氣相色譜測定桑葉中殘殺威殘留量

氨基丙烯酸農藥有多種類型，其中一些毒性高，通常導致氨基丙烯酸中毒，其中之一是由此產生的垃圾。由于氨基甲酸酯類殺蟲劑近年來較廣泛地使用,其所引起的食物中毒、誤服以及投毒事件時有發生。在臨床上搶救中毒患者時,能否快速準確地確定毒物種類對拯救患者生命至關重要。由于殘殺威為非常規理化檢驗項目,目前尚無標準檢驗方法。經查閱文獻,目前國內外常用的檢測殘殺威的方法包括氣相色譜法、氣相色譜–質譜法、液相色譜法、液相色譜–質譜法及薄層層析法等。其中液相色譜法是最常用的方法,但該方法前處理較繁瑣,分析周期長。氣相色譜法由于選擇性、分離效能高,分析速度快,靈敏度高,檢測限可達到pg級,尤其適用于農殘分析工作。目前,就殘殺威在桑葉中的殘留分析未見報道,本文對氣相色譜檢測殘殺威的方法進行了實驗,并加以優化改進,同時提供了樣品前處理方法。1材料和方法1.1儀器、試驗裝置島津2010氣相色譜儀(帶NPD檢測器);HY–5型回旋式振蕩器;EYELAN–1001D旋轉蒸發儀;N–EVAP111氮吹儀;KQ–3200超聲波清洗器;BS110S電子天平;具塞量筒等玻璃器皿。乙腈、丙酮、氯化鈉均為分析純,殘殺威標準品(純度99.5%)。1.2u3000nacl的穩定性將桑葉剪碎,稱取樣品20g,加入80mL乙腈,振蕩提取1h。抽濾至盛有5gNaCl的100mL具塞量筒中,蓋上塞子,劇烈振蕩1min。在室溫下靜置10min,讓乙腈相和水相分層。準確吸取10mL上層乙腈相溶液,放入150mL濃縮瓶中,在旋轉蒸發儀上濃縮至近干,用丙酮定容2mL進氣相色譜測定殘殺威的含量。1.3高純氫氧流樣,特性有以下幾種情況檢測器:氮磷檢測器(NPD);色譜柱:SPB–50,30m×0.32mm×0.25μm;溫度條件:柱溫150℃保持0min,25℃/min升至280℃,保持1.8min,殘殺威的保留時間為3.34min。進樣口250℃,檢測器300℃。氣體條件:載氣為高純氮,2.0mL·min-1;分流進樣,分流比1∶10;高純氫流速1.5mL·min-1;空氣流速145mL·min-1。尾吹20mL·min-1。殘殺威標樣氣相色譜圖見圖1。1.4樣品進樣體積vx樣品的定性分析采用與農藥標樣的保留時間相對照的方法,單點峰面積外標法定量。公式如下:式中:X—待測樣品中農藥濃度(mg·kg-1);Cs—標樣中農藥的濃度(mg·kg-1);Ax—待測樣品的出峰面積;As—標樣的峰面積,由儀器所配工作站自動完成;Vx—待測樣品進樣體積(μL);Vs—標品取樣體積(μL)。2結果與分析2.1標準曲線的繪制準確稱取50.0mg(精確至0.0002g)殘殺威標準樣品定容至100mL容量瓶中,用丙酮溶解定容。再用丙酮梯度稀釋為0.1、0.5、1、5、20mg·L-1,在上述色譜條件下進行測定,以標準溶液濃度為橫坐標,色譜峰面積為縱坐標繪制標準曲線(圖2)。由標準曲線可見,殘殺威在0.1～20mg·kg-1范圍內,濃度與色譜峰面積呈線性關系,相關系數達0.9996,可滿足殘留分析的需要。2.2提取劑為單一溶劑殘殺威常用的提取溶劑有乙酸乙酯、甲醇、苯、乙腈等,本研究對這4種溶劑進行萃取率及雜質干擾比較。在桑葉空白樣品中添加殘殺威濃度為1mg·kg-1,分別用乙酸乙酯、甲醇、苯、乙腈進行提取,其中乙酸乙酯、甲醇、苯的提取液經弗羅里硅土柱凈化,乙腈提取液直接濃縮定容后進氣相色譜分析,結果見表1。從表1可以看出,用乙腈提取的平均添加回收率最高,變異系數最小,其平均回收率為95.48%,變異系數為6.42%;乙酸乙酯提取回收率最低,為70.77%,變異系數最大,為12.47%。造成4種溶劑萃取率較大差別的原因可能是乙酸乙酯、甲醇、苯提取需要凈化處理,增加了實驗步驟,降低了回收率;而用乙腈提取后,樣品可直接進行儀器分析,實驗環節少,損失少,回收率較高。從4種溶劑的提取液雜質干擾看,乙酸乙酯、甲醇、苯提取的雜質較多,不能直接進樣分析,需凈化后才能進樣;單用乙腈提取的效果優于其他3種溶劑的提取,主要是因為乙腈為中等極性的溶劑,用它提取可減少共萃物的干擾,因而選擇乙腈為提取溶劑。2.3回收率、精密度與定量限用未施藥的空白對照樣品,按照上述提取及測定步驟,分別做0.05、1mg·kg-1兩個濃度的添加回收率試驗,每個濃度做5個重復,結果見表2。結果表明,殘殺威在桑葉中的平均回收率在81.23%～102.54%之間;相對標準偏差(變異系數)<6.42%,最小檢出量為0.01ng,最低檢測濃度為0.05mg·kg-1,符合農藥殘留測定要求。桑葉空白及桑葉殘殺威添加色譜圖見圖3、4。由圖3、圖4對比可以看出,殘殺威出峰的位置上均不存在干擾峰,因此,采用乙腈提取殘殺威能夠減少樣品中干擾物的存在,確保殘留量測定準確。3樣品的檢測結果1)建立了檢測桑葉中殘殺威殘留的方法。在添加水平為0.05～1mg·kg-1時,回收率在81.23%～102.54%之間,變異系數最大為6.42%。在上述分析條件下,殘殺威在桑葉中的最低檢測濃度0.05mg·kg-1,這說明該方法的準確度、重現性和精確度都符合農藥殘留量分析與檢測的要求,適用于對實際樣品中殘殺威的分析與