干貨：細(xì)胞生長的檢測方法大總結(jié)（二）在細(xì)胞生長的檢測方法大總結(jié)（一）中，我們了解到在研究基因功能或者篩選藥物在某種疾病中的作用研究中檢測細(xì)胞生長增殖曲線的方法今天，醫(yī)學(xué)方小編將繼續(xù)向大家總結(jié)一下有關(guān)細(xì)胞生長狀況的功能學(xué)實驗?？寺⌒纬蓪嶒灴寺⌒纬陕始?xì)胞接種存活率只表示接種細(xì)胞后貼壁的細(xì)胞數(shù)，但貼壁后的細(xì)胞不一定每個都能增殖和形成克隆。而形成克隆的細(xì)胞必為貼壁和有增殖活力的細(xì)胞。克隆形成率可以反映細(xì)胞群體依賴性和增殖能力兩個重要性狀。由于細(xì)胞生物學(xué)性狀不同，細(xì)胞克隆形成率差別也很大。一般來說，初代培養(yǎng)細(xì)胞克隆形成率弱，傳代細(xì)胞系強(qiáng)；二倍體細(xì)胞克隆形成率弱，轉(zhuǎn)化細(xì)胞系強(qiáng)；正常細(xì)胞克隆形成率弱，腫瘤細(xì)胞強(qiáng)。并且克隆形成率與接種密度有一定關(guān)系，做克隆形成率測定時，接種細(xì)胞一定要分散成單細(xì)胞懸液，直接接種在碟皿中，持續(xù)一至兩周，隨時檢查，換液，到細(xì)胞形成克隆時終止培養(yǎng)。1平板克隆形成試驗基本步驟（1）取對數(shù)生長期的單層培養(yǎng)細(xì)胞，用胰酶消化并吹打成單個細(xì)胞，把細(xì)胞充分懸浮在培養(yǎng)液中備用。⑵將細(xì)胞懸液作梯度倍數(shù)稀釋，以適當(dāng)?shù)募?xì)胞密度（根據(jù)培養(yǎng)細(xì)胞的增殖能力）接種于培養(yǎng)皿中。一般，每六孔板一孔以50、100、200個細(xì)胞的梯度密度分別接種，并放置于平面輕輕十字轉(zhuǎn)動，使細(xì)胞分散均勻。置培養(yǎng)箱中，靜置培養(yǎng)1?3周。（3）經(jīng)常觀察，當(dāng)培養(yǎng)皿中出現(xiàn)肉眼可見的克隆時，終止培養(yǎng)。棄去上清液，用PBS小心浸洗2次。每孔加入預(yù)冷的純甲醇1mL，室溫固定15-30分鐘。然后去固定液，加適量結(jié)晶紫染色液，染10?30分鐘，然后用PBS或者雙蒸水緩慢輕柔洗去染色液，空氣干燥。(4)將平皿倒置并疊加一張帶網(wǎng)格的透明膠片，用肉眼直接計數(shù)克隆，或在顯微鏡(低倍鏡)計數(shù)大于10個細(xì)胞的克隆數(shù)。也可以用imageJ等計算機(jī)軟件自動統(tǒng)計，最后計算克隆形成率。克隆形成率二克隆數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)X100%注意事項平板克隆形成試驗方法簡單，適用于貼壁生長的細(xì)胞。適宜底物為玻璃的、塑料瓶皿。試驗成功的關(guān)鍵是細(xì)胞懸液的制備和接種密度。細(xì)胞一定要分散得好，不能有細(xì)胞團(tuán)，接種密度不能過大。軟瓊脂培養(yǎng)克隆形成試驗圖片來源網(wǎng)絡(luò)軟瓊脂培養(yǎng)法常用檢測腫瘤細(xì)胞和轉(zhuǎn)化細(xì)胞系，懸浮細(xì)胞一般用軟瓊脂培養(yǎng)克隆形成?；静襟E⑴取對數(shù)生長期細(xì)胞，用胰蛋白酶消化并輕輕吹打，使之成為單細(xì)胞，作活細(xì)胞計數(shù)，用培養(yǎng)液調(diào)整細(xì)胞密度根據(jù)實驗要求作梯度倍數(shù)稀釋。用蒸餾水分別制備出0.5-1.2%和0.3-0.7%兩個濃度的低溶點瓊脂糖液，高壓滅菌后，維持在401中不會凝固。按1:1比例使0.5-1.2%的瓊脂糖和2x細(xì)胞培養(yǎng)基混合后，取3mL混合液注入直徑6cm平皿中(10cm平皿加7?10mL)，冷卻凝固，可作底層瓊脂置溫箱中備用。按1:1比例讓0.3-0.7%的瓊脂糖和2x細(xì)胞培養(yǎng)基在無菌試管中相混以后，再向管中加入0.2mL的細(xì)胞懸液，充分混勻，注入鋪有1.2%瓊脂糖底層平皿中，形成雙瓊脂層。待上層瓊脂凝固后，置入細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)10?14天。⑸把平皿放置在倒置顯微鏡下，觀察細(xì)胞克隆數(shù)。計算形成率。注意事項試驗中瓊脂與細(xì)胞相混時，瓊脂溫度不宜超過401。接種細(xì)胞的密度每平方厘米不超過35個，一般6cm的平皿接種1000個細(xì)胞。正常細(xì)胞在懸浮狀態(tài)下