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文檔簡介
PCR技術原理及其應用本課件詳細講解了PCR技術的原理和應用，包括優化條件、擴增曲線、反應體系構成、標準曲線法等重要內容。歡迎學習！PCR技術是什么？定義PCR是利用酶的催化作用，對DNA特定序列進行體外擴增的技術。作用PCR技術可以擴增一條DNA序列，獲取足夠的DNA產物用于檢測、純化和克隆。歷史PCR技術是由KaryMullis于1983年發明的，為其贏得了1993年的諾貝爾化學獎。PCR擴增原理雙鏈DNA解旋在高溫下，DNA雙鏈斷裂，通過引物結合模板DNA，引導酶鏈式擴增。酶催化反應引物結合至模板上后，DNA聚合酶催化反應形成新的堿基鏈。反應體系構成PCR反應體系一般包括DNA模板、引物、酶、dNTPs、緩沖液和水。PCR反應步驟變性：96-98度的高溫條件，讓DNA變性成單鏈。退火：50-60度的溫度，引物結合至模板上。延伸：72度的溫度，DNA聚合酶沿模板鏈合成新鏈。PCR擴增曲線1指數生長期模板足夠，PCR產物呈指數生長。2高平臺期PCR反應體系中有限，PCR產物產量達到峰值。3平臺后期PCR產物逐漸耗盡，止于峰值后的平臺。陽性和陰性對照的作用1陽性對照判斷PCR體系是否具備PCR反應，如引物設計是否正確。2陰性對照防止PCR污染，如DNA污染、引物污染等。PCR技術的應用醫學診斷如病原體檢測、基因檢測和基因型分析等。疫情監測如病毒監測和防疫篩查等。食品安全如食品中毒原微生物和基因的檢測等。實時定量PCR技術反應體系構成實時定量PCR反應體系包括熒光染料和熒光檢測設備等內容。標準曲線法利用一定濃度的標準DNA確定待檢測DNA的絕對量。相對定量法通過熒光信號，定量比較不同樣品中目標基因的相對含量。逆轉錄PCR技術的應用定義逆轉錄PCR是通過將mRNA轉錄成cDNA，再進行PCR擴增的技術。步驟RNA為模板，逆轉錄酶反轉錄成cDNA，進行PCR擴增。應用通過檢測不同組織或不同發育階段的基因表達，研究哪些基因在特定生命階段或組織中表達。隨機引物PCR技術原理隨機引物在PCR過程中結合模板DNA的位置不固定，可以擴增不同長度的DNA序列。應用作為基因組分析的重要手段之一，已廣泛運用于基因識別、分子標記、基因組
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