65.020.20

B05DB1308

承德市地方標(biāo)準(zhǔn)

DB1308/T316—2022

香菇固體轉(zhuǎn)液體菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程

DB1308/T316—2022

香菇固體轉(zhuǎn)液體菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程

1范圍

本文件規(guī)定了香菇固體轉(zhuǎn)液體菌種生產(chǎn)的前期準(zhǔn)備、操作流程以及各步驟的操作方法指示。

本文件適用于香菇固體轉(zhuǎn)液體菌種生產(chǎn)過(guò)程管理。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引

用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修

改單）適用于本文件。

本文件沒(méi)有規(guī)范性引用文件。

3術(shù)語(yǔ)和定義

本文件沒(méi)有需要界定的術(shù)語(yǔ)和定義。

4前期準(zhǔn)備

4.1培養(yǎng)基

小米谷粒、0.5%食品級(jí)甘油、葡萄糖粉、食品級(jí)酵母粉、100目豆粕粉、100目玉米粉等。

4.2儀器設(shè)備

高壓滅菌鍋、超凈工作臺(tái)、液體發(fā)酵罐、生化培養(yǎng)箱、搖床、pH酸度計(jì)、比重計(jì)、打漿機(jī)、液體

接種槍、0.9立方塑料桶、50目網(wǎng)篩、750ml塑料原種瓶、PDA平板培養(yǎng)基、無(wú)棉蓋體、搖瓶、接種工具

等。

5操作流程

谷粒選擇→谷粒浸泡→濾水→添加石膏→裝瓶→滅菌→接菌→菌絲培養(yǎng)→搖瓶→后續(xù)養(yǎng)菌→低溫

處理→谷粒菌種懸浮液制備→懸浮液過(guò)濾→轉(zhuǎn)罐擴(kuò)大培養(yǎng)→檢驗(yàn)→備用。

6操作方法

6.1谷粒選擇

選擇帶皮小米谷粒，籽粒飽滿、無(wú)雜質(zhì)、直徑為0.1cm～0.15cm，破碎率控制在2%以內(nèi)。

6.2谷粒浸泡

使用塑料桶或箱作為容器，將谷粒倒入容器中，加水浸泡，水與谷粒的體積比為2:1。環(huán)境溫度20℃

１

DB1308/T316—2022

左右，浸泡4h；環(huán)境溫度15℃左右，浸泡10h；環(huán)境溫度10℃左右，浸泡24h。以谷粒浸透無(wú)白心為

宜。

6.3濾水

浸泡完成后濾水，將谷粒置于50目篩子上進(jìn)行濾水；以篩底沒(méi)有水滴滴下，且手抓谷粒不粘手為

宜。

6.4添加石膏

按照谷粒干重的1%比例添加石膏，攪拌均勻。

6.5裝瓶

選擇750ml塑料原種瓶，采用機(jī)械或手工裝瓶，裝料高度至瓶肩；裝瓶后的重量在1.3kg～1.4kg。

使用無(wú)棉蓋體扣蓋封口，作為培養(yǎng)基。

6.6滅菌

裝瓶后的培養(yǎng)基在4h內(nèi)進(jìn)行滅菌，防止培養(yǎng)基變酸；采用高壓滅菌方式滅菌，溫度達(dá)到121℃時(shí)保

持4h，確保滅菌徹底。

6.7接菌

滅菌完成后，待培養(yǎng)基溫度降到25℃左右時(shí)在超凈工作臺(tái)無(wú)菌的條件下進(jìn)行接菌，每支20mm×200

mm的斜面試管PDA培養(yǎng)基母種轉(zhuǎn)接4瓶培養(yǎng)基。

6.8菌絲培養(yǎng)

接菌完成后，在培養(yǎng)溫度為22℃，空氣相對(duì)濕度為60%，二氧化碳濃度不超過(guò)0.2%的條件下進(jìn)行培

養(yǎng)。

6.9搖瓶

當(dāng)菌絲長(zhǎng)到培養(yǎng)基1/4左右時(shí)進(jìn)行搖瓶，使得長(zhǎng)有菌絲部分的培養(yǎng)基與沒(méi)長(zhǎng)菌絲的培養(yǎng)基再次混合，

以加快菌種的生長(zhǎng)速度。

6.10后續(xù)養(yǎng)菌

待培養(yǎng)基中長(zhǎng)滿菌絲后，繼續(xù)培養(yǎng)10d～12d，令菌絲長(zhǎng)入培養(yǎng)基內(nèi)部，充分分解谷粒培養(yǎng)基，使

谷粒充分軟化，培養(yǎng)成為谷粒原種。該階段的管理要加強(qiáng)通風(fēng)換氣，二氧化碳濃度不要高于0.15%。

6.11低溫處理

將長(zhǎng)好菌絲的谷粒菌種在4℃環(huán)境下放置6h。

6.12谷粒菌種懸浮液制備

在無(wú)菌的條件下，使用打漿機(jī)對(duì)低溫處理的谷粒菌種進(jìn)行充分破碎，在破碎過(guò)程中加入溫度為4℃

的0.5%的無(wú)菌甘油溶液，使破碎后的谷粒菌種變成懸浮漿液，其中谷粒菌種與甘油溶液的體積比為1:1。

打漿機(jī)對(duì)谷粒菌種進(jìn)行破碎時(shí)采用間歇模式，每旋轉(zhuǎn)30s停頓10s，以旋轉(zhuǎn)10次為限，防止打漿過(guò)程中

溫度升高。

２

DB1308/T316—2022

6.13懸浮液過(guò)濾

三角瓶消毒，安裝消毒后的50目篩片，打漿結(jié)束后倒入三角瓶中過(guò)濾。

6.14轉(zhuǎn)罐擴(kuò)大培養(yǎng)

在無(wú)菌條件下，將過(guò)濾后的谷粒菌種懸浮液轉(zhuǎn)入到盛裝培養(yǎng)液的液體發(fā)酵罐中進(jìn)行液體發(fā)酵培養(yǎng)，

懸浮漿液與培養(yǎng)液的體積比為1:1200。發(fā)酵罐培養(yǎng)液成分按質(zhì)量配比為：玉米粉2%、豆粕粉2%、葡萄

糖1.5%、酵母粉0.5%和94%的無(wú)菌水。發(fā)酵罐內(nèi)培養(yǎng)條件為溫度25℃，罐內(nèi)壓力0.01兆帕，培養(yǎng)6d。

6.15檢驗(yàn)

6.15.1取樣

在擴(kuò)大培養(yǎng)即將結(jié)束時(shí)檢驗(yàn)一次即可，即在培養(yǎng)6d取樣檢驗(yàn)。

6.15.2感官檢查

6.15.2.1看

將樣品靜置桌上觀察。一看菌液顏色和透明度；二看菌絲形態(tài)和大小；三看上清液與沉淀的比例中

菌絲體占比達(dá)到80%以上；

6.15.2.2旋

手提樣品瓶輕輕旋轉(zhuǎn)一下，觀其菌絲體的特點(diǎn)。醪液的粘稠度高，說(shuō)明菌種性能好；稀薄表明菌球

少，不宜使用。菌絲的懸浮力好，放置5min不沉淀，表明菌種生長(zhǎng)力強(qiáng)；反之，如果菌絲極易沉淀，

說(shuō)明菌絲已老化或死亡。

6.15.2.3嗅

在旋轉(zhuǎn)樣品后，打開(kāi)瓶蓋嗅氣味。培養(yǎng)好的優(yōu)質(zhì)液體菌種，均具有芳香氣味；染雜菌的培養(yǎng)液則散

發(fā)出酸、甜、霉、臭等各種異味。

6.15.3理化試驗(yàn)

6.15.3.1菌絲干重

量取液體菌種10ml，用水分測(cè)試儀烘干至含水量18%，然后稱量，菌絲干重≥2g為合格。

6.15.3.2液體粘稠度

將液體菌種置于量筒中，使用比重計(jì)進(jìn)行粘稠度測(cè)量，比重超過(guò)1.2為合格。

6.15.3.3pH值測(cè)定

將液體菌種取出后，使用pH值酸度計(jì)進(jìn)行精準(zhǔn)測(cè)量，pH值在4～4.2范圍值內(nèi)為合格；

6.15.3.4菌絲活力

將液體菌種菌絲球轉(zhuǎn)接與平板PDA培養(yǎng)基上，28℃恒溫培養(yǎng)24h，菌絲球正常萌發(fā)菌絲為合格菌種。

３

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6.16備用

液體菌種經(jīng)檢驗(yàn)合格可備用。

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４

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前言

本文件按照GB/T1.1-2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定

起草。

本文件由承德市農(nóng)業(yè)農(nóng)村局歸口。

本文件起草單位：平泉市希才應(yīng)用菌科技發(fā)展有限公司。

本文件主要起草人：梁希才、張永峰、柳鳳玉、劉海軍、王麗波、劉紹蒼、梁宏麗、張亞紅、張晨

光、孟凡飛、王彥玲、石建軍、王帥。

I

DB1309/T56—2011

表D.1無(wú)公害滄州金絲小棗主要病蟲(chóng)害及防治方法（續(xù)）

一、農(nóng)業(yè)措施

冬春掰蟲(chóng)繭，土中挖繭，集中燒毀

二、生物防治

1．秋季和早春

刺蛾類保護(hù)天敵如五齒青蜂、黑小蜂等

2．七月上、中旬-八月中旬

三、化學(xué)防治

建議使用下列藥劑：0.5%甲維鹽、猛拳、速滅殺丁、滅掃利、BT

等

一、農(nóng)業(yè)措施

1.早春1.清理剪口，鏟除雜草，消滅越冬蟲(chóng)卵。

綠盲蝽象2．5月上、中旬-6月中、下2.春季樹(shù)干涂抹粘蟲(chóng)膠。

旬二、化學(xué)措施

建議使用下列藥劑：吡蟲(chóng)啉、啶蟲(chóng)咪、乙酰甲胺磷、殺滅菊酯等。

發(fā)芽前噴布3度～5度（波美）

棗葉壁虱早春發(fā)芽前后石硫合劑，棗股部位噴重些

發(fā)芽期噴乙酰甲胺磷、毒死蜱、敵敵畏等

一、農(nóng)業(yè)措施

1．冬季、早春結(jié)合冬剪刮樹(shù)皮，消滅越冬若蟲(chóng)

棗粉蚧

2．5月上旬-6月上旬二、化學(xué)防治

建議使用下列藥劑如毒死蜱、農(nóng)斯特等

一、農(nóng)業(yè)措施

利用假死性振落捕殺

食芽象甲4月中、下旬-5月中旬

二、化學(xué)防治

建議使用下列藥劑：辛硫磷、乙酰甲胺磷等。

一、農(nóng)業(yè)措施

冬季刮樹(shù)皮，人工捕捉幼蟲(chóng)；利用成蟲(chóng)假死性搖樹(shù)震蟲(chóng)捕殺

六星吉丁蟲(chóng)5月中旬-6月中旬

二、化學(xué)防治

在5、6月份成蟲(chóng)發(fā)生期噴乙酰甲胺磷、滅掃利、農(nóng)斯特防治

一、利用黑光燈或高壓汞燈在棉蛉蟲(chóng)成蟲(chóng)活動(dòng)高峰期開(kāi)燈，誘殺成蟲(chóng)。

二、可利用性誘劑，楊樹(shù)枝把搞好蟲(chóng)情測(cè)報(bào)。

三、抓好防治關(guān)鍵期，突出早、準(zhǔn)、狠的防治特點(diǎn)。棗樹(shù)上抓住第二

棉鈴蟲(chóng)6月中、下旬-7月中旬

代落卵高峰和幼蟲(chóng)孵化高峰期，一般年份在6月20日至25日，

使用藥劑可選擇強(qiáng)殺卵劑辛硫磷、殺幼蟲(chóng)劑0.5%甲維鹽、猛拳等，

提倡發(fā)生盛期連續(xù)2次噴藥防治。

一、農(nóng)業(yè)措施

1．發(fā)芽前后，剪除被害枝集中燒毀

2．利用成蟲(chóng)趨光性強(qiáng)的特點(diǎn)，在6月～7月份成蟲(chóng)盛發(fā)期進(jìn)行

春季發(fā)芽前后

豹紋木蠹蛾黑光燈誘殺

6月-7月份

二、化學(xué)防治

在成蟲(chóng)發(fā)生期建議使用下列農(nóng)藥：滅掃利、乙酰甲胺磷、敵敵畏、

毒死蜱、辛硫磷等

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DB1309/T56—2011

表D.1無(wú)公害滄州金絲小棗主要病蟲(chóng)害及防治方法（續(xù)）

一、農(nóng)業(yè)措施