血清總蛋白測定.學習要求掌握血清總蛋白的參考區間和臨床意義321掌握雙縮脲法測定血清總蛋白的基本原理和方法了解血清總蛋白的測定方法.1血清總蛋白測定的理論依據假定：

1、所有蛋白質都是單純的多肽鏈，糖脂類和金屬有機物等不計在內，含氮量平均為16%。2、各種蛋白質與化學試劑的反響性一致。.血清總蛋白的測定方法方法凱氏定氮法原理

測定樣品中氮含量后，根據蛋白質平均含氮量16%計算出蛋白質的濃度。特點經典的蛋白質測定方法，結果準確性好，精密度高，是公認的參考方法，用于標準蛋白質的定值和校正其他方法。但操作復雜，費時，不適合臨床常規測定。.三聚氰胺化學式：C3N6H6，分子量：126。含氮量達66%，參加假奶粉后，會使假奶粉總體含氮量升高，到達國家標準。毒奶粉事件——三聚氰胺.方法酚試劑法原理

蛋白質中的酪氨酸和色氨酸可使磷鎢酸和磷鉬酸還原為鎢藍和鉬藍，進行比色測定。特點靈敏度高，可用于微量蛋白質的測定。適合測定單一蛋白質，易受還原性化合物的干擾。.方法直接紫外吸收法原理

蛋白質中芳香族氨基酸含有共軛雙鍵，在280nm處有一吸收峰進行比色測定。特點靈敏度高，不破壞樣品，可保持樣品生物活性、回收全部蛋白質。準確性受芳香族氨基酸含量影響，不適合組成復雜的蛋白質標本測定。.方法染料結合法原理

在酸性條件下，帶正電荷的蛋白質可與染料陰離子反應而產生顏色改變。特點簡便、快速、靈敏。但不同蛋白質與染料的結合力不一致，染料有吸附作用，可造成儀器污染。氨基黑、麗春紅、考馬斯亮蘭白蛋白常用溴甲酚綠或溴甲酚紫等染料結合法測定。.方法比濁法原理

三氯乙酸、磺基水楊酸等酸類能與蛋白質結合而產生微細沉淀，由此引起的懸浮液濁度大小與蛋白質的濃度成正比。特點操作簡便、靈敏度高，可用于尿液和腦脊液蛋白質濃度低的樣品測定。但各種蛋白質形成的濁度有較大的差別，影響濁度形成的干擾因素多。.方法雙縮脲法原理

蛋白質中的連續肽鍵在堿性溶液中可與銅離子作用產生紫色的絡合物，再進行比色測定。特點對各種蛋白質呈色基本相同，特異性和準確度好，顯色穩定，試劑單一，方法簡便，是臨床常規測定中首選方法。但靈敏度較低。.血清TP常用雙縮脲法測定，凱氏定氮法可作為血清總蛋白二級標準品的定值方法。其他方法可用于尿液、腦脊液、胸腹腔積液、組織提取液、純化蛋白等樣品中TP的測定。本實驗采用雙縮脲法測定血清中總蛋白含量。.實驗原理..試劑與器材試劑與標本1、6mol/LNaOH溶液2、雙縮脲試劑〔硫酸銅結晶、酒石酸鈉鉀、碘化鉀〕3、雙縮脲空白試劑4、60~70g/L蛋白質標準液5、血清主要器材

分光光度計.操作步驟加入物空白管標準管×2測定管×2蒸餾水0.05－－標準液－0.05－血清－－0.05雙縮脲試劑4.04.04.0混勻后于37℃水浴15min，以蒸餾水調零，540nm處測定各管吸光度。標準液濃度：70.0g/L。.結果計算血清總蛋白濃度（g/L）=測定管吸光度標準管吸光度×標準液濃度參考區間正常成人血清總蛋白濃度：立位行走：64~83g/L靜臥：60~78g/L新生兒總蛋白濃度較低，隨后逐月上升，1年后達成人水平。.臨床意義血清TP濃度下降：常見于血清白蛋白含量下降，少數由免疫球蛋白含量的明顯下降引起；其他血清蛋白質減少，一般不能在TP濃度中得到反映。血清TP濃度增高：主要見于慢性炎癥等所致的多克隆免疫球蛋白增多，以及漿細胞病時單克隆免疫球蛋白的顯著增多。.本卷須知雙縮脲試劑中酒石酸鉀鈉的作用是結合銅離子，維持銅離子在堿性溶液中的溶解度，參加碘化鉀可以防止銅離