用1、2、3表示。一種酶分別酶切時,一共可以得到3種片段1→1、2→2、3→3;任意2種酶分別同時酶切時,可得到1→2、2→1、2→3、3→2、1→3、3→1共6種片段;3種酶同時酶切時,可得到1→2、2→3、3→1共3種片段。綜上所述,共計9種不同的片段(1→1、1→2、1→3、2→1、2→2、2→3、3→1、3→2、3→3)。其中片段3→2、2→2、3→3共3種含有完整氨芐青霉素抗性基因,片段2→1、2→2、1→1共3種含有完整四環素抗性基因。(3)用限制酶PstⅠ切割目的基因和質粒,會破壞AmpR(氨芐青霉素抗性基因),但TetR(四環素抗性基因)沒有被破壞。在甲培養基