1.格式，本標(biāo)準(zhǔn)編寫要求與格式按GB/T1.1-2009《標(biāo)準(zhǔn)化工作原則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)的結(jié)構(gòu)和編寫》的規(guī)定。2、關(guān)于銀耳多糖的定義與標(biāo)準(zhǔn)范圍本標(biāo)準(zhǔn)適用于以擔(dān)子菌門、銀耳綱、銀耳目、銀耳科、銀耳屬真菌銀耳（TremellafuciformisBerk.）的子實(shí)體為原料，用水為溶媒提取，提取液經(jīng)分離、純化后，干燥而成的多糖產(chǎn)品（下文簡稱本品）。本品的主要成份為銀耳子實(shí)體中提取的多糖組份，提取工藝核心就是水提，分離純化工藝可能包括物理的過濾、離心、沉淀等，也可能包括化學(xué)上的醇沉、酶解等，其中醇沉工藝是不可少的，一般用70%以上的乙醇進(jìn)行沉淀分離。所以本品實(shí)質(zhì)上是銀耳中能溶于熱水，但在70%以上酒精中不溶或微溶的多糖組份。根據(jù)文獻(xiàn)[2][5]，其分子量為105-106級(jí)。3、標(biāo)準(zhǔn)的出發(fā)點(diǎn)與主要依據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)中銀耳多糖的應(yīng)用方向主要有食品、化妝品、藥品等，因此本標(biāo)準(zhǔn)在制訂過程中分兩個(gè)規(guī)格進(jìn)行考量。食品規(guī)格的重點(diǎn)考慮其食品安全指標(biāo)，要求原材料應(yīng)符合食品標(biāo)準(zhǔn)，銀耳應(yīng)符合GB7096，生產(chǎn)過程應(yīng)符合衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)GB14881相關(guān)要求，成品銀耳多糖相關(guān)安全指標(biāo)也是參照國家相關(guān)的食品安全標(biāo)準(zhǔn)而制定。化妝品規(guī)格項(xiàng)目更多是按《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》進(jìn)行制定。同時(shí)，食品級(jí)銀耳多糖參照了上海市食品添加劑和配料行業(yè)協(xié)會(huì)團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)《銀耳多糖》T/SFABA4-2018[7]相關(guān)數(shù)據(jù)，化妝品銀耳多糖參照了上海輝文生物技術(shù)股份有限公司企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)《銀耳異聚多糖》Q/310115000091C004-2022[8]。4、關(guān)于技術(shù)指標(biāo)4.1感官特性：感官特性主要是根據(jù)產(chǎn)品固有特性來制定。銀耳多糖的色澤與生產(chǎn)工藝有關(guān)，采用凍干則顯示為有光澤的白色，仔細(xì)觀察有些半透明狀；提取工藝如采用其它方式干燥就顯白色或類白色。本品所帶雜質(zhì)氧化會(huì)形成黃色，因此在純度不好的時(shí)候會(huì)帶些微黃色。本品為無定形的粉末或顆粒，干燥或粉碎方式會(huì)產(chǎn)生不同的外觀形態(tài)。4.2關(guān)于鑒別：多糖在自然界中廣泛存在，種類多，并且又缺少專屬性很強(qiáng)的含量檢測(cè)方法，混入其它多糖會(huì)對(duì)銀耳多糖含量檢測(cè)造成干擾。因此本標(biāo)準(zhǔn)需要對(duì)銀耳多糖進(jìn)行鑒別，方能體現(xiàn)銀耳多糖的特征，區(qū)別銀耳多糖與其它多糖。從文獻(xiàn)得知[2]，銀耳多糖是甘露糖為主鏈的酸性雜多糖。本標(biāo)準(zhǔn)從銀耳多糖的組分與紅外特征兩方面進(jìn)行鑒別研究，最終采用PMP柱前衍生法與碘液顯色法進(jìn)行鑒別。該鑒別的目的有三個(gè)1）建立銀耳多糖中單糖組分特征，用以區(qū)別銀耳多糖與其它多糖。（2）鑒別樣品中是否有單糖存在。（3）碘液顯色法鑒別樣品中是否有淀粉糊精類雜質(zhì)的存在。4.2.1關(guān)于銀耳多糖單糖組分，為了找到銀耳多糖的組份特征，我們結(jié)合文獻(xiàn)[1]的方法對(duì)銀耳多糖進(jìn)行催化水解，再采用柱前衍生法以高效液相對(duì)降解液進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果可在銀耳多糖中檢出甘露糖、葡萄糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、木糖、巖藻糖等單糖。將部分相對(duì)典型的圖譜采用中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)（2012版）軟件進(jìn)行分析，以甘露糖、葡萄糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、木糖、巖藻糖的6個(gè)峰進(jìn)行多點(diǎn)校正后，得到一條銀耳多糖單糖組份的對(duì)照指紋圖譜，相關(guān)截圖與數(shù)據(jù)如下：圖1采用中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)（2012版）軟件，對(duì)銀耳多糖樣品以及單糖對(duì)照品混合樣圖譜處理結(jié)果截圖表1樣品的主要保留時(shí)間與峰面積匹配數(shù)據(jù)編號(hào)保留時(shí)間峰對(duì)應(yīng)單糖樣品S1樣品S2樣品S3樣品S4樣品S5樣品S6樣品S7樣品S8對(duì)照指紋圖面積占比09.0甘露糖1葡萄糖醛酸223.1葡萄糖326.3半乳糖428.3木糖536.1巖藻糖注文獻(xiàn)數(shù)據(jù)：1、DeqiangWang等研究，銀耳多糖組份中甘露糖、葡萄糖醛酸、葡萄糖、木糖和巖藻糖的質(zhì)量比為6.8:1:0.15:1.5:0.6[2]。2、魏正勛采用GC-MS檢測(cè)銀耳多糖單糖組成甘露糖、木糖、巖藻糖、葡萄糖含量百分比分別為57.48%、18.97%、14.84%、8.7%[3]；3、顏軍等研究其TPP2中甘露糖∶鼠李糖∶葡萄糖∶半乳糖∶木糖的摩爾比為77∶10∶3∶1∶15[1]。4、馬素云等研究其TFP1主要由甘露糖、葡萄糖醛酸與葡萄糖、木糖和巖藻糖等單糖組成，根據(jù)峰面積計(jì)算其物質(zhì)的量比約為5.78∶0.7∶1.1∶1[4]綜合我們的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)數(shù)據(jù)，我們都可以看到銀耳多糖的單糖組成有甘露糖、葡萄糖醛酸、木糖、巖藻糖、葡萄糖、半乳糖等。但基本一致的地方就是甘露糖、木糖、巖藻糖、葡萄糖醛酸四個(gè)單糖含量占比較大，甘露糖含量范圍45-77%。考慮到銀耳產(chǎn)地差別、銀耳多糖提取工藝的不同、柱前衍生法前處理復(fù)雜性，組份檢測(cè)數(shù)據(jù)重現(xiàn)性有可能會(huì)出差波動(dòng)。最終在鑒別中提出相對(duì)容易操作的要求，要求檢出甘露糖、木糖、巖藻糖、葡萄糖醛酸，同時(shí)要求甘露糖的峰面積占比不得少于40%。另外，考慮到單糖也是銀耳多糖產(chǎn)品比較常見的雜質(zhì)，故這里加了一條未經(jīng)水解供試品高效液相色譜圖中不得出現(xiàn)單糖特征峰。4.2.2關(guān)于紅外光譜，在紅外鑒別方面我們也做了些工作。本品的紅外特征為在3400cm-1附近有一個(gè)比較寬的O-H伸縮振動(dòng)吸收，2800-2900cm-1有C-H伸縮振動(dòng)吸收，1400-1200cm-1可以看到C-H角振動(dòng)吸收，上述吸收基本上是糖類的通性特征。1500cm-1附近有糖醛酸C=O振動(dòng)吸收，1000cm-1以下的一些吸收峰能顯示出甘露糖的特征，但是不同的文獻(xiàn)以及我們的樣品做出來的結(jié)果差別較大，考慮到重現(xiàn)性不好，故沒將紅外光譜列入標(biāo)準(zhǔn)。圖2我們樣品的紅外吸收?qǐng)D3文獻(xiàn)[4]圖譜的紅外吸收?qǐng)D4文獻(xiàn)[2]圖譜的紅外吸收4.2.3關(guān)于碘液顯色，因淀粉糊精均是比較容易混入銀耳多糖的雜質(zhì)，該法簡單易行可快速檢查淀粉糊精類的雜質(zhì)，故增設(shè)該項(xiàng)。4.3關(guān)于理化指標(biāo)：4.3.1水分，本品易吸濕，貯存期內(nèi)水分含量易上升，這里參照上海市食品添加劑和配料行業(yè)協(xié)會(huì)團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)《銀耳多糖》T/SFABA4-2018的理化指標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)，將限度制定為10.0%。4.3.2灰分，樣品檢測(cè)發(fā)現(xiàn)本品的灰分會(huì)到5.0-6.5%左右，灰分為與食品安全相關(guān)的指標(biāo)，這里按8%為標(biāo)準(zhǔn)。T/SFABA4中的限度為10.0%,相比之下會(huì)嚴(yán)一些。4.3.2pH，本品為直接水提，為酸性雜多糖，5.5-7.5可滿足要求。4.3.3鉛，參照GB2762《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中污染物限量》“食用菌及其制品”的食品類別制定，≤1.0mg/kg。4.3.4總砷，按GB2762《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中污染物限量》“食用菌及其制品”的食品類別中總砷的限度為≤0.5mg/kg。4.3.5總汞，按GB2762《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中污染物限量》“食用菌及其制品：銀耳制品”的食品類別中總汞的限度為≤0.1mg/kg。4.3.6總鎘，參照GB2762《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中污染物限量》“食用菌及其制品，銀耳制品”的食品類別制定，≤0.5mg/kg。4.4關(guān)于衛(wèi)生要求衛(wèi)生指標(biāo)的菌落總數(shù)、大腸菌群、霉菌參照GB7101《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)飲料》中固體飲料要求制定；沙門氏菌根據(jù)GB29921《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中致病菌限量》中的飲料而制定；米酵菌酸根據(jù)GB7096《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食用菌及其制品》制定。5、關(guān)于多糖含量采用硫酸苯酚法檢測(cè)，以葡萄糖為對(duì)照，銀耳多糖含量要求為不得小于80%。關(guān)于這個(gè)多糖含量檢測(cè)，還是有很多地方不夠理想，但目前也找不到更好的指標(biāo)，主要問題如下：5.1關(guān)于多糖含量（以葡聚糖計(jì)）的說明從組分分析可知，銀耳多糖是一種雜多糖，里面有甘露糖、葡萄糖醛酸、木糖、巖藻糖、葡萄糖、半乳糖等，而且分子量有大有小，是銀耳中多種多糖組成的混合物總稱，對(duì)于混合物要準(zhǔn)確檢測(cè)含量非常困難，只能說制定一個(gè)指標(biāo)來衡量其多糖的純度。T/SFABA3中以甘露糖為對(duì)照，硫酸苯酚法檢測(cè)多糖含量來檢測(cè)銀耳多糖含量，最終結(jié)果乘以1.25來計(jì)算，但對(duì)于這個(gè)1.25系數(shù)從何而來很難解釋。甘露糖雖然在銀耳多糖中占比較高，但同樣無法代表銀耳多糖，反復(fù)權(quán)衡以后，還是采用比較成熟的葡萄糖為對(duì)照硫酸苯酚法進(jìn)行檢測(cè)，最后剩以0.9折成葡聚糖來計(jì)算。甘露糖與葡萄糖均為6碳糖，屬同分異構(gòu)體，折算系數(shù)一樣。另外，有建議名字改為“銀耳多糖含量（以葡聚糖計(jì)）”這個(gè)是否合適有待大家討論。5.2關(guān)于多糖含量檢測(cè)中醇沉的說明常規(guī)的多糖檢測(cè)前處理常常有進(jìn)行醇沉，我們?cè)趯?shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，銀耳多糖在乙醇中有一定溶解度[5]，含量檢測(cè)時(shí)如果再次醇沉處理，回收率非常低。采用加大稱樣量的方法可以彌補(bǔ)銀耳多糖在乙醇中的微量溶解問題，但帶來的問題是大于1%的銀耳多糖水溶液非常粘，接近果凍了，無法繼續(xù)加大稱樣量，故很難操作。由于本品在提取中已經(jīng)有70%乙醇處理，并且在鑒別項(xiàng)中已有要求不得檢出單糖，我們?cè)谥贫ê繖z測(cè)方法時(shí)沒要求再次醇沉處理。T/SFABA3中也是沒有進(jìn)行醇沉處理。5.3關(guān)于多糖含量偏高問題在樣品送檢含量過程中，我們發(fā)現(xiàn)使用該方法測(cè)出來的多糖含量偏高，我們自己檢的時(shí)候濕品一般是85%到90%，沒折成干品，覺得這數(shù)據(jù)可以接受。送第三方檢后發(fā)現(xiàn)折成干品含量偏高，華測(cè)檢99%,普尼檢98%。這可能與本品其的單糖組成復(fù)雜有關(guān)，不同的單糖顯色有區(qū)別；另外本品組分中含一定量的木糖，木糖為五碳糖，木糖與木聚糖折算系數(shù)大約為0.88，并不到0.9。6、關(guān)于化妝品規(guī)格該標(biāo)準(zhǔn)早期并沒有考慮到化妝品規(guī)格，后來發(fā)現(xiàn)銀耳多糖在化妝品使用量更大，很多化妝品企業(yè)加入到該標(biāo)準(zhǔn)的起草中來，因此增加化妝品規(guī)格。化妝品規(guī)格的項(xiàng)目區(qū)別為：依據(jù)《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》制定鉛、砷、汞、鎘、與微生物菌落總數(shù)、霉菌和酵母菌總數(shù)、耐熱大腸菌群、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌標(biāo)準(zhǔn)，同時(shí)增加黏度、電導(dǎo)率、透光率、氮含量項(xiàng)目。我們的起草單位海旭福公司與百肽德公司提供了很多的參數(shù)依據(jù)，詳細(xì)如下：6.1汞，參照《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》2015年版制定，限量為1mg/kg。6.2鉛，參照《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》2015年版制定，限量為10mg/kg。6.3砷，參照《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》2015年版制定，限量為2mg/kg。6.4鎘，參照《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》2015年版制定，限量為5mg/kg。6.5黏度，黏度是對(duì)應(yīng)的可能是銀耳多糖的分子量，與保濕功能可能有關(guān)系，另外黏度是化妝品企業(yè)進(jìn)行配方研究的重要考慮因素，因此加入該項(xiàng)目，使用企業(yè)可根據(jù)要求進(jìn)行定制。這里參照海旭福公司的建議，限度定為為不小于0.1Pa·s（0.5%水溶液，25℃)。輝6.6電導(dǎo)率，電導(dǎo)率是衡量銀耳多糖中電解質(zhì)類雜質(zhì)的一個(gè)指標(biāo)，在配方研究中，電導(dǎo)率對(duì)保持化妝品乳液穩(wěn)定性非常重要，這里參照百肽德公司的建議，限度定為500us/cm（0.1%水溶液，25℃)。輝文公司企標(biāo)無該項(xiàng)目。6.7透光率，透光率是體現(xiàn)銀耳多糖純度與溶解度的一個(gè)指標(biāo)，參照海旭福公司的建議，限度定為90%（0.5%水溶液），與輝文公司企標(biāo)一樣。6.8氮含量，蛋白質(zhì)是銀耳多糖的一個(gè)常見雜質(zhì)，以氮含量指標(biāo)來控制，對(duì)化妝品而言蛋白質(zhì)是潛在過敏原，因此增加該項(xiàng)目，限度定為不得過0.5%，與輝文公司企標(biāo)一樣。參考文獻(xiàn)：[1]顏軍，等.柱前衍生HPLC分析銀耳多糖的單糖組成[J].中國測(cè)試，2011，37（144-46.[2]WangD,WangD,YanT,etal.NanostructuresassemblyandthepropertyofpolysaccharideextractedfromTremellaFuciformisfruitingbody[J].IntJBiolMacromol,2019,137:751-760..[3]魏正勛.銀耳子實(shí)體多糖的提取分離、結(jié)構(gòu)鑒定及生