2024/3/2522《動物細胞工程》課件10動物胚胎或幼齡動物的組織、器官胰蛋白酶剪碎單個細胞加培養液制成細胞懸浮液10代細胞部分細胞“癌變”，遺傳物質改變，無限傳代動物細胞培養不能最終培養成動物體50代細胞原代培養傳代培養細胞貼壁剝離、分瓶細胞株細胞細胞系1、過程：細胞懸浮液10代細胞50代細胞無限傳代原代培養傳代培養細胞株細胞系如何界定原代培養和傳代培養；細胞株和細胞系？多數組織細胞固定在表面生長和分裂。隨細胞增多，細胞就會停止分裂增殖遺傳物質改變幾個有關概念：原代培養：從機體取出后立即培養的細胞為原代細胞。培養的第1代細胞與傳10代以內的細胞稱為原代細胞培養。傳代培養：將原代細胞從培養瓶中取出，配制成細胞懸浮液，分裝到兩個或兩個以上的培養瓶中繼續培養，稱為傳代培養。細胞株：原代細胞一般傳至10代左右細胞生長停滯，大部分細胞衰老死亡，少數細胞存活到40~50代，這種傳代細胞為細胞株。細胞系：細胞株傳代至50代后又出現細胞生長停滯狀態，只有部分細胞由于遺傳物質的改變，使其在培養條件下可以無限制傳代，這種傳代細胞為細胞系。細胞株和細胞系的區別：細胞系的遺傳物質改變，具有癌細胞的特點，失去接觸抑制，容易傳代培養。1、無菌、無毒：

2、全部的營養物質：

3、適宜的溫度和PH值：

4、必要的氣體條件：（添加一定量的抗生素，定期更換培養液）（葡萄糖、氨基酸、無機鹽、維生素、動物血清等。）保證細胞順利的生長增殖36.5+（-）0.5度,7.2-7.4O2和CO2（95%空氣和5%CO2）2、條件：維持培養液的PH元貝駕考ybjx元貝駕考2016科目一科目四

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3、應用：大規模培養生產生物制品（病毒疫苗、干擾素、單克隆抗體）作為基因工程中的受體細胞培養的動物細胞可以用于檢測有毒物質，判斷某種物質的毒性用于生理、病理、藥理等方面的研究，為治療和預防疾病提供理論依據細胞的全能性細胞株、細胞系植株培養結果獲得細胞或細胞產物快速繁殖、培育無病毒植株等培養目的葡萄糖、動物血清蔗糖、植物激素培養基特有成分液體培養基固體培養基培養基性質細胞增殖原理動物細胞培養植物組織培養比較項目植物組織培養和動物細胞培養的比較1.動物細胞工程技術的基礎是（）A、動物細胞融合B、胚胎移植C、動物細胞培養 D、核移植2.下列有關動物細胞培養的敘述中正確的是（）A、動物細胞培育的目的是獲得大量的細胞分泌蛋白B、動物細胞培養前要用胰蛋白酶使細胞分散C、細胞的癌變發生于原代培養向傳代培養的過渡過程中D、培養至50代后的傳代細胞稱為細胞株CB

3.下列關于動物細胞培養的敘述中，錯誤的是（）A、用于培養的細胞大多取自胚胎或幼齡動物的器官或組織B、將所取的組織先用胰蛋白酶等進行處理使其分散成單個細胞C、在培養瓶中要定期用胰蛋白酶使細胞從瓶壁上脫離，制成懸浮液D、動物細胞培養只能傳50代左右，所培養的細胞會衰老死亡D

4.下圖是動物細胞培養的基本過程示意圖。請據此回答：（1）容器A中放置的是動物器官或組織。它一般取自

______________________。（2）容器A中的動物器官或組織首先要進行的處理是

，然后用

酶處理，這是為了使細胞分散開來，這樣做的目的是

（3）培養首先在B瓶中進行，瓶中的培養基成分有

_______________________________________等。幼齡動物或胚胎的組織或器官剪碎組織

胰蛋白

使細胞與培養液充分接觸

葡萄糖、氨基酸、水、無機鹽、促生長因子與微量元素和動物血清

在此瓶中培養一段時間后，有許多細胞衰老死亡，這是培養到第

代，到這時的培養稱為_____________。⑷為了把B瓶中的細胞分裝到C瓶中，用

處理然后配置成

，再分裝。⑸在C瓶中正常培養了一段時間后，發現細胞全部死亡，原因是

10原代培養胰蛋白酶

細胞懸液

細胞沒有發生癌變

核移植技術和克隆動物

1.概念：將動物的一個細胞的細胞核，移入一個已經去掉細胞核的卵母細胞中，使其重組并發育成一個新的胚胎，這個新的胚胎最終發育成動物個體。核移植（難度高）受體細胞：MⅡ期的卵母細胞胚胎細胞核移植：體細胞核移植：細胞分化程度低，恢復全能性容易用核移植的方法得到的動物稱為克隆動物原理：動物體細胞核的全能性。取供體細胞取卵母細胞

供體細胞培養培養到MⅡ中期

卵母細胞去核

供體細胞注入去核的卵母細胞

供體核進入受體卵母細胞

重組胚胎

代孕母牛

生出與供體遺傳物質基本相同的個體2.過程：3.克隆動物的研究意義：1.克隆動物作為生物反應器，生產醫用蛋白2.改良動物品種3.治療人類疾病，作為供體4.保護瀕危動物4．體細胞核移植技術存在的問題：1.許多克隆動物表現出遺傳和生理缺陷，如體型過大，異常肥胖，發育困難，免疫失調等。2.成功率非常低及克隆動物食品的安全性問題。1.下列哪—項屬于克隆（）A．將雞的某個DNA片段整合到小鼠的DNA分子中B．將抗藥菌的某基因引入草履蟲的細胞內C．將鼠骨髓瘤細胞與經過免疫的脾細胞融合成雜交瘤細胞D．將某腫瘤細胞在體外培養繁殖成一個細胞系D2.（多選）美國杜克大學醫療中心的一個研究小組利用成年豬的動脈血管細胞和模擬胚胎環境的新型生物反應器,成功地在實驗室里培育出新的動脈血管，這種血管的外形和功能都與真的血管一樣,這一研究成果是生物組織培養領域的重大進展。下列關于以上技術的敘述中，正確的是（）A．屬于“克隆”B．可能要利用去核卵細胞C．關鍵是激發血管細胞的全能性D．關鍵是激發血管細胞發育成血管的潛能ABD3.從母羊甲的體細胞中取出細胞核，注入到母羊乙去掉核的卵細胞中，融合后的細胞經卵裂形成早期胚胎，再植入到另一只母羊丙的子宮內，出生小羊的大多數性狀 （）A、難以預測B、像甲C、像乙D、像丙4.生物技術的發展速度很快，已滅絕生物的“復生”將不再是神話。如果世界上最后一只野驢剛死亡，以下較易成功“復生”野驢的方法是（）A．將野驢的體細胞取出，利用組織培養技術，經脫分化、再分化，培育成新個體B．將野驢的體細胞兩兩融合，再經組織培養培育成新個體C．取出野驢的體細胞核移植到母家驢的去核卵細胞中，經孕育培養成新個體D．將野驢的基因導入家驢的受精卵中，培育成新個體B

C

5.下圖所示為用兩棲動物卵所做的實驗圖解，據圖回答下列問題：⑴蝌蚪腸上皮細胞核中含有青蛙發育所需的_________，重新組合的細胞相當于蛙的______

細胞，經過____________和________________形成組織和器官。全部基因

受精卵

細胞分裂細胞分化⑵本實驗結果說明_____________________具有全能性，圖中A過程采用的技術手段稱做_______________。

動物體細胞核核移植技術動物細胞融合1.過程：動物細胞A動物細胞B誘導，融合2個完整的雜交細胞AB有絲分裂（膜融合、質融合）（核融合）注意：動物細胞的融合也需要把多個兩種細胞放在一起，讓它們隨機融合后，再從中篩選雜交細胞2.意義：突破了有性雜交方法的局限，使遠緣雜交（種間、屬間、科間、動植物之間）成為可能。3.應用：成為研究細胞遺傳、細胞免疫、腫瘤和生物新品種培育等的重要手段特別是利用雜交瘤技術制造單克隆抗體植物體細胞雜交和動物細胞融合比較比較項目植物體細胞雜交動物細胞融合原理融合前處理誘導方法用途細胞膜的流動性、植物細胞的全能性細胞膜的流動性用纖維素酶、果膠酶去壁用胰蛋白酶使細胞分散物理、化學方法物理、化學、生物方法獲得部分或完整植株主要用于制備單克隆抗體1、基因型為Aa與基因型為Bb的動物體細胞混合，用滅活的仙臺病毒處理后，不可能獲得下列哪種基因型的細胞A．AAaaB．AaBbC．AabbD．BBbb2、動物細胞融合和植物體細胞雜交的比較中，正確的是①誘導融合的方法完全相同②所用的技術手段不相同③所采用的原理完全相同④都能形成雜種細胞A.①② B.①③C.②④ D.③④3、動物細胞融合和植物原生質體融合比較，在動物細胞融合中有特殊性的是A、融合的原理 B、融合的優點C、融合的誘導手段 D、融合的過程C

C

C

4.科學工作者用綠色和紅色熒光材料，分別標記人和鼠的細胞膜上的蛋白質。當兩個標記細胞融合成一個細胞后，起初一半膜發出綠色熒光，另一半膜發出紅色熒光，一段時間后，兩種顏色的熒光點均勻分布，如圖所示。請分析回答：⑴該實驗結果說明了細胞膜

，這是因為⑵若在兩個細胞融合成一個細胞后，將融合細胞置于0℃條件下再保持40min，則融合細胞仍然是一半膜發綠色熒光，另一半膜發紅色熒光，這說明具有一定的流動性

構成細胞膜的磷脂分子和蛋白質大都是可以運動的膜的流動性受溫度影響，在低溫下分子的運動受抑制單克隆抗體1.單克隆抗體制備過程誘導其融合的方法有哪些？融合后培養液中有幾種細胞怎樣篩選出雜交瘤細胞，雜交瘤細胞有何優點注射抗原的目的是什么為何要進行克隆化培養和專一抗體檢測，多次篩選大量增殖雜交瘤細胞獲得單克隆抗體的方法過程：B淋巴細胞骨髓瘤細胞誘導融合B-B細胞B-瘤細胞瘤-瘤細胞選擇培養雜交瘤細胞（B-瘤細胞）克隆化培養抗體檢測產生所需抗體的雜交瘤細胞體外培養小鼠腹腔內增殖單克隆抗體2、關于單克隆抗體，下列敘述不正確的是A、可以制成診斷盒．用于疾病的珍斷B、可以與藥物結合，用于病變細胞的定向治療C、可以利用基因工程技術生產D、可以在生物體內生產，不能體外生產3、“生物導彈”是指A、單克隆抗體B、帶有特定藥物的單克隆抗體C、雜交細胞D、B淋巴細胞D

B

4.單克隆抗體技術在疾病診斷和治療以及生命科學研究中具有廣泛的應用。下列關于單克隆抗體的敘述，錯誤的是 A．特異性強、靈敏度高B．與抗癌藥物結合可制成“生物導彈”C．體外培養B淋巴細胞可大量分泌單克隆抗體D．由效應B細胞與骨髓瘤細胞融合而成的雜交瘤細胞分泌C

5.下圖為細胞融合的簡略過程（只考慮兩個細胞的融合）請據圖回答：

I．若A、B是基因型分別為rrHH、RRhh兩個煙草品種細胞的花粉，且這兩對基因位于非同源染色體上，由于一對隱性純合基因(rr或hh)的作用，在光照強度大于800勒克斯時，都不能生長。⑴實驗開始時必須用

除去不利于原生質體融合的物質。⑵實驗中除獲得雜種細胞外，還有基因型為

的融合細胞。纖維素酶和果膠酶rrHH、RRhh

⑶設計一方法（不考慮機械方法），從培養液中分離出雜種細胞，方法：

⑷將雜種細胞培養成雜種植株依據的理論基礎是

。II．若該過程是制備治療“SARS”病毒的單克隆抗體，A為人B淋巴細胞（染色體組成為2A＋XX=46），B為鼠骨髓瘤細胞（染色體組成為2A＋XX=40）⑸用單克隆抗體制成“生物導彈”主要利用了抗體的

特性。⑹A細胞來自于

，雜種細胞C共有

個染色體組。⑺雜交瘤細胞在體外培養時與植物組織培養的主要區別是培養基要用

培養基。（物理狀態），培養基中除了添加必要的營養物質為還需加入

。置大于800勒克斯光照下培養，收集分化的細胞團細胞的全能性

抗體與抗原結合，發揮特異性免疫效應

非典患者

4

液體動物血清

6.右圖是制備分泌抗X抗體的過程，根據圖解回答問題：⑴給小鼠注射抗原的目的是__________________。⑵在單克隆抗體制備過程中之所以選用B淋巴細胞和骨髓瘤細胞