玫瑰茄提取物體外抗氧化活性研究

李子是金屬科的木槿屬植物，也被稱為洛神奎、山梨和羅塞爾。其作為新興的食品和食品工業(yè)原料,它的花萼可制成蜜餞、果醬、高級飲料、冰榨、冰糕、罐頭、果酒、汽酒、香擯酒及糕點夾餡、玫瑰茄豆腐等多種食品。其主要含有類黃酮素、原兒茶酸、花青素、異黃酮素以及豐富的氨基酸、維生素、糖類、有機酸、無機鹽等化學(xué)成分,能降低膽固醇和甘油三脂、抑制低密度脂蛋白的氧化、抑制血小板的凝集、降低血栓的形成、減少動脈粥狀硬化,可有效地預(yù)防心血管疾病的發(fā)生。因此,常飲用玫瑰茄花茶可起到減肥作用,并且在夏季飲用玫瑰茄還可以清熱解暑。目前,國內(nèi)外研究主要集中在玫瑰茄的色素提取上,對玫瑰茄的抗氧化能力及與多酚含量相關(guān)性研究較少。通過體外抗氧化試驗,確定玫瑰茄有效部位以及抗氧化活性。研究結(jié)果,可為其抗氧化藥理作用研究及進一步開發(fā)高附加值產(chǎn)品提供參考。1材料和機器1.1材料表面玫瑰茄:廣東省乳源瑤族自治縣提供。1.2儀器、藥品和儀器UV-1700型紫外分光光度儀:日本Shimadzu公司;TE214S型精密電子天平:北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司;4003型真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀:德國Heidolph公司;HH-1型恒溫水浴鍋:江蘇國華電器有限公司。1.3抗氧化能力測試沒食子酸:上海食品藥品監(jiān)督管理局提供;福林-酚:上海荔達(dá)生物科技有限公司提供;DPPH(2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl)、ABTS[2,2’-tris(2-pyridyl)-s-trizaine]、BHT(butylatedhydroxyltoluene):美國sigma公司提供;總抗氧化能力(T-AOC)測試盒:南京建成生物研究所提供;其他試劑均為分析純。2方法2.1粗提物的制備稱取5g玫瑰茄樣品,40%乙醇為溶劑,料液比為1∶20(g/mL),在75℃條件下回流1.5h后過濾得粗提物。將粗提物依次用等體積石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取,得石油醚萃取物、氯仿萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物。2.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制采用Folin-Ciocalteu法測定。取10mg沒食子酸,定容至100mL,配制成0.1mg/mL溶液,分別取1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0mL定容至25mL,配制成濃度為4、6、8、10、12、14、16μg/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液。分別取1mL標(biāo)準(zhǔn)溶液、1mL福林-酚試劑、2mL10%Na2CO3,混勻,25℃反應(yīng)1h,測定在765nm波長處吸光度。以濃度為X軸,吸光度為Y軸,做標(biāo)準(zhǔn)曲線,并計算回歸方程。回歸方程為:Y=0.0356X+0.0519(R2=0.9985),分別取1mL粗提取和各極性部分萃取物稀釋液,再加入1mL福林-酚試劑和2mL10%Na2CO3,混勻,25℃反應(yīng)1h,測定在765nm波長處吸光度,計算稀釋液多酚濃度(mg/L)。2.3抗逆效應(yīng)試驗2.3.1dpph清除率測定取粗提物和各極性部分萃取物稀釋液適量,加入6.5×10-5mol/LDPPH溶液2mL,快速混勻,30min后測定在516nm處的吸光度,計算DPPH清除率。清除率/%=[1-(Ai-Aj)/Ac]×100式中:Ac為未加抗氧化劑時DPPH溶液的吸光度;Ai為加抗氧化劑后DPPH溶液的吸光度;Aj為提取液在測定波長的吸光度。2.3.2抗氧化能力的測定按總抗氧化能力檢測試劑盒要求準(zhǔn)備工作液。取0.1mL粗提物和各極性部分萃取物稀釋液置于試管中,加入檢測試劑2.0mL,混合均勻,在37℃恒溫水浴箱反應(yīng)30min,于520nm處測定吸收度值(OD)。在37℃時。每分鐘每毫升樣品液使反應(yīng)體系的吸光度值每增加0.01時,為一個抗氧化能力單位。總抗氧化能力=(測定管OD-對照管OD)×反應(yīng)液(mL)×樣品測試前稀釋倍數(shù)/0.01×30×取樣量(mL)2.3.3abts抑制率測定根據(jù)文獻(xiàn),配制ABTS自由基工作液。取粗提物和各極性部分萃取物稀釋液適量,加入4倍體積ABTS自由基工作液,靜置10min后測定在405nm處的吸光度。計算ABTS抑制率。抑制率=[1-(A樣品-A樣品空白)/(A陽性對照-A陰性對照)]×100%式中:A陽性對照為1體積溶劑與4體積ABTS自由基工作液的吸光度;A陰性對照為4體積溶劑的吸光度;A樣品為1體積樣品與4體積ABTS自由基工作液的吸光度;A樣品空白為1體積樣品與4體積溶劑的吸光度。3結(jié)果與討論3.1多酚含量結(jié)果采用Folin-Ciocalteu法測定各提取物多酚含量結(jié)果見表1以及圖1。可以看出,玫瑰茄粗提物和各萃取物的多酚含量由高到低依次為:粗提物>正丁醇萃取物>乙酸乙酯萃取物>氯仿萃取物>石油醚萃取物。3.2萃取液抗氧化活性采用DPPH法、試劑盒法、ABTS測定各提取物總抗氧化活性結(jié)果見表2以及圖2~圖4。可以看出,玫瑰茄粗提物和各萃取液對DPPH自由基清除能力、還原Fe3+能力以及ABTS自由基抑制能力有顯著差異,其活性由高到低均為:粗提物>正丁醇萃取物>乙酸乙酯萃取物>氯仿萃取物>石油醚萃取物。其中,玫瑰茄粗提物的DPPH自由基清除能力、還原Fe3+能力相當(dāng)或強于BHT,而對ABTS的抑制作用為BHT的50%左右,說明玫瑰茄粗提物具有很強的抗氧化能力。3.3玫瑰茄抗氧化能力的研究對玫瑰茄提取物的抗氧化活性與多酚含量測定結(jié)果進行相關(guān)性分析,并將DPPH法、試劑盒法、ABTS法等3種抗氧化方法之間進行相關(guān)性分析,結(jié)果見表3。可以看出,Folin-Ciocalteu比色法測定玫瑰茄各萃取物和粗提物多酚含量的結(jié)果與3種抗氧化方法的相關(guān)因子大于0.95,表明玫瑰茄中的酚類與其抗氧化能力密切相關(guān);其中多酚含量與ABTS抑制率值的相關(guān)因子為0.99,說明玫瑰茄中的多酚物質(zhì)有極強的ABTS抑制能力;DPPH法與試劑盒法、DPPH法與ABTS法的相關(guān)因子均接近0.85,說明DPPH法和其他2種方法之間具有較好的相關(guān)性,以及玫瑰茄粗提物和各萃取液可清除多種自由基。4抗氧化活性研究已有文獻(xiàn)研究多酚的較優(yōu)提取范圍,另有李氏等研究發(fā)現(xiàn),玫瑰茄有良好的抗氧化作用。但鮮見玫瑰茄多酚與其抗氧化能力相關(guān)性方面的研究。通過體外抗氧化試驗,考察玫瑰茄各提取部位DPPH清除能力、總抗氧化能力和ABTS抑制能力,將它們與BHT進行對照,并對不同極性部分進行多酚含量測