實驗室慣用試劑、緩沖液的配制1MTris-HCl,,組份濃度1MTris-HCl配制量1L配制辦法1.稱量121.1gTris置于1L燒杯中。2.加入約800ml的去離子水，充足攪拌溶解。3.按下表量加入濃鹽酸調(diào)節(jié)所需要的pH值。4.將溶液定容至1L。5.高溫高壓滅菌后，室溫保存。注意：應使溶液冷卻至室溫后再調(diào)定pH值，由于Tris溶液的pH值隨溫度的變化差別很大，溫度每升高1℃，溶液的pH1.5MTris-HCl組份濃度1.5MTris-HCl配制量1L配制辦法1.稱量181.7gTris置于1L燒杯中。2.加入約800ml的去離子水，充足攪拌溶解。3.用濃鹽酸調(diào)節(jié)pH值至。4.將溶液定容至1L。5.高溫高壓滅菌后，室溫保存。注意：應使溶液冷卻至室溫后再調(diào)定pH值，由于Tris溶液的pH值隨溫度的變化差別很大，溫度每升高1℃，溶液的pH10×TEBuffer,,組份濃度100mMTris-HCl,10mMEDTA配制量1L配制辦法1.量取下列溶液，置于1L燒杯中。2.向燒杯中加入約800ml的去離子水，均勻混合。3.將溶液定容至1L后，高溫高壓滅菌。4.室溫保存。3M醋酸鈉組份濃度配制量配制辦法PBSBuffer組份濃度137mMNaCl,2.7mMKCl,10mMNa2HPO4,2mMKH2PO4配制量1L配制辦法1.稱量下列試劑，置于1L燒杯中。2.向燒杯中加入約800ml的去離子水，充足攪拌溶解。3.滴加濃鹽酸將pH值調(diào)節(jié)至，然后加入去離子水將溶液定容至1L。4.高溫高壓滅菌后，室溫保存。注意：上述PBSBuffer中無二價陽離子，如需要，可在配方中補充1mMCaCl2和0.5mMMgCl2。10M醋酸銨組份濃度10M醋酸銨配制量100ml配制辦法1.稱量77.1g醋酸銨置于100～200ml燒杯中，加入約30ml的去離子水攪拌溶解。2.加去離子水將溶液定容至100ml。3.使用mm濾膜過濾除菌。4.密封瓶口于室溫保存。注意：醋酸銨受熱易分解，因此不能高溫高壓滅菌。Tris-HCl平衡苯酚配制辦法1.使用原料：大多數(shù)市售液化苯酚是清亮無色的，無需重蒸餾便可用于分子生物學實驗。但有些液化苯酚呈粉紅色或黃色，應避免使用。同時也應避免使用結(jié)晶苯酚，結(jié)晶苯酚必須在160℃對其進行重蒸餾除去諸如醌等氧化產(chǎn)物，這些氧化產(chǎn)物可引發(fā)磷酸二酯鍵的斷裂或造成RNA和DNA的交聯(lián)等。因此，苯酚的質(zhì)量對DNA、RNA2.操作注意：苯酚腐蝕性極強，并可引發(fā)嚴重灼傷，操作時應戴手套及防護鏡等。全部操作均應在通風櫥中進行，與苯酚接觸過的皮膚部位應用大量水清洗，并用肥皂和水洗滌，忌用乙醇。3.苯酚平衡：由于在酸性pH條件下DNA分派于有機相，因此使用苯酚前必須對苯酚進行平衡使其pH值達成以上，苯酚平衡操作辦法以下：①液化苯酚應貯存于-20℃放置使其達成室溫，然后在68℃②加入羥基喹啉（8-Quinolinol）至終濃度%。該化合物是一種還原劑、RNA酶的不完全克制劑及金屬離子的弱螯合劑，同時因其呈黃色，有助于方便識別有機相。③加入等體積的1MTris-HCl（，使用磁力攪拌器攪拌15分鐘，靜置使其充足分層后，除去上層水相。④重復操作環(huán)節(jié)③。⑤加入等體積的0.1MTris-HCl（，使用磁力攪拌器攪拌15分鐘，靜置使其充足分層后，除去上層水相。⑥重復操作環(huán)節(jié)⑤，稍微殘留部分上層水相。⑦使用pH試紙確認有機相的pH值不不大于。⑧將苯酚置于棕色玻璃瓶中4℃苯酚/氯仿/異戊醇(25:24:1)1.闡明：從核酸樣品中除去蛋白質(zhì)時經(jīng)常使用苯酚/氯仿/異戊醇（25:24:1)。氯仿可使蛋白質(zhì)變性并有助于液相與有機相的分離，而異戊醇則有助于消除抽提過程中出現(xiàn)的氣泡。2.配制辦法：將Tris-HCl平衡苯酚與等體積的氯仿/異戊醇（24:1）混合均勻后，移入棕色玻璃瓶中4℃10%(W/V)SDS2NNaOH組份濃度2NNaOH配制量100ml配制辦法1.量取80ml去離子水置于100～200ml塑料燒杯中（NaOH溶解過程中大量放熱，有可能使玻璃燒杯炸裂)。2.稱取8gNaOH小心地逐步加入到燒杯中，邊加邊攪拌。3.待NaOH完全溶解后，用去離子水將溶液定容至100ml。4.將溶液轉(zhuǎn)移至塑料容器中后，室溫保存。NHCl組份濃度NHCl配制量100ml配制辦法1.在ml的去離子水中加入ml的濃鹽酸（N），均勻混合。2.室溫保存。5MNaCl組份濃度5MNaCl配制量1L配制辦法1.稱取292.2gNaCl置于1L燒杯中，加入約800ml的去離子水后攪拌溶解。2.加去離子水將溶液定容至1L后，適量分成小份。3.高溫高壓滅菌后，4℃20%(W/V)Glucose組份濃度20%(W/V)Glucose配制量100ml配制辦法1.稱取20gGlucose置于100～200ml燒杯中，加入約80ml的去離子水后，攪拌溶解。2.加去離子水將溶液定容至100ml。3.高溫高壓滅菌后，4℃SolutionI(質(zhì)粒提取用)組份濃度25mMTris-HCl（）,10mMEDTA,50mMGlucose配制量1L配制辦法1.量取下列溶液，置于1L燒杯中。2.高溫高壓滅菌后，4℃3.使用前每50ml的SolutionI中加入2ml的RNaseA（20mg/ml）。SolutionII(質(zhì)粒提取用)組份濃度配制量配制辦法SolutionIII(質(zhì)粒提取用)組份濃度3MKOAc,5MCH3COOH配制量500ml配制辦法1.稱量下列試劑，置于500ml燒杯中。2.加入300ml去離子水后攪拌溶解。3.加去離子水將溶液定容至500ml。4.高溫高壓滅菌后，4℃0.5MEDTA組份濃度0.5MEDTA配制量1L配制辦法1.稱取186.1gNa2EDTA·2H2O，置于1L燒杯中。2.加入約800ml的去離子水，充足攪拌。3.用NaOH調(diào)節(jié)pH值至（約20gNaOH)。注意：pH值至時，EDTA才干完全溶解。4.加去離子水將溶液定容至1L。5.適量分成小份后，高溫高壓滅菌。6.室溫保存。1MDTT組份濃度1MDTT配制量20ml配制辦法1.稱取3.09gDTT，加入到50ml塑料離心管內(nèi)。2.加20ml的0.01MNaOAc（），溶解后使用0.22mm濾膜過濾除菌。3.適量分成小份后，-20℃10mMATP組份濃度10mMATP配制量20ml配制辦法1.稱取121mgNa2ATP·3H2O，加入到50ml塑料離心管內(nèi)。2.加20ml的25mMTris-HCl（），攪拌溶解。3.適量分成小份后，-20℃組份濃度10mMATP配制量20ml配制辦法1.稱取121mgNa2ATP·3H2O，加入到50ml塑料離心管內(nèi)。2.加20ml的25mMTris-HCl（），攪拌溶解。3.適量分成小份后，-20℃蛋白質(zhì)電泳有關試劑、緩沖液的配制辦法30%(W/V)Acrylamide組份濃度30%（W/V）Acrylamide配制量1L配制辦法1.稱量下列試劑，置于1L燒杯中。2.向燒杯中加入約600ml的去離子水，充足攪拌溶解。3.加去離子水將溶液定容至1L，用mm濾膜濾去雜質(zhì)。4.于棕色瓶中4℃注意：丙烯酰胺含有很強的神經(jīng)毒性，并可通過皮膚吸取，其作用品有積累性，配制時應戴手套等。聚丙烯酰胺無毒，但也應謹慎操作，由于有可能含有少量的未聚合成分。40%(W/V)Acrylamide組份濃度40%（W/V）Acrylamide配制量1L配制辦法1.稱量下列試劑，置于1L燒杯中。2.向燒杯中加入約600ml的去離子水，充足攪拌溶解。3.加去離子水將溶液定容至1L，用0.45m4.于棕色瓶中4℃注意：丙烯酰胺含有很強的神經(jīng)毒性，并可通過皮膚吸取，其作用品有積累性，配制時應戴手套等。聚丙烯酰胺無毒，但也應謹慎操作，由于有可能含有少量的未聚合成分。10%(W/V)過硫酸銨組份濃度配制量配制辦法5×Tris-GlycineBuffer(SDS電泳緩沖液)組份濃度0.125MTris,1.25MGlycine,%（W/V）SDS配制量1L配制辦法1.稱量下列試劑，置于1L燒杯中。2.加入約800ml的去離子水，攪拌溶解。3.加去離子水將溶液定容至1L后，室溫保存。5×SDSLoadingBuffer組份濃度配制量5ml配制辦法1.量取下列試劑，置于10ml塑料離心管中。2.加去離子水溶解后定容至5ml。3.小份（500ml/份）分裝后，于室溫保存。4.使用前將25ml的2-ME加到每小份中。5.加入2-ME的LoadingBuffer可在室溫下保存一種月左右。考馬斯亮藍R-250染液組份濃度%（W/V）考馬斯亮藍R-250,25%（V/V）異丙醇,10%（V/V）冰醋酸配制量1L配制辦法1.稱取1g考馬斯亮藍R-250，置于1L燒杯中。2.量取250ml的異丙醇加入上述燒杯中，攪拌溶解。3.加入100ml的冰醋酸，攪拌均勻。4.加入650ml的去離子水，攪拌均勻。5.用濾紙除去顆粒物質(zhì)后，室溫保存。考馬斯亮藍染色脫色液組份濃度10%（V/V）醋酸,5%（V/V）乙醇配制量1L配制辦法1.量取下列溶液，置于1L燒杯中。2.充足混合后使用。凝膠固定液（SDS銀氨染色用）組份濃度50%（V/V）甲醇,10%（V/V）醋酸配制量1L配制辦法1.量取下列溶液，置于1L燒杯中。2.均勻混合后室溫保存。凝膠解決液（SDS銀氨染色用）組份濃度配制量配制辦法凝膠染色液（SDS銀氨染色用）組份濃度%（W/V）AgNO3,1%（V/V）濃NH3·H2O,%（W/V）NaOH配制量100ml配制辦法1.量取下列試劑，加入100～200ml的試劑瓶中。2.均勻混合。該溶液應為無色透明狀。如氨水濃度過低時溶液會呈混濁狀，此時應補加濃氨水，直至透明。3.本染色液應現(xiàn)用現(xiàn)配，不適宜保存。顯影液（SDS銀氨染色用）組份濃度%（W/V）檸檬酸,%（V/V）甲醛配制量1L配制辦法1.稱量下列試劑，置于1L試劑瓶中。2.加入1L去離子水后，搖動混合溶解。3.室溫保存。核酸電泳有關試劑、緩沖液的配制辦法50×TAEBuffer組份濃度2MTris-醋酸,100mMEDTA配制量1L配制辦法1.稱量下列試劑，置于1L燒杯中。2.向燒杯中加入約800ml的去離子水，充足攪拌溶解。3.加入ml的醋酸，充足攪拌。4.加去離子水將溶液定容至1L后，室溫保存。10×TBEBuffer組份濃度配制量配制辦法10×MOPSBuffer組份濃度200mMMOPS,20mMNaOAc,10mMEDTA配制量1L配制辦法1.稱量41.8gMOPS，置于1L燒杯中。2.加約700mlDEPC解決水，攪拌溶解。3.使用2NNaOH調(diào)節(jié)pH值至。4.再向溶液中加入下列試劑。5.用DEPC解決水將溶液定容至1L。6.用um濾膜過濾除去雜質(zhì)。7.室溫避光保存。注：溶液見光或高溫滅菌后會變黃。變黃時也可使用，但變黑時不要使用。溴乙錠（10mg/ml）組份濃度10mg/ml溴乙錠配制量100ml配制辦法1.稱量1g溴乙錠，加入到100ml容器中。2.加入去離子水100ml，充足攪拌數(shù)小時完全溶解溴乙錠。3.將溶液轉(zhuǎn)移至棕色瓶中，室溫避光保存。4.溴乙錠的工作濃度為mg/ml。注意：溴乙錠是一種致癌物質(zhì)，必須小心操作。Agarose凝膠1.配制適量的電泳及制膠用的緩沖液（普通是×TBE或1×TAE)。2.根椐制膠量及凝膠濃度，精確稱量瓊脂糖粉，加入適宜的錐形瓶中。3.加入一定量的電泳緩沖液（總液體量不適宜超出錐形瓶的50%容量)。注：用于電泳的緩沖液和用于制膠的緩沖液必須統(tǒng)一。4.在錐形瓶的瓶口封上保鮮膜，并在膜上扎些小孔，然后在微波爐中加熱熔化瓊脂糖。加熱過程中,當溶液沸騰后，請戴上防熱手套，小心搖動錐形瓶，使瓊脂糖充足均勻熔化。此操作重復多次，直至瓊脂糖完全熔化。必須注意，在微波爐中加熱時間不適宜過長，每次當溶液起泡沸騰時停止加熱，否則會引發(fā)溶液過熱暴沸，造成瓊脂糖凝膠濃度不準，也會損壞微波爐。熔化瓊脂糖時，必須確保瓊脂糖充足完全熔化，否則，會造成電泳圖像含糊不清。5.使溶液冷卻至60℃注：溴乙錠是一種致癌物質(zhì)。使用含有溴乙錠的溶液時，請戴好手套。6.將瓊脂糖溶液倒入制膠模中，然后在適宜位置處插上梳子。凝膠厚度普通在3~5mm之間。7.在室溫下使膠凝固（大概30分鐘~1小時)，然后放置于電泳槽中進行電泳。注：凝膠不立刻使用時，請用保鮮膜將凝膠包好后在4℃瓊脂糖凝膠濃度與線形DNA的最佳分辨范疇6×LoadingBuffer(DNA電泳用)組份濃度配制量配制辦法10×LoadingBuffer(RNA電泳用)組份濃度配制量10ml配制辦法1.稱量下列試劑，置于10ml離心管中。2.向離心管中加入約4ml的DEPC解決水后，充足攪拌溶解。3.加入5ml的甘油（Glycerol）后，充足混勻。4.用DEPC解決水定容至10ml后，室溫保存。核酸、蛋白質(zhì)雜交用有關試劑、緩沖液的配制辦法20×SSC組份濃度3.0MNaCl,0.3M檸檬酸鈉配制量1L配制辦法1.稱量下列試劑，置于1L燒杯中。2.向燒杯中加入約800ml的去離子水，充足攪拌溶解。3.滴加14NHCl，調(diào)節(jié)pH值至后，加去離子水將溶液定容至1L。4.高溫高壓滅菌后，室溫保存。20×SSPEBuffer組份濃度3.0MNaCl,0.2MNaH2PO4,0.02MEDTA配制量1L配制辦法1.稱量下列試劑，置于1L燒杯中。2.向燒杯中加入約800ml的去離子水，充足攪拌溶解。3.加NaOH調(diào)節(jié)pH值至（約ml的10NNaOH)。4.加去離子水將溶液定容至1L。5.高溫高壓滅菌后，室溫保存。50×Denhardt's溶液組份濃度配制量500ml配制辦法1.稱量下列試劑，置于500ml燒杯中。2.加去離子水約400ml，充足攪拌溶解3.加去離子水將溶液定容至500ml。4.用0.45mm濾膜過濾后，分裝成每份5.-20℃5M磷酸鹽Buffer組份濃度0.5MNa2HPO4配制量1L配制辦法1.稱量134gNa2HPO4·7H2O置于1L燒杯中。2.加入約800ml的去離子水充足攪拌溶解。3.加入85%的H3PO4（濃磷酸）調(diào)節(jié)溶液pH值至。4.加去離子水定容至1L。5.高溫高壓滅菌后，室溫保存。組份濃度10mg/mlSalmonDNA配制量約100ml配制辦法1.稱取鮭魚精DNA2g置于500ml燒杯中，加入約200ml的TEBuffer。2.用磁力攪拌器室溫攪拌2～4小時，溶解后加入4ml的5MNaCl，使其終濃度為0.1M。3.用苯酚和苯酚/氯仿各抽提1次。4.回收水相溶液后，使用17號皮下注射針頭快速吸打溶液約20次，以切斷DNA。5.加入2倍體積的預冷乙醇進行乙醇沉淀。6.離心回收DNA后，溶解于100ml的去離子水中，測定溶液的OD260值。7.計算溶液的DNA濃度后，稀釋DNA溶液至10mg/ml。8.煮沸10分鐘后，分裝成小份（1ml/份）。-20℃9.使用前在沸水浴中加熱5分鐘后，快速冰浴冷卻。組份濃度配制量配制辦法組份濃度配制量約100ml配制辦法1.稱量下列試劑，置于200ml燒杯中。組份濃度配制量100ml配制辦法1.稱量下列試劑，置于200ml燒杯中。2.充足混勻后，使用um濾膜濾去雜質(zhì)后使用。組份濃度39mMGlycine,48mMTris,%(W/V)SDS,20%(V/V)甲醇配制量1L配制辦法1.稱量下列試劑，置于1L燒杯中。2.向燒杯中加入約600ml的去離子水，充足攪拌溶解。3.加去離子水將溶液定容至800ml后，加入200ml的甲醇。4.室溫保存。組份濃度20mMTris-HCl,150mMNaCl,%（V/V）Tween20配制量1L配制辦法1.稱量下列試劑，置于1L燒杯中。2.向燒杯中加入約800ml的去離子水，充足攪拌溶解。3.加入mlTween20后充足混勻。4.加去離子水將溶液定容至1L后，4℃組份濃度5%（W/V）脫脂奶粉/TBSTBuffer配制量100ml配制辦法1.稱量5g脫脂奶粉加入到100ml的TBSTBuffer中，充足攪拌溶解。4℃實驗室慣用培養(yǎng)基的配制辦法Ampicillin(100mg/ml)組份濃度100mg/mlAmpicillin配制量50ml配制辦法1.稱量5gAmpicillin置于50ml離心管中。2.加入40ml滅菌水，充足混合溶解后，定容至50ml。3.用0.22m4.小份分裝（1ml/份）后，-20℃IPTG(24mg/ml)組份濃度24mg/mlIPTG配制量50ml配制辦法1.稱量1.2gIPTG置于50ml離心管中。2.加入40ml滅菌水，充足混合溶解后，定容至50ml。3.用0.22m4.小份分裝（1ml/份）后，-20℃X-Gal(20mg/ml)組份濃度配制量配制辦法-20℃避光保存。組份濃度配制量配制辦法組份濃度配制量1L配制辦法1.稱取下列試劑，置于1L燒杯中。2.加入約800ml的去離子水，充足攪拌溶解。3.滴加5NNaOH（約ml)，調(diào)節(jié)pH值至。4.加去離子水將培養(yǎng)基定容至1L。5.高溫高壓滅菌后，冷卻至室溫。6.加入1mlAmpicillin（100mg/ml）后均勻混合。7.4℃組份濃度配制量1L配制辦法1.配制磷酸鹽緩沖液（0.17MKH2PO4，0.72MK2HPO4）100ml。溶解2.31gKH2PO4和12.54gK2HPO4于90ml的去離子水中，攪拌溶解后，加去離子水定容至100ml，高溫高壓滅菌。2.稱取下列試劑，置于1L燒杯中。3.加入約800ml的去離子水，充足攪拌溶解。4.加去離子水將培養(yǎng)基定容至1L后，高溫高壓滅菌。5.待溶液冷卻至60℃下列時，加入100ml6.4℃組份濃度配制量1L配制辦法組份濃度配制量1L配制辦法1.配制250mMKCl溶液。在90ml的去離子水中溶解1.86gKCl后，定容至100ml。2.配制2MMgCl2溶液。在90ml去離子水中溶解19gMgCl2后，定容至100ml，高溫高壓滅菌。3.稱取下列試劑，置于1L燒杯中。4.加入約800ml的去離子水，充足攪拌溶解。5.量取10ml250mMKCl溶液，加入到燒杯中。6.滴加5NNaOH溶液（約ml)，調(diào)節(jié)pH值至。7.加入去離子水將培養(yǎng)基定容至1L。8.高溫高壓滅菌后，4℃9.使用前加入5ml滅菌的2MMgCl2溶液。組份濃度配制量100ml配制辦法1.配制1M葡萄糖溶液。將18g葡萄糖溶于90ml去離子水中，充足溶解后定容至100ml，用0.22mm濾膜過