植物組織培養技術李學強主要參考資料《植物組織培養》吳殿星，胡繁榮．《植物組織培養》陳世昌．《植物細胞工程實驗技術》孫敬三，朱至清．《植物組織培養教程》李浚明．《植物細胞工程實驗技術》孫敬三，桂耀林．《植物組織培養手冊》顏昌敬．《實用植物組織培養技術教程》曹孜義，劉國民《植物組織培養實用技術》朱建華，彭士勇

《植物細胞工程原理與技術》周維燕

《植物細胞組織培養》劉慶昌，吳國良1.植物組織培養的一般概念植物組織培養(planttissueculture)（廣義的）：

在無菌條件下利用人工培養基對植物的器官、組織、細胞以及原生質體進行培養，使之產生再生的完整植株或其它具有經濟價值的生物產品的技術。外植體(explant)：由活植物體上切取下來用以培養的那部分組織、器官等。根據外植體的種類不同組織培養可分為：

器官培養（organculture）：外植體為器官的全部或部分或器官原基

組織培養（tissueculture）(狹義的)：外植體為植物的各部分組織

細胞培養（cellculture）：外植體為單細胞或很小的細胞團

原生質體培養（protoplastculture）：外植體為除去細胞壁的原生質體

快速無性繁殖獲得脫毒苗

保存種質資源

育種的手段

生產工業原料組培室的構成和一般技術2.1組培室的構成1.準備室需備有的設備有：鼓風干燥箱、落水架、工作臺、水池、水桶、水盆、試管刷等，主要用于玻璃器皿、用具和培養材料清洗；還需要有高壓水龍頭用于沖洗。2.滅菌室需備有高壓蒸汽滅菌裝置、細菌過濾器、用于培養基及培養器械的滅菌。3.培養基配制室需備有冰箱、化學實驗臺、藥品柜、器械柜、物品存放架以及各種玻璃器皿和用具，包括各種不同容積的容量瓶、燒杯、量筒、移液管、三角瓶、磨口瓶、廣口瓶、各種類型培養瓶、玻璃棒、移液管架、試管刷、電爐、微波爐等。4.無菌操作室(接種室)

無菌操作室在工作方便的前提下，宜小不宜大，宜精細密閉，忌粗陋放散，是植物組織培養研究或生產工作中最關鍵的部分，關系到培養物的污染率，接種工作效率等重要指標。要求如下:(1)地面、天花板及四壁盡可能光潔、避免積染灰塵，易于采取各種清潔措施。(2)干爽、安靜、清潔明亮，在適當的位置吊裝紫外燈1-2盞，用以經常照射滅菌，使室內保持良好的無菌、低密度有菌狀態。(3)最好安置一小型空調機，使室內溫度保持在26℃左右，這樣就可以在工作時或不工作時都把工作室的門窗緊閉，保持與外界相對隔絕的狀態，盡量減少與外界的空氣對流，減少塵埃與微生物侵入。(4)經常采用消毒措施，達到較高的無菌水平，以利完全操作提高工作的質量與效率。(5)無菌室外應留有緩沖間，進入無菌室前在此更衣換鞋洗手及處理外界采回準備消毒培養的材料等。無菌操作室應備有超凈工作臺或接種箱、固定式載物臺、移動式載物臺、廣口瓶、酒精燈、紗布、器械支架、手術剪、解剖刀、解剖針、鑷子等。5.培養室應盡量安排在樓層較高處，以利于采光，減少塵埃和雜菌污染的機會。此外應考慮清潔、干燥，培養室保溫隔熱。培養室中距離窗戶較遠處的培養架應適當安裝人工輔助照明的日光燈。應設計能有效通風的窗戶、定期或需要時加強通風散熱，如在室內地板稍高處設置進風氣窗，在氣窗的對側近天花板設置排風窗，也可安裝小功率的排風扇。室內應備有制冷設備、加熱設備、控光設備、固定式培養架、旋轉式培養架、搖床等。6.鑒定室需備有高倍顯微鏡、倒置顯微鏡、相差顯微鏡、解剖鏡、恒溫箱、切片機、烤片臺、恒溫水浴、滴瓶、染色缸、載玻片、蓋玻片等。7.馴化移植室應備有溫室、彌霧裝置、蔭棚、移植床、缽、盆、塑料布、草炭、蛭石、粗沙等，用于試管小植株的鍛煉和移植。2.2基本設備清洗設配：冷熱水源、水槽、各種毛刷、塑料桶或盆、洗濯機、鼓風干燥箱、防塵廚培養容器：培養皿、三角瓶、廣口瓶、試管,材質為玻璃或塑料空調25℃±2℃人工氣候箱、培養箱培養架、光源（可控）試管架（鐵絲制成）搖床（溫光可控式搖床）多用途小車培養容器

材料：聚丙烯(PP)、聚碳酸脂(PC)無菌培養容器封口膜培養架槍鑷直鑷手術刀柄手術刀片手術剪接種工具滅菌器

手提式滅菌鍋立式滅菌鍋臥式圓形壓力蒸氣滅菌器單人單面超凈臺雙人水平凈化工作臺生化培養箱光照培養箱真空干燥箱干熱滅菌器洗瓶機：采用清水里外沖冼，可洗廣口瓶、三角瓶。超聲波清洗器

針頭過濾器（用于組培中不耐高溫激素的過濾除菌）磁力攪拌器移液器架

移液器4910(整支可消毒系列)

2.3一般技術2.3.1玻璃器皿和塑料器皿的清洗新玻璃器皿因有游離堿性物質，使用前先用1%稀鹽酸浸泡一夜，然后用肥皂水洗凈，清水沖洗，最后用蒸餾水沖洗一次，干后備用。被污染的舊器皿滅菌洗滌，方法同新器皿，但浸泡時間可短。烘干75℃左右，口向下。貯存防塵廚洗液（重鉻酸鉀和濃硫酸混合液）浸泡2.3.2滅菌培養基污染來源：培養容器、培養基本身、外植體、接種室的環境、操作器械、培養室的環境。(1)環境滅菌表2-1培養基蒸汽滅菌所需的最少時間容積（ml）在121℃下所需的最少滅菌時間（min）1~20015200~1000301000~200040（2）培養基滅菌培養基裝瓶封口滅菌滅菌條件：一般條件1.06kg／cm2121℃消毒15～40min

特殊條件：溫度100℃注意：冷卻時要緩慢降溫。與熱易分解的物質如某些生長調節劑（如GA3、IAA、ABA、玉米素）、尿素、某些維生素等不能進行高壓滅菌。上述物質可通過濾膜進行滅菌，之后較如高壓滅菌后的培養基中（培養基溫度40℃）。濾膜孔徑≤0.45μm(3)玻璃器皿、塑料器皿和器械滅菌高壓蒸汽滅菌同培養基滅菌；塑料器皿因材料而定，聚丙烯、聚甲基戊烯、同質異晶聚合物可以在121℃反復進行高壓蒸汽滅菌；聚碳酸酯類每次滅菌時間不超過20min。干熱滅菌：玻璃器皿160-180℃3h；灼燒滅菌：95％酒精（4）植物材料滅菌植物材料各部分的表面都可能攜帶污染微生物，必須進行表面滅菌。內部感染真菌或細菌的植物材料一般棄之不用。可用各種消毒劑進行植物組織消毒，常用消毒劑如表2-2所示。表2-2一些表面消毒劑的消毒效果消毒劑使用濃度消毒時間（min）消毒效果次氯酸鈣5％～10％5~30很好次氯酸鈉2％5~30很好過氧化氫10％～12％5~15好溴水1％～2％2~10很好硝酸銀1％5~30好氯化汞0.1％～1％2~10滿意抗生素4～50mg／g30~60相當好注意：表面消毒劑對植物組織也是有毒的，必須正確選擇消毒劑的濃度和處理時間，以盡量減少組織的死亡。可同時用兩種或多種消毒劑，如常用酒精和升汞同時處理。消毒劑里也可加幾滴表面活化劑如Triton-X、Tween-80等，以提高殺毒效果。如果外植體表面污染嚴重，需用流水沖洗1h或更長時間，或先進行室內培養以得到污染輕的外植體。外植體消毒的一般步驟流水沖洗30～60min70%酒精30～60s植物組織＋消毒液（帶蓋的玻璃瓶或其它容器）＋(活化劑)

搖動2～3次蒸餾水沖2～3次放入消過毒的培養皿中（5）接種區消毒超凈工作臺原理：電風扇粗過濾器細過濾器（高效過濾器）濾掉0.3μm的顆粒超凈空氣吹過臺面，風速27±3m／min，這個速度足以阻止工作區被坐在工作臺前面的所污染，所有的污染物都會被這種超凈氣流吹跑，但這種氣流不妨礙在臺面上使用酒精燈。只要超凈工作臺不停的運轉，臺面上即可保持一個無菌的環境。

初次使用應在開動20分鐘后再開始操作，以后開動10分鐘即可。每次操作前，必須把所需材料全部拿進。臺面上的東西不能阻擋氣流。3培養基

培養基是植物組織培養的重要條件。

在離體培養條件下，不同種植物的組織對營養有不同的要求，甚至同一種植物不同部位的組織對營養的要求也不相同，只有滿足了它們各自的特殊要求，它們才能很好地生長。

因此，沒有一種培養基能夠適合一切類型的植物組織或器官，在建立一項新的培養系統時，首先必須找到一合適的培養基，培養才有可能成功。3.1.1根據對培養基組成物質的化學成分是否完全了解來區分3.1培養基的種類

可以將培養基分為天然培養基、合成培養基和半合成培養基。

天然培養基是指利用來自于各種動、植物或微生物的原料配制而成的培養基，不能確切知道它的化學成分，穩定性常受原材料等因素的影響。１）天然培養基

合成培養基是一類化學成分和數量完全知道的培養基，它是用已知化學成分的化學藥品配制而成。這類培養基化學成分精確、重復性強。

２）合成培養基

在合成培養基中，加入某種或幾種天然成分；或者在天然培養基中，加入一種或幾種已知成分的化學藥品即成半合成培養基。３）半合成培養基

可以分為固體培養基、液體培養基和半固體培養基。3.1.2根據培養基的物理狀態來區分１）液體培養基

所配制的培養基是液態的，其中的成分基本上溶于水，沒有明顯的固形物，液體培養基營養成分分布均勻。

在液體培養基中加入適量的凝固劑即成固體培養基。常用作凝固劑的物質有瓊脂、明膠、硅膠等，以瓊脂最為常用。２）固體培養基

如果把少量的凝固劑加入到液體培養基中，就制成了半固體培養基。以瓊脂為例，它的用量在0.2～1%之間。３）半固體培養基3.1.3根據成分是否完全來分1）基礎培養基只含有大量元素、微量元素和有機營養物的培養基稱為基礎培養基。2）完全培養基除基礎培養基成分之外，還包含不同的植物生長調節物質以及有機添加物，稱為完全培養基。3.2培養基成分3.2.1.無機營養物無機營養物主要由大量元素和微量元素兩部分組成。大量元素:氮、磷、硫、鉀、鈣、鈉、鎂、氯等

氮源通常有硝態氮或銨態氮，但在培養基中用硝態氮的較多，也有將硝態氮和銨態氮混合使用的。

磷和硫則常用磷酸鹽和硫酸鹽來提供。

鉀是培養基中主要的陽離子，在近代的培養基中，其數量有逐漸提高的趨勢。

而鈣、鈉、鎂的需要則較少。培養基所需的鈉和氯化物，由鈣鹽、磷酸鹽或微量營養物提供。

微量元素包括碘、錳、鋅、鉬、銅、鈷和鐵。

培養基中的鐵離子，大多以螯合鐵的形式存在，即FeSO4與Na2—EDTA（螯合劑）的混合，或NaFe—EDTA。3.2.2.有機營養成分

植物組織培養中的培養物不同于完整的植株，沒有系統的物質合成等自養功能。為了使離體的培養物能正常生長發育和分化，培養基中除需添加無機鹽外，還需添加碳源、維生素、氨基酸等有機成分。(1)碳源

一般來說，蔗糖是最好的碳源，它具有熱易變的性質，經高壓滅菌后，大部分可分解為D-葡萄糖、D-果糖，僅剩下部分的蔗糖，這更有利于吸收和利用。此外，也可以直接利用果糖、葡萄糖、麥芽糖、纖維二糖等。碳源物質包括糖類、醇類和有機酸，以糖類物質最為重要。

不同糖類對培養材料生長的影響不同，一般來說，以蔗糖作碳源時，離體培養的雙子葉植物的根生長得更好。而以右旋糖（葡萄糖）作碳源時，單子葉植物的根生長得較好。根據培養目的的不同，蔗糖使用濃度一般在2％-5％。

碳源除了在培養基中提供培養物所需的碳骨架和能源外，還可在一定程度上調節培養基的滲透壓，一般在-1.5～4.1MPa。(2）維生素

主要有維生素B1（鹽酸硫胺素）、維生素B6（鹽酸毗哆醇）、維生素B5（煙酸）、維生素C（抗壞血酸），有時還需添加維生素H（生物素）、維生素M（葉酸，有時也寫作維生素Bc)、維生素B2（核黃素）等。

維生素B1對愈傷組織的產生和生活力有重要作用，維生素B6能促進根的生長，維生素B5與植物代謝和胚的發育有一定關系。

維生素用量一般為0.1～1.Oｍg/L、維生素C用量一般為1～100mg/L。培養基中高濃度維生素C的使用并不一定是植物生長需要，而是作為抗氧化劑以防止組織褐變。

又叫環己六醇，在糖類的相互轉化中起重要作用，也是細胞壁的構建成分。肌醇參與碳水化合物、磷脂代謝及離子平衡等生理活動，具有促進活性物質發揮作用的效果，在培養基中加入1.0mg/L的肌醇就足以影響維生素B1的效應。適當使用肌醇，能促進愈傷組織的生長以及胚狀體和芽的形成，對組織和細胞的繁殖、分化及細胞壁的形成也有作用。使用濃度一般為50一l00mg/L。(3)肌醇

氨基酸是蛋白質的組成部分，也是一種很好的有機氮源，可直接被植物細胞吸收利用。植物組織培養中最常用的氨基酸是甘氨酸，其它如精氨酸、谷氮酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、天冬酰胺、丙氨酸等也常用。有時也應用水解乳蛋白（LH)或水解酪蛋白（CH),它們是牛乳經酶法處理等加工的水解產物，是含有20種左右氨基酸的混合物，用量在10～1000mg/L之間。(4)氨基酸(5)天然復合物

為了促進某些愈傷組織和器官的生長，在培養基中還常加人某種化學成分不明的天然營養混合物，如水解酪蛋白（CH)、水解乳蛋白（LH)、椰乳（CM)、玉米胚乳、麥芽浸出物（ME）和酵母浸出物(YE）等。其大多成分比較復雜，含氨基酸、激素、酶等一些復雜化合物，對細胞和組織的增殖與分化有明顯的促進作用，但對器官的分化作用不明顯。由于其對一些難培養的植物材料有特殊作用，所以在一些試驗中經常應用。①椰乳是椰子的液體胚乳，它是使用最多、效果較好的一種天然復合物，一般使用濃度在l0％--20％。在愈傷組織和細胞培養中椰乳具有促進外植體生長的作用，在馬鈴薯莖尖和草每微莖尖培養中椰乳具有明顯促進莖尖生長的作用。未經加熱滅菌的椰乳對促進外植體的生長作用比加熱滅菌的椰乳更為明顯。②香蕉汁用量為150～200g／L，對pH值的緩沖作用大。主要在蘭花的組織培養中應用，對外植體的分化有明顯促進作用。③馬鈴薯汁馬鈴薯去掉皮后加水煮30min，再經過濾，取其濾液使用，用量為150～200g／L。對pH緩沖作用也大，多用于壯苗的培養。④水解酪蛋白為蛋白質的水解物，主要成分為氨基酸，常用濃度為100-200mg/L。水解酪黃白在酸或酶的作用下易分解，使用時應注意。⑤其它酵母提取液，主要成分為氨基酸和維生素類；麥芽提取液、蘋果和番茄的果汁、黃瓜的果實、未熟玉米的胚乳等，近年來，也有利用櫻桃汁，甚至人參、西洋參粉和蜂王漿等天然物質的報道。3.2.3生長調節物質常用的生長調節物質大致包括以下三類：1)植物生長素類細胞分裂素3)赤霉素

如吲哚乙酸（IAA）、萘乙酸（NAA）、2，4-二氯苯氧乙酸（2，4-D）、吲哚-3-丁酸（IBA）、萘氧乙酸（NOA）、對氯苯氧乙酸（p-CPA）、三氯苯氧乙酸（2，4，5-T）。

1)植物生長素類IBA、NAA廣泛用于生根，并與細胞分裂素互作促進莖芽的增值。2，4-D、2，4，5-T用于愈傷組織的誘導和生長。

生長素一般溶于95％酒精或0.1mol／L的NaOH中，后者的溶解效果更好。細胞分裂素

芐氨基嘌呤（BAP）、芐基腺嘌呤（6-BA）、異戊烯氨基嘌呤（2-ip）、玉米素（Zt）、激動素（Kt）等。

作用是促進細胞分裂、愈傷組織分化不定芽、枝條的增殖。

細胞分裂素一般溶于0.5或1mol／L的HCl或稀薄的NaOH中。3)赤霉素組織培養中使用的赤霉素只有一種，即GA3。與生長素與細胞分裂素相比，赤霉素不常使用。

作用促進矮小植株莖節伸長、刺激不定胚正常發育成小植株。

赤霉素易溶于冷水，最多每升水可溶解1000mg。但GA3溶于水后不穩定，容易分解，最好以95％的酒精配成母液保存在冰箱中，一般不用，但可促進個別物種的愈傷組織的生長。4）脫落酸3.2.4其它成分1）活性炭作用因物種而不同。蘭花、胡蘿卜、長春藤、和番茄刺激培養物的生長和分化，因吸附抑制物質或使培養基變暗。煙草、大豆、山茶花抑制生長，因吸附植物激素。活性炭用量一般為0.5％～3％。注意：高壓滅菌之前加入活性炭會降低培養基的pH值，使瓊脂不易凝固。2）硝酸銀

作用是促進愈傷組織器官發生或體細胞胚胎發生；對克服試管苗玻璃化及早衰和落葉等也有明顯效果。抑制乙烯活性，原理是競爭性的結合于細胞膜上的乙烯受體蛋白，不能減少乙烯的積累。使用濃度一般為1～10mg／L，過濾滅菌。注意：不能把培養物長期存在含AgNO3的培養基上，否則，會導致再生植株畸形。作用是防止外植體內生菌造成的污染。青霉素、鏈霉素、土霉素、四環素、氯霉素、利福平、卡那霉素、慶大霉素等。用量一般為5～20mg／L注意：選擇抗生素要有針對性；聯合用藥；抗生素有抑制生長發育的作用；降低植株的抗病性。3）抗生素3.2.5瓊脂及其它固化劑瓊脂

40℃凝固，一般使用濃度0.7％～1％。注意：不可用于營養需要研究，因其含有Ca、Mg和微量元素。Gelrite100℃左右融化，30～45℃凝固，pH值4和7之間凝膠強度變化不大。瓊脂糖凝固溫度比瓊脂低，多用于原生質體培養。3.2.6pH不同外植體要求pH值不同。一般在滅菌之前將pH值調到5.0～6.0之間。pH≥6，培養基會變硬；pH≤5，瓊脂不能很好的凝固。培養基成分的濃度表示一般以質量表示（mg／L）國際植物生理協會建議使用摩爾（mole）值:大量元素、有機物質濃度用mmol／L.微量元素、激素、維生素等用μmol／L3.3培養基選擇

培養基有許多種類，根據不同的植物和培養部位及不同的培養目的需選用不同的培養基

培養基的產生最早是Sacks(1680)和Knop(1681)，他們對綠色植物的成分進行了分析研究，根據植物從土中主要是吸收無機鹽營養，設計出了由無機鹽組成的Sacks和Knop溶液，至今仍在作為基本的無機鹽培養基得到廣泛應用。以后根據不同目的進行改良產生了多種培養基，White培養基在40年代用得較多，現在還常用。而到60和70年代則大多采用MS等高濃度培養基，可以保證培養材料對營養的需要，并能生長快、分化快，且由于濃度高，在配制、消毒過程中某些成分有些出入，也不致影響培養基的離子平衡。

培養基的名稱，多數以發明人的名字來命名，如White培養基，Murashige和Skoog培養基（簡稱MS培養基），也有對某些成分進行改良稱作改良培養基。

目前國際上流行的培養基有幾十種，常用的培養基及特點如下：

（1）MS培養基

它是1962年由Murashige和Skoog為培養煙草細胞而設計的。特點是無機鹽和離子濃度較高，為較穩定的平衡溶液。其養分的數量和比例較合適，可滿足植物的營養和生理需要。它的硝酸鹽含量較其他培養基為高，廣泛地用于植物的器官、花藥、細胞和原生質體培養，效果良好。有些培養基是由它演變而來的。大量元素含量微量元素含量鐵鹽含量有機物含量其他含量KNO31900H3BO36.2FeSO47H2O27.8肌醇100蔗糖30000NH4NO31650MnSO44H2O22.3Na2EDTA2H2O37.3煙酸0.5瓊脂8000MgSO47H2O370ZnSO47H2O8.6鹽酸硫胺素0.5

KH2PO4170Na2MoO42H2O0.25鹽酸吡哆醇0.5CaCl22H2O440CuSO45H2O0.025甘氨酸2CoCl26H2O0.025KI0.83單位：mg/L(2)改良懷特培養基

是1943年由White為培養番茄根尖而設計的。1963年又作了改良，稱作White改良培養基，提高了MgSO4的濃度和增加了硼素。其特點是無機機鹽數量較低，適于生根培養。大量元素含量微量元素含量鐵鹽含量有機物含量其他含量KNO380H3BO31.5Fe2(SO4)32.5肌醇100蔗糖30000Ca(NO3)24H2O300MnSO44H2O7.0煙酸0.3瓊脂8000MgSO47H2O720ZnSO47H2O3.0鹽酸硫胺素0.1

NaH2PO44H2O16.5MoO30.0001鹽酸吡哆辛0.1KCl65CuSO45H2O0.001甘氨酸3Na2SO4200(3)N6

是1974年朱至清等為水稻等禾谷類作物花藥培養而設計的。其特點是成分較簡單，KNO3和（NH4)2SO4含量高。在國內已廣泛應用于小麥、水稻及其他植物的花藥培養和其他組織培養。大量元素含量微量元素含量鐵鹽含量有機物含量其他含量KNO32830H3BO31.6FeSO47H2O27.8煙酸0.5蔗糖30000(NH4)2SO4463MnSO44H2O4.4Na2EDTA2H2O37.3鹽酸硫胺素1瓊脂8000MgSO47H2O185ZnSO47H2O1.5鹽酸吡哆醇0.5KH2PO4400KI0.8甘氨酸2CaCl22H2O166

（3）B5培養基

是1968年由Gamborg等為培養大豆根細胞而設計的。其主要特點是含有較低的銨，這可能對不少培養物的生長有抑制作用。從實踐得知有些植物在B5培養基上生長更適宜，如雙子葉植物特別是木本植物。組成成分數量(mg/l）組成成分數量(mg/l)KNO32500FeSO4·7H2O27.8CaCl2·2H2O150CuSO4·5H2O0.025MgSO4·7H2O250蔗糖40(NH4)2SO4

134pH5.5KI0.75肌醇100H3BO4

3.0煙酸1.0MnSO4·4H2O10鹽酸吡哆醇1.0ZnSO4·7H2O2.0激動素0.1Na2MoO4·2H2O0.252,4－D0.1－1.0CoCl2·6H2O0.025鹽酸硫銨10Na2-EDTA37.3（5）KM-8p培養基

它是1974年為原生質體培養而設計的。其特點是有機成分較復雜，它包括了所有的單糖和維生素，廣泛用于原生質融合的培養。

植物名外植體誘導培養繼代培養生根培養草莓匍匐莖1/2MS+BA0.21/2MS+BA0.51/2MS吊鐘海堂葉片MS+BA1.0+NAA0.2MS+BA1.0+NAA0.1MS+NAA0.2海石竹葉片MS+BA1.0+NAA0.2MS+BA1.0+NAA0.1MS+NAA0.2馬鈴薯苗尖MS+BA1.0+IAA0.01MS+BA1.0+IAA0.01MS+BA1.0+IAA0.01分生組織MS+NAA0.07+GA0.004MS+NAA0.07+GA0.004MS+NAA0.07+GA0.004大蒜頂端分生組織MS/MS+NAA1.0芽頂端B5+2ip0.5+NAA0.1B5+2ip0.5+NAA0.1B5+2ip0.01+NAA0.2洋蔥鮮莖B5+2,4-D1B5+2ip1/花椰菜分生組織LS+IAA8.0+KIN2.56LS+IAA8.0+KIN2.56LS+IAA8.0+KIN0.02油菜下胚軸、莖段B5+BA1.5~2.0+IBA0.2+GA0.5B5+BA1.5~2.0+IBA0.2+GA0.51/2B5+NAA0.05+IAA0.1西瓜苗端LS+KIN1.0+IAA0.05LS+KIN2.0+IAA0.05LS+IAA2.0葡萄莖尖MS+NAA0.1MS+NAA0.1/麝香石竹莖段MS+BA1.0+IAA0.01MS+BA1.0+IAA0.01MS+IAA0.1唐昌蒲腋芽MS+KIN2.0+NAA0.1MS+KIN2.0+NAA0.1MS+NAA0.5+AC0.3月季萌枝MS+BA0.5+NAA0.1MS+BA0.5+NAA0.1MS+BA0.5+NAA0.1非洲菊莖尖MS+KT1+IAA2MS+KT10+IAA0.5MS+IAA10MS+BA2+NAA0.2~0.5MS+BA2+NAA0.2~0.5MS+White+IBA1康乃馨莖尖MS+KT0.5+NAA0.1MS+KT2+NAA0.02/MS+KT2+NAA0.2MS+KT0.5+NAA0.02/仙客來球莖White+KT2.5//滿天星莖尖MS(或White)+BA1+NAA0.05MS(或White)+BA1+NAA0.05/香雪球莖MS+IAA2+2,4-D5MS+BA1+IAA0.02~0.2/變葉木莖段MS+BA1.5+NAA0.15MS+BA2.5+NAA或IAA0.1MS+NAA0.5風信子鮮莖、花序MS+NAA0.5~10+2,4-D0.2~1//矢車菊莖Bonner+2,4-D0.7//大麗菊側芽MS+BA1+NAA1MS+BA1+NAA1MS+NAA0.5~1

3.4培養基的配制培養基含有幾十種營養成分，為了避免每次配制培養基都要對這幾十種成分進行稱量，可將培養基中的各種成分，按原量的10~20倍或100~200倍分別稱量，配成濃縮液，這種濃縮液叫做培養基母液。3.4.1母液的配制與保存

其中大量元素倍數略低，一般為10－20倍，微量元素和有機成分等一般為100－200倍。

如制備MS培養基母液所需的各類物質的量見下表，以供參考。母液Ⅰ

mg／LNH4NO3

33

000KNO3

38

000CaCl2·2H2O

8

800MgSO4·7H2O

7

400KH2PO4

3

400母液ⅡKI