近年來，隨著人們生活水平的顯著提高和消費需求的不斷變化，牛肉已成為僅次于豬肉的第二大肉類消費品，人均消費量由2016年的1.8kg增加到2021年的4.2kg，肉牛產業進入了前所未有的超長景氣期。云南省以肉牛“一縣一業”示范創建為切入點和有力抓手，大力推動肉牛產業高質量發展，致力打造中國南方重要的肉牛生產基地和高端肉牛供應基地。而動物疫病防控作為防范畜牧業發展風險的第一道防線和確保綠色畜產品質量安全的關鍵環節，對綠色食品產業健康發展發揮著重要作用。在肉牛生產過程中，不僅要認真抓好牛口蹄疫、牛結節性皮膚病等重大疫病防控，牛傳染性鼻氣管炎和牛病毒性腹瀉等肉牛主要病毒性傳染病對肉牛生產的危害也不容忽視，更需做好日常防控。通過查閱文獻資料，很多學者在國內開展牛傳染性鼻氣管炎和牛病毒性腹瀉流行病學調查結果發現，不同地區、不同養殖模式和不同養殖規模下，牛群牛傳染性鼻氣管炎病毒V和牛病毒性腹瀉病毒感染情況存在一定差異，且隨著養牛產業的不斷發展，呈現出逐年波動上升的趨勢。2010—2019年期間，牛傳染性鼻氣管炎病毒平均感染率從31.12%升高至41.80%，其中2016年高達58.29%，且感染陽性牛只主要集中在屠宰場、牧場和規模場，交易市場和散養戶陽性率較低，僅為22.88%和19.70%。奶牛感染陽性率明顯高于肉牛，寧夏作為奶牛主要養殖區，牛傳染性鼻氣管炎病毒平均抗體陽性率已達85.1%。相對于牛傳染性鼻氣管炎病毒，牛群的牛病毒性腹瀉病毒感染率水平相對較高，內蒙古、山東、甘肅牛病毒性腹瀉病毒抗體陽性率分別為88.9%、65%、56.36%。李天增等調查了全國98家牧場（養殖場）的血清抗體，結果牛病毒性腹瀉病毒抗體陽性牛場占比99.47%。牛傳染性鼻氣管炎和牛病毒性腹瀉儼然已成為影響我國肉牛產業健康發展的重要傳染病。牛傳染性鼻氣管炎和牛病毒性腹瀉是嚴重影響養牛業生產安全的重要傳染病。牛傳染性鼻氣管炎又稱“壞死性鼻炎”或“紅鼻病”，是由牛皰疹病毒Ⅰ型引起的以高熱、咳嗽、呼吸困難等為常見癥狀的一種接觸性傳染病，60日齡以內的犢牛最易感，臨床癥狀復雜多樣，具體可細分為呼吸道型、生殖系統型、流產型、腦膜炎型、眼結膜炎型四種類型。牛病毒性腹瀉是由牛病毒性腹瀉病毒引起的以發熱、黏膜糜爛、壞死、腹瀉等為主要特征的一種急性、熱性傳染病，多種動物均易感。牛傳染性鼻氣管炎和牛病毒性腹瀉具有很多相似之處，牛只一旦感染，將終身攜帶病毒并長期排毒，還常引起免疫抑制而形成多種細菌和病毒的繼發感染，有些感染牛只常常不表現臨床癥狀，呈隱形帶毒，在實際生產中很難被發現，這也造成了這兩種病防控難度較大的局面。這兩種病毒已廣泛分布于世界各地，我國學者最早于1980年在新西蘭進口的奶牛中分離牛傳染性鼻氣管炎病毒以及吉林省一家奶牛場發現并分離出牛病毒性腹瀉病毒。隨著我國養牛業的不斷壯大和發展，流行趨勢不斷上升，大部分省份均有牛傳染性鼻氣管炎病毒和牛病毒性腹瀉病毒感染的資料報道，2012年10月份云南省就有12例牛傳染性鼻氣管炎，有些省份規模場牛傳染性鼻氣管炎病毒和牛病毒性腹瀉病毒抗體檢測陽性感染率分別高達77.8%和88.9%，牛傳染性鼻氣管炎和牛病毒性腹瀉防控形勢日趨嚴峻。我國將牛傳染性鼻氣管炎和牛病毒性腹瀉分別列為二類和三類動物疫病，均是我國進境動物必檢疾病，被世界動物衛生組織設為B類動物疫病。為準確掌握昆明地區規模養牛場牛傳染性鼻氣管炎和牛病毒性腹瀉的感染情況和流行趨勢，本研究于2021—2022年對全市16個鄉鎮61家規模養牛場流行情況進行了調查分析，并提出了科學防控建議。1材料與方法1.1被檢樣品2021—2022年連續2年選取昆明市轄區內16個鄉鎮規模在300頭左右的中型肉牛規模場共61家，隨機采集棉拭子樣品1394份，其中2021年采集36家肉牛規模殖場的854份棉拭子樣品，2022年采集25家肉牛規模場的540份棉拭子樣品。所采棉拭子樣品均立即置于1.0mLDMEM培養液中，隨后放于-20℃冰箱中保存待檢。1.2檢測試劑牛傳染性鼻氣管炎病毒核酸檢測試劑盒購自廣州維伯鑫生物科技股份有限公司，牛病毒性腹瀉病毒核酸檢測試劑盒購自青島立見診斷技術發展中心。1.3主要儀器熒光定量PCR檢測儀（ABIQ5）。1.4操作方法試劑使用前應在常溫下充分融化并混勻后備用，按試劑盒說明書步驟配制反應體系，充分混勻，按照20μL反應體積分裝到PCR反應管中，瞬時離心后備用；取出樣本后混勻，將陰性對照、待檢樣本、陽性對照各5μL加入到PCR反應管中混勻，蓋上管蓋后2000r/min離心30s。將PCR反應管放入PCR儀內，其中：牛傳染性鼻氣管炎病毒核酸檢測時PCR反應條件設置為50℃污染消化2min，95℃預變性2min，PCR進行40個循環（95℃變性15s，60℃退火30s）；牛病毒性腹瀉病毒核酸檢測時PCR反應條件設置為50℃污染消化15min，95℃預變性2min，PCR進行40個循環（95℃變性15s，60℃退火30s）。1.5結果判定按照相應試劑盒說明書判定樣品牛傳染性鼻氣管炎病毒和牛病毒性腹瀉病毒核酸檢測結果。2結果通過連續2年分別對昆明市36家、25家肉牛規模養殖場進行牛傳染性鼻氣管炎和牛病毒性腹瀉病原學調查，結果如表1所示：①2021年，牛傳染性鼻氣管炎病毒核酸陽性牛2頭，均為2歲左右的母牛，個體陽性率0.23%；陽性個體均來自同一規模養殖場，該場規模在300頭左右，場群陽性率2.78%。牛病毒性腹瀉病毒核酸陽性牛3頭，個體陽性率0.35%；陽性個體均來自同一規模養殖場，該場規模在200頭左右，場群陽性率2.78%。②在對2021年兩個陽性場點持續進行監測的基礎上，2022年又篩選確定了23家規模養殖場，統一組織開展牛傳染性鼻氣管炎病毒和牛病毒性腹瀉病毒核酸檢測，結果全部為陰性。總的來看，2年間昆明市牛傳染性鼻氣管炎病毒核酸平均個體陽性率0.14%，平均場群陽性率1.64%；牛病毒性腹瀉病毒核酸平均個體陽性率0.21%，平均場群陽性率1.64%。表1昆明市肉牛規模牛場牛染性鼻氣管炎病原學和牛病毒性腹瀉病原學檢測結果3討論與結論牛傳染性鼻氣管炎和牛病毒性腹瀉均無特效治療方法，且存在隱性感染和終身排毒，都是造成這兩種病難以控制和消滅的根本原因。國外牛傳染性鼻氣管炎防控策略主要有2種，奧地利、丹麥等一些發達國家主要是通過檢疫淘汰逐步消滅該病，但這種方式資金投入較大，很多國家未能采用；還有一些歐洲國家通過使用gE基因標記疫苗和實施免疫監測相結合策略，區分自然感染和疫苗接種動物，及時發現牛傳染性鼻氣管炎陽性牛只，從而進行清除計劃。同樣對于牛病毒性腹瀉，發達國家的防控策略也基本和牛傳染性鼻氣管炎一致，北歐的瑞典和挪威等低密度養牛國家不適合采用疫苗免疫，嚴格生物安全管理，通過“篩查-淘汰”的策略逐步消滅該病；也有像美國和德國等高密度養牛國家一樣，通過“疫苗免疫-監測淘汰”的策略控制該病。在我國，關于牛傳染性鼻氣管炎和牛病毒性腹瀉防控策略還沒有正式明確，各地區采用的方式也不一樣，如內蒙古2021年全國首家制定了DB15/T2195-2021《規模化牛場病毒性腹瀉-黏膜病凈化技術規范》，并在全區規模化奶牛場和肉牛場推廣應用。特別是隨著畜牧業的快速發展和國際貿易自由化進程的不斷推進，動物疫病防控也逐漸摒棄傳統工作觀念，將動物疫病凈化作為畜牧業高質量發展的重要標志。近年來，國家高度重視動物疫病凈化工作，陸續出臺了一系列政策文件并作出了相關安排部署，如2021年新修訂的《動物防疫法》，明確將“凈化消滅”納入動物防疫的方針和要求；2022年農業農村部出臺的《關于推進動物疫病凈化工作的意見》中也提出了要在5年內建成一批高水平的動物疫病凈化場，這為各地開展動物疫病防控，推進動物疫病凈化指明了方向。我國也有商品化的牛傳染性鼻氣管炎、牛病毒性腹瀉二聯滅活疫苗，通過借鑒國外成功的防控經驗，結合我國關于動物疫病凈化的相關文件精神，針對昆明市牛傳染性鼻氣管炎和牛病毒性腹瀉感染性較低的情況，特提出“監測-淘汰-凈化”的防治策略，具體內容為：①堅持自繁自養。規模養牛場盡量避免從外面購買牛只，做到自繁自養。確需購買的，應詳細了解牛只來源和過往發病史，并做好入場前隔離觀察，堅決不能購入來源不明的牛只。②持續監測淘汰。一旦發現陽性感染牛只，立即淘汰，并對牛群持續開展健康監測，篩選隱形持續感染牛只，排除牛只隱性排毒風險，控制傳染源，這是有效控制和凈化牛傳染性鼻氣管炎和牛病毒性腹瀉確保牛群長期健康最有效的方法。③加強飼養管理。嚴格落實生物安全管理措施，做好日常環境衛生消毒管理，避免因環境問題造成潛伏期內牛體內的病毒被激活而向外界持續排毒，導致疫病擴散，切實提高防疫管理水平。④嚴格牛只檢疫。昆明市轄區內擁有云南省乃至西南地區最大的活牛交易市場，作為全國活牛貿易的主要集散地之一，活牛來源廣泛、日均入場牛數達7000頭以上、年交易牛只35萬頭。因此對于入昆牛只，除了做好檢疫票證檢查和瘦肉精等抗生素殘留檢測外，牛傳染性鼻氣管炎和牛病毒性腹瀉等主要牛病檢疫尤為重要。本研究結果顯示，2021年昆明地區肉牛規模養殖場牛傳染性鼻氣管炎病毒和牛病毒性腹瀉病毒群體感染率較低，均為2.78%，其中牛傳染性鼻氣管炎病毒群體陽性率低于2010年云南省部分規模牛場30%的群體陽性率水平，遠低于西南地區的