2010.5阮斐怡微生物檢驗與臨床2010.5阮斐怡微生物檢驗與臨床

微生物實驗室設立目的

協(xié)助臨床醫(yī)生診斷及治療感染癥。檢驗結果提供抗生素治療依據。提供流行病學數據供醫(yī)院感染管制措施參考。微生物實驗室設立目的

微生物實驗室功能

檢查及培養(yǎng)臨床標本中的微生物。正確鑒定臨床上有意義的分離菌株。對有意義的分離菌株進行藥敏試驗。提供快速正確的檢驗報告。微生物實驗室功能

成功分離病原菌

－標本收集、運送、保存－標本處理方法－醫(yī)務人員專業(yè)知識

正確判讀微生物培養(yǎng)報告選擇適當治療方法

成功治療感染癥因素成功分離病原菌成功治療感染癥因素分析前質量控制臨床檢驗科全面質量管理系統(tǒng)用于臨床診斷與治療分析測定參與臨床診斷、查房等醫(yī)療活動，幫助臨床醫(yī)生合理分析、正確使用檢驗結果分析中分析后

通過實踐與文獻復習進行方法學研究、臨床意義探討、經濟學評估，不斷開展循征醫(yī)學工作探討標本采集各環(huán)節(jié)影響實驗因素并制定相應制度與措施檢驗科與臨床密切的信息交流臨床醫(yī)生選擇最直接最有效的,最合理,最經濟的項目用于患者,正確化驗單的書寫臨檢科對臨床醫(yī)生選擇項目時,提出自己的建議對檢驗科工作人員不斷進行專業(yè)知識繼續(xù)教育,不斷提高整體素質和學術水平

醫(yī)護人員能正確進行標本采集與運送標本采集檢查、監(jiān)督標本是否符合要求標本運送病人準備建立檢驗報告解釋咨詢及建議的機構臨床檢驗科分析前質量控制臨床檢驗科全面質量管理系統(tǒng)用于臨床診斷與治療分全部檢驗流程中各分析階段實驗室檢驗錯誤理解檢驗的需求性檢驗申請的必要條件32-75%病人準備分析前標本采集標本處理4-32%標本分析分析中報告單的生成9-55%報告單修正分析后報告判讀

Clin.Lab.Med3:541-551,1983

ClinicalChenistry48:5,691-698,2002全部檢驗流程中各分析階段實驗室檢驗錯誤提供最佳的微生物病原菌發(fā)現(xiàn)率，使污染率降至最低及培養(yǎng)結果容易判讀。提升實驗室工作效率及病患照顧質量。降低醫(yī)療成本。

良好的微生物送檢標本提供最佳的微生物病原菌發(fā)現(xiàn)率，使污染良好的微生物送需要不需要檢驗項目申請標本采集指南特殊安全防護特殊安全防護處理病人識別、評估標本采集標本標簽標本轉運標本接收標本拒收標本儲存標本唯一標識微生物實驗室分析前處理流程圖需要不需要檢驗項目申請標本采集指南特殊安全防護特殊安全防護處類型檢測項目常規(guī)檢測項目普通培養(yǎng)+鑒定厭氧菌培養(yǎng)+鑒定普通培養(yǎng)+鑒定+菌落計數血培養(yǎng)+鑒定血培養(yǎng)（厭氧菌）+鑒定藥敏試驗特殊檢測項目革蘭染色涂片抗酸染色涂片分枝桿菌培養(yǎng)沙門志賀菌培養(yǎng)霍亂弧菌培養(yǎng)嗜鹽菌培養(yǎng)大腸埃希菌O-157培養(yǎng)鑒定B群鏈球菌培養(yǎng)鑒定

檢測項目一覽表類型檢測項目常普通培養(yǎng)+鑒定厭氧菌培養(yǎng)+鑒定普通培養(yǎng)+鑒定+標本采集部位非無菌部位無菌部位眼血液耳骨髓呼吸道腦脊液腸胃道胸水泌尿道腹水皮膚關節(jié)液毛發(fā)標本采集部位非無菌部位無菌部位眼血液耳骨髓呼吸道腦脊液腸分析前標本采集標本接收標本拒收標本儲存分析前標本采集標本收集與運送原則收集急性期真正病灶處的標本，不得受到鄰近區(qū)域微生物的污染采用無菌器材收集標本，并裝于堅固、密封的無菌器材中收集“足量”的標本在病人使用抗生素或傷口局部治療前收集標本標本收集與運送原則收集急性期真正病灶處的標本，不得受到鄰近區(qū)注意生物安全采集：采取標準防護措施運送：不可造成標本外漏及容器破損并迅速送到實驗室儲存及操作：避免標本中污染菌生長并保持病原菌活性注意生物安全采集：采取標準防護措施標本采集痰標本尿液標本血液標本尿道、會陰部穿刺部位皮下感染淺表傷口口腔、呼吸道皮膚、黏膜污染！標本采集痰標本尿液標本血液標本尿道、會陰部穿刺部位皮下感

標本采集1.選擇正確的解剖部位。下表列出了一些幾乎為臨床提供不了什么有用信息的標本。標本類型替代方法或建議結腸造口術排出物嘔吐物壞疽損傷（拭子）褥瘡（拭子）牙周損傷（拭子）直腸周圍膿腫（拭子）靜脈曲張性潰瘍（拭子）燒傷，傷口（拭子）不適合做細菌培養(yǎng)不適合做細菌培養(yǎng)送交深部組織或抽吸物送交深部組織或抽吸物送交深部組織或抽吸物送交深部組織或抽吸物送交深部組織或抽吸物送交深部組織或抽吸物標本采集1.選擇正確的解剖部位。下表列出了一些幾乎為2.選擇合適的部位采集用于厭氧菌培養(yǎng)的標本，見下表。活檢或針頭抽吸物是最佳的選擇，一般不要用厭氧菌拭子標本。決不要把厭氧菌培養(yǎng)的標本冷藏，相反，要在室溫下保存。標本采集可接受材料不可接受材料抽吸物（用注射器和針頭）血液，骨髓培養(yǎng)艱難梭菌的大便外科組織經氣管抽吸物經恥骨弓上抽吸的尿子宮內膜抽吸物鼻咽拭子前列腺液或精液大便或直腸拭子惡露痰經膀胱或導管排泄的尿子宮頸拭子2.選擇合適的部位采集用于厭氧菌培養(yǎng)的標本，見下表。活微生物標本接受或拒絕標準及處理方式項目拒絕標準處理方式標本無標簽，不處理對于非損傷方法獲得的標本（尿、痰、咽標本），要再送一個新的標本。對于損傷程序獲得的標本（針抽吸物、體液或組織），要和取樣醫(yī)生協(xié)商后，再處理標本。在報告上注明問題，并記錄所采取的措施。送檢延遲，不處理提示送檢者并要求再送一個標本。在患者報告上注明“延遲后接收”。檢測信息有遺漏電話詢問臨床并記錄，輸入數據庫檢測項目與申請單不一致（如血培養(yǎng)開成一般普通培養(yǎng)）應打電話與臨床聯(lián)系，說明原因及改正方式，并將檢驗單據號記錄，輸入數據庫。不合適的或泄漏的容器，不處理通知送檢者并要求再送一個標本。在患者報告上注明問題和所采取的措施。標本類型/量不合適與送檢者聯(lián)系，指出不符合之處。要求一個能滿足檢測條件的標本。沒有提供標本所適宜的條件（如厭氧送檢的卻用需氧送檢、拭子標本沒有適當的防干措施、需要轉運培養(yǎng)基的卻沒有使用），不處理與送檢者聯(lián)系，闡明檢測要求，指出不符合之處。并要求一個能滿足檢測條件的標本。同一天內同一檢測條件的重復標本（血除外），不處理將標本置于適宜的保護劑和正確的保存溫度下。通知送檢者，指出重復的情況。在報告上注明問題所在。微生物標本接受或拒絕標準及處理方式拒絕標準處理方式標血培養(yǎng)標本1.血培養(yǎng)瓶適用的標本血液、骨髓、腦脊液、胸腹水、關節(jié)液、腹透液等無菌體液。2.血培養(yǎng)次數對懷疑菌血癥的成人患者，上海市院感辦建議在不同部位采集2瓶需氧瓶或2套（1套為一瓶需氧和一瓶厭氧）血培養(yǎng)標本。研究證明：血培養(yǎng)只做一套的陽性檢出率為65%，做2套和3套檢出率分別為80%和90%。血培養(yǎng)標本1.血培養(yǎng)瓶適用的標本3.

采血量成人患者建議5-10ml/瓶。嬰幼兒患者建議每瓶不少于2ml。4.

采血時機抗菌藥物使用之前。寒戰(zhàn)出現(xiàn)時至發(fā)熱初期采集血培養(yǎng)最佳。5.血標本在需氧和厭氧瓶中的分配推薦以一個需氧瓶和一個厭氧瓶作為常規(guī)血培養(yǎng)的組合。當采血量不能滿足推薦采血量時，應首先滿足需氧瓶的需要。

分析前～血培養(yǎng)標本3.采血量分析前～血培養(yǎng)標本血培養(yǎng)標本6.影響血培養(yǎng)采樣因素采樣人員技術采集部位穿刺部位消毒工作采樣數量與時機選擇血培養(yǎng)標本6.影響血培養(yǎng)采樣因素血培養(yǎng)標本7.特殊的全身性和局部感染患者采血培養(yǎng)的建議急性高燒：10min內，由不同部位抽取2套標本。非急性高燒疾病：24h內，由不同部位抽取2-3套標本，每套間隔≥3h。急性心內膜炎：在1～2h內不同部位采集3套血標本，如果24h后陰性，再采集3套以上的血標本。亞急性心內膜炎：24h內從3個不同部位采3套，每套間隔≥15min，如24h內為陰性，要再采2-3套。急性膿毒病：10min內從不同的部位采2～3套。可疑急性原發(fā)性菌血癥、腦膜炎、骨髓炎、關節(jié)炎或肺炎。應在不同部位采集2～3套血標本。不明原因發(fā)熱，如隱性膿腫、傷寒熱和波浪熱，從不同體位采集2～3套，間隔≥1h，如24h內為陰性，需再采2-3套。血培養(yǎng)標本7.特殊的全身性和局部感染患者采血培養(yǎng)的建議8.皮膚消毒血培養(yǎng)瓶口應以75%酒精的消毒劑處理。徹底消毒皮膚，并用75%酒精由內往外的方向涂抹去除碘酒液，以避免碘酒污染血培養(yǎng)液。血培養(yǎng)標本8.皮膚消毒血培養(yǎng)標本血培養(yǎng)容器需氧血培養(yǎng)瓶厭氧血培養(yǎng)瓶血培養(yǎng)瓶應室溫放置，不要放入冰箱冷藏。血培養(yǎng)容器需氧血培養(yǎng)瓶厭氧血培養(yǎng)瓶血培養(yǎng)瓶應室溫放置，不血培養(yǎng)容器中和抗生素血培養(yǎng)瓶真菌/分枝桿菌血培養(yǎng)瓶血培養(yǎng)瓶應室溫放置，不要放入冰箱冷藏。血培養(yǎng)容器中和抗生素血培養(yǎng)瓶真菌/分枝桿菌血培養(yǎng)瓶血培養(yǎng)1.血管導管及腹膜透析導管培養(yǎng)是監(jiān)測血流感染源方法之一。2.標準方法：由導管抽取20ml血液，進行血培養(yǎng)；導管周圍的皮膚消毒，然后以無菌剪刀取下約5公分長度導管尖，置于無菌容器中送檢；再由另一處靜脈端抽血進行血培養(yǎng)。3.實驗室將導管尖于培養(yǎng)基上滾動數次后進行培養(yǎng)，如果菌落數＞15CFU/TiP以上，則認為血流感染是可能與導管有關。血管導管培養(yǎng)1.血管導管及腹膜透析導管培養(yǎng)是監(jiān)測血流感染源方法之一。4.導管尖于培養(yǎng)基上滾動數次后進行培養(yǎng)，如果菌落數＜15CFU，可能有意義分離菌：

－白色念珠菌

－金黃色葡萄球菌

－A群鏈球菌－革蘭氏陰性桿菌5.導管血培養(yǎng)陽性時間較靜脈血培養(yǎng)早二小時，可能為導管引起的血流感染。血管導管培養(yǎng)4.導管尖于培養(yǎng)基上滾動數次后進行培養(yǎng)，如果菌落數＜15C尿液標本1.

收集方法中段尿無菌導尿管收集恥骨上方穿刺抽取2.標本收集后若無法立即送檢應置于冰箱（4-8℃）待送，4℃保存不可超過6小時。尿液標本1.收集方法尿液標本1.培養(yǎng)18-24h觀察平板上菌落情況，連續(xù)兩天無細菌生長，報告“培養(yǎng)兩天無細菌生長”。2.若培養(yǎng)出三種以上細菌，標本可能污染，建議重新送檢。3.尿液中發(fā)現(xiàn)任何細菌，并不一定表示尿路感染。一般而言，菌落計數在105/ml以上代表真正感染；104～105/ml感染可能；>2種視為污染；若病人已服抗生素，104/ml也可能是感染。尿液標本1.培養(yǎng)18-24h觀察平板上菌落情況，連續(xù)兩1.

收集標本中粘液或血液的部分2.

使用轉運培養(yǎng)基或無菌容器運送

糞便標本1.收集標本中粘液或血液的部分糞便標本糞便標本容器標本量大標本量小糞便標本容器標本量大標本量小傷口、組織、厭氧標本1.

厭氧培養(yǎng)標本，應采集后15-30min內轉運，避免長時間暴露空氣中。厭氧菌標本不可冷藏。2.

膿腫與癤最好以針筒直接由病灶處抽取。3.

清除傷口表面壞死組織，采集深層部位標本。4.組織標本應放置于無菌容器中，在容器中放置少量生理鹽水防止標本干枯。量少時傷口、膿液送檢方法傷口、組織、厭氧標本1.厭氧培養(yǎng)標本，應采集后15-305.選擇合適部位采集用于厭氧菌培養(yǎng)的標本見下表。可接受材料不可接受材料抽吸物（用注射器和針頭）血液，骨髓培養(yǎng)艱難梭菌的大便外科組織經氣管抽吸物經恥骨弓上抽吸的尿子宮內膜抽吸物鼻咽拭子前列腺液或精液直腸拭子惡露痰經膀胱或導管排泄的尿子宮頸拭子傷口、組織、厭氧標本5.選擇合適部位采集用于厭氧菌培養(yǎng)的標本見下表。可接受材痰標本1.標本收集前，須先用溫開水漱口刷牙。2.收集清晨病人肺深部咳出痰液。3.置于無菌密閉容器中運送，在2小時內送達實驗室。痰標本1.標本收集前，須先用溫開水漱口刷牙。1.

痰革蘭染色涂片：決定標本收集是否適當。一般上皮細胞＞25個/LP（低倍鏡視野），認為此標本受口腔污染，培養(yǎng)結果僅供參考。

合格痰判斷標準上皮細胞白細胞1＞25＜102＞2510-253＞25＞25410-25＞255＜10＞25合格痰判斷標準上皮細胞白細胞1＞25＜102＞2510-1.腦脊液、胸腹水、關節(jié)腔液等無菌體液應無菌收集。2.最好2ml以上。3.無菌體液應做厭氧培養(yǎng)。4.腦脊液、生殖道、眼、耳標本不要冷藏。5.迅速將標本送至實驗室。其它標本1.腦脊液、胸腹水、關節(jié)腔液等無菌體液應無菌收集。其它分枝桿菌培養(yǎng)抗酸涂片1.痰液（培養(yǎng)及抗酸涂片）

指導病人于清晨以溫開水刷牙漱口。肺深部咳出痰液最佳，量多為宜。痰液分別收集3次標本。（一天內）2.尿液

分枝桿菌培養(yǎng)：留取清潔中段尿。抗酸涂片：留取24h尿或全夜尿，靜止2小時棄上清留取沉渣送檢。3.腦脊液（培養(yǎng)及抗酸涂片）需要2ml以上。分枝桿菌培養(yǎng)抗酸涂片1.痰液（培養(yǎng)及抗酸涂片）

診斷肺結核及分枝桿菌培養(yǎng)結果比較1234抗酸涂片64819198分枝培養(yǎng)709199100陽性率比較建議：抗酸涂片及分枝桿菌培養(yǎng)應同時送檢以提高陽性率。診斷肺結核及分枝桿菌培養(yǎng)結果比較1234抗酸涂片6481標本的轉運和儲存所有標本必須立即送交實驗室，必須在2h內。厭氧培養(yǎng)的臨床標本，適宜的轉運首先取決于所獲標本的體積。標本應于采集后15-30min內轉運，厭氧培養(yǎng)標本應避免過長時間暴露于空氣中。對環(huán)境敏感的微生物包括志賀菌、淋球菌、腦膜炎雙球菌和流感嗜血桿菌（對低溫敏感）。所以對腦脊液、生殖道、眼或內耳標本不要冷凍。標本的轉運和儲存所有標本必須立即送交實驗室，必須在2h內。標本的轉運和儲存血培養(yǎng)瓶不論是在接種標本前或后都應室溫放置，不要放入冰箱冷藏。將臨床標本或感染性物質轉運到實驗室，不管距離如何，轉運的標本必須正確地標記、包裝，在轉運過程中應以密閉運輸箱運送。

返回2標本的轉運和儲存血培養(yǎng)瓶不論是在接種標本前或后都應室溫放置，

細菌培養(yǎng)標本接種須知

標本種類培養(yǎng)基革蘭涂片備注血平板巧克力中國藍XLDTCBS山梨醇麥康凱增菌下呼吸道標本＋＋＋＋用無菌棉簽沾取痰標本與平板上，再接種。尿液＋中段尿用1ul定量接種環(huán)，導尿、恥骨穿刺尿用10ul定量接種環(huán)接種。腦脊液＋＋巰基乙酸肉湯＋（離心）收到標本立即接種。離心取沉淀接種，剩余沉淀接種增菌液中增菌。穿刺液＋＋腹透液用巰基乙酸肉湯增菌＋（離心）收到標本立即接種。離心取沉淀接種。腹透液標本將剩余沉淀接種巰基乙酸肉湯中增菌。留置針導管＋導管在血平板上滾動接種。鼻咽拭子生殖道眼耳部＋＋糞便一般培養(yǎng)＋＋＋先接種血平板、中國藍、XLD平板，并用SBG增菌液35℃孵育6h后，轉種XLD平。沙門、志賀菌培養(yǎng)＋先接種XLD平板，并用SBG增菌液35℃孵育6h后，轉種XLD平板。霍亂弧菌副溶血弧菌培養(yǎng)＋先用堿性蛋白胨水增菌35℃孵育6h后，轉種TCBS平板。0157腸出血性大腸桿菌＋引流液＋膿、傷口＋＋組織＋巰基乙酸肉湯＋先用無菌器械盡量將組織搗碎，再接種培養(yǎng)基，將剩余物接種增菌液中。其他＋厭氧菌培養(yǎng)接種厭氧血平板、LBK、CNA做厭氧培養(yǎng)，另需接種做需氧培養(yǎng)。細菌培養(yǎng)標本接種須知 培養(yǎng)基的質控外觀檢查無菌試驗生長試驗及生化試驗培養(yǎng)基的質控外觀檢查培養(yǎng)基質控必須的基本條件要求實驗室保存參考菌種；實驗前和實驗時檢驗培養(yǎng)基質量；清晰記錄質控實驗非常重要；必須有一份NCCLSM-22-A3（商品微生物培養(yǎng)基質量保證指南）作為參考工具書。培養(yǎng)基質控必須的基本條件要求實驗室保存參考菌種；試劑質控表1常用試驗試劑質量控制試劑陽性對照陰性對照監(jiān)測頻率氧化酶銅綠假單胞菌大腸埃希菌每次新配制時及使用中每個工作日觸酶金黃色葡萄球菌A群鏈球菌每個工作日凝固酶金黃色葡萄球菌表皮葡萄球菌每個工作日靛基質大腸埃希氏菌肺炎克雷伯1%蛋白胨水：每次新配制時及使用中。靛基質試劑：每次新配制時及使用中。甲基紅大腸埃希氏菌肺炎克雷伯葡萄糖蛋白胨水：每次新配制時及使用中。甲基紅試驗試劑：每次新配制時及使用中。VP肺炎克雷伯大腸埃希氏菌葡萄糖蛋白胨水：每次新配制時及使用中。VP試驗試劑：每次新配制時及使用中硝酸鹽還原大腸埃希氏菌洛菲不動桿菌（質控菌株）每次新配制時及使用中三氯化鐵奇異變形桿菌大腸埃希氏菌每次新配制時及使用中Optochin肺炎鏈球菌化膿性鏈球菌每次做Optochin試驗時做質控桿菌肽化膿性鏈球菌肺炎鏈球菌每次做桿菌肽抑制試驗時做質控β-內酰胺酶大腸埃希菌（ATCC35218）金黃色葡萄球菌（ATCC25923）每個新批號及每次使用時試劑質控表1常用試驗試劑質量控制陽性對照陰性對照監(jiān)測頻率氧化厭氧菌-蘇州臨檢中心蘇州臨檢蘇州臨床檢驗中心蘇州臨課件厭氧菌-蘇州臨檢中心蘇州臨檢蘇州臨床檢驗中心蘇州臨課件觸酶葡萄球菌屬微球菌屬鏈球菌屬腸球菌屬G+球菌革蘭涂片陽性陰性七葉苷陽性、6.5％Nacl陽性腸球菌屬鏈球菌屬需氧革蘭陽性球菌鑒定流程圖觸酶葡萄球菌屬微球菌屬鏈球菌屬腸球菌屬G+球菌革蘭涂片陽性陰中等大小、黃或灰白、β溶血或不溶血的菌落小、黃色菌落報微球菌屬金黃色葡萄球菌呋喃唑酮葡萄糖發(fā)酵上機+試管血漿凝固酶葡萄球菌微球菌屬－24hβ溶血－－++G+球菌觸酶+葡萄球菌、微球菌鑒定流程圖中等大小、黃或灰白、β溶血或不溶血的菌落小、黃色菌落報微球菌G+球菌觸酶－A群鏈球菌桿菌肽CAMPBAP溶血γβα其他檢測疑問Optochin試驗肺炎鏈球菌G+矛頭狀雙球菌、臍窩狀菌落耐藥其他敏感膽汁溶菌+－敏感陽性B群鏈球菌其他檢測七葉苷：－或＋6.5％Nacl：－鏈球菌鑒定流程圖G+球菌觸酶－A群鏈球菌桿菌肽CAMPBAP溶血γβα其他檢G+球菌觸酶七葉苷陽性、6.5％Nacl陽性腸球菌屬上機可能屎腸球菌可能糞腸球菌阿拉伯糖：-；山梨醇：+阿拉伯糖：+；山梨醇：-腸球菌鑒定流程圖G+球菌觸酶七葉苷陽性、腸球菌屬上機可能屎腸球菌可能糞腸球菌G-桿菌氧化酶+－產綠色素，有生姜味，溶血雙糖-/-、42℃生長+可能綠膿桿菌上機YesYesNoNo腸桿菌科++――IMVIC――++可能大腸埃希菌雙糖:A/AH2S:－動力:+尿素:－上機YesNo結合菌落特征：中國藍上呈深藍色菌落Yes雙糖：A/A動力：-

I：-―鳥氨酸：-賴氨酸：+結合菌落特征：大而厚實、光亮、凸起、灰白色粘液型菌落，可挑出粘液絲可能肺炎克雷伯菌No需氧革蘭陰性桿菌鑒定流程圖G-桿菌氧化酶+－產綠色素，有生姜味，溶血雙糖-/-、42℃嗜血桿菌痰標本疑似菌其他標本疑似菌上機上機菌落特征：BAP不生長；巧克力培養(yǎng)基上呈小至中等、無色、半透明灰色菌落，粘性且有鼠臭味副流感嗜血桿菌流感嗜血桿菌X因子-V因子-XV因子+X因子-V因子+XV因子+NoYesYesNo嗜血桿菌鑒定流程圖嗜血桿菌痰標本疑似菌其他標本疑似菌上機上機菌落特征：BAP不在TCBS平板上見扁平、深綠色、粘有辛辣味的菌落氧化酶：+Yes0%Nacl：—；4%Nacl：+8%Nacl：+；10%Nacl：—付溶定位：紅色NoYesNo可能副溶血弧菌上機轉種血平板副溶血弧菌鑒定流程圖在TCBS平板上見扁平黃色菌落可能是霍亂，溶藻進一步鑒定+血清凝集等在TCBS平板上見扁平、深綠色、粘有辛辣味的菌落氧化酶：+Y革蘭染色著色不均念珠菌定位平板綠色鏡下圓形、卵圓形折光性較強孢子白色念珠菌、都柏林念珠菌粉紅色可能克柔念珠菌可能熱帶念珠菌藍灰色紫色白色可能光滑念珠菌酵母菌屬上機無菌體液（血、csf、胸腹水等）念珠菌屬鑒定流程圖芽管實驗+革蘭染色著色不均念珠菌定位平板綠色鏡下圓形、卵圓形折光性較強念珠菌定位平板應用菌名定位顏色白色念珠菌綠色熱帶念珠菌藍灰克柔念珠菌粉紅色、表面毛燥光滑念珠菌紫色、光滑其它念珠菌白色等念珠菌定位平板應用定位顏色白色念珠菌綠色熱帶念珠菌藍灰克柔念

常見革蘭氏陰性桿菌的生化反應（氧化酶陰性）細菌血平板中國蘭定位雙糖IMVPCU動力鳥賴H2S苯丙山梨醇大腸中灰扁中蘭扁紅色+/+++---ddd--肺克大中白凸白帶蘭藍色+/+--++d--+--鮑曼中白凸中粉無色+/----+------陰溝中灰扁中粉扁蘭色-/+-d++-++---+摩根中灰(溶血)灰粉扁無色-/+++--+++--+普變遷徙生長無色-/++++++奇變遷徙生長無色-/+-+++-++弗勞地小灰扁帶蘭d+/+-+-+-+--+-粘質中灰粉色綠色-/+--++-+++--+

d:表示不定常見革蘭氏陰性桿菌的生化反應（氧化酶陰性）細菌血平板中國厭氧標本的接種厭氧標本的接種：化膿性感染標本或穿刺液等：將標本涂布于厭氧血平板、LBK平板等培養(yǎng)基第一區(qū)，四區(qū)劃線接種后，立即置于含厭氧發(fā)生袋、厭氧指示劑的厭氧罐中35℃厭氧培養(yǎng)。此外，將標本涂布玻片，待干燥后，進行革蘭染色顯微鏡檢。

厭氧標本的接種厭氧標本的接種：厭氧菌鑒定孵育48-72小時后檢測所有培養(yǎng)平板。記錄生長的每一種菌的形態(tài)，描述包括：大小、形狀、混濁、色素、凹陷、溶血情況。對每一種生長的菌落進行耐氧試驗：挑取單個菌落，分別接種到巧克力平板、血瓊脂平板和厭氧血平板。巧克力平板和血瓊脂平板放置35℃5%CO2環(huán)境，厭氧血平板放置35℃厭氧環(huán)境下培養(yǎng)。若巧克力平板和血瓊脂平板48小時孵育后無生長，厭氧血平板48小時孵育后生長，為專性厭氧菌。將耐氧試驗中挑出的厭氧菌進行革蘭染色選擇相應的鑒定系統(tǒng)進行鑒定。厭氧菌鑒定腸桿菌科：當試驗糞便中分離的沙門菌和志賀菌株時，只有氨芐西林、喹諾酮和TMP/SMZ可用于常規(guī)試驗報告。另外，對沙門菌屬的腸道外感染分離株，應測試并報告氯霉素和一種三代頭孢菌素。對CSF分離株，頭孢噻肟和頭孢曲松將取代頭孢噻吩和頭孢唑啉的試驗和報告。肺炎鏈球菌：對腦脊液的肺炎鏈球菌分離株，應該用可靠的MIC法測試并常規(guī)報告青霉素和頭孢噻肟或頭孢曲松或美羅培南的敏感性。對這些分離株，也應該用MIC法或紙片法測萬古霉素的敏感性。對其他部位的分離株，可用苯唑西林紙片篩選試驗。如抑菌環(huán)直徑≤19mm，就應該測試青霉素和頭孢噻肟或頭孢曲松的MIC。鏈球菌屬：對分離自血液與正常無菌部位（如腦脊液、血液、骨髓）的草綠色鏈球菌，應該用MIC法測試青霉素的敏感性。

青霉素、氨芐西林、左氧氟沙星、氧氟沙星的紙片法解釋標準僅用于β-溶血鏈球菌。

不同感染部位標本抗生素選用原則不同感染部位標本抗生素選用原則CLSI/NCCLS建議核實抗菌藥物敏感性試驗結果和確證菌株鑒定

細菌或菌群Ⅰ類a未曾報告過的不常見表型，和/或因技術錯誤造成的結果Ⅱ類b在已知的規(guī)則中可能不常見的表型，和/或因技術錯誤造成的結果革蘭陰性菌腸桿菌科（任何種）亞胺培南-I或R阿米卡星-R氟喹諾酮類-R氟勞地枸櫞酸桿菌腸桿菌屬粘質沙雷菌屬氨芐西林、頭孢唑啉，或頭孢噻吩-S大腸埃希菌ESBL確認陽性克雷伯菌屬氨芐西林-SESBL確認陽性普通變形桿菌普羅威登斯菌屬氨芐西林-S沙門菌屬第3代頭孢菌素-I或Rd氟喹諾酮類-I或R；或奈啶酸-Rd銅綠假單胞菌慶大霉素、妥布霉素和阿米卡星同時-R嗜麥芽窄食單胞菌碳青霉烯類-S復方磺胺甲噁唑-R流感嗜血桿菌氨曲南-NS碳青霉烯類-NS第3代頭孢菌素c-NS氟喹諾酮類-NS氨芐西林-R及?-內酰胺酶陰性阿莫西林/克拉維酸-R任何細菌對所有常規(guī)試驗中的抗菌藥物菌耐藥CLSI/NCCLS建議核實抗菌藥物敏感性試驗結果和確證菌株

分析后MRS(耐甲氧西林葡萄球菌)

主要細菌：金黃色葡萄球菌，凝固酶陰性葡萄球菌。

耐藥特點：MRS對頭孢類和其他β內酰胺酶類如阿莫西林/克拉維酸，氨芐西林/舒巴坦，替卡西林/克拉維酸，派拉西林/三唑巴坦和亞胺培南在體外可顯示活性但臨床應用無效。這是因為決大多數文獻報告的MRS感染用β內酰胺酶類療效差，而且缺乏令人信服的臨床數據證實這些藥臨床有效。分析后MRS(耐甲氧西林葡萄球菌)1.5下列細菌的耐藥特點

ESBLs(超廣譜β內酰胺酶)（2010年已修正）

產生的細菌：主要由克雷伯菌屬和大腸埃希菌及奇異變形桿菌產生。耐藥特點：對青霉素類，頭孢菌素、單環(huán)β內酰胺酶類抗生素耐藥，即使體外可顯示活性但臨床應用無效。通常對碳青霉烯類，頭霉素類及酶抑制劑復合制劑敏感。嗜麥芽窄食單胞菌

對亞胺培南天然耐藥。

分析后1.5下列細菌的耐藥特點分析后分析后結果報告的管理初級報告：當實驗室出現(xiàn)臨床上可能引起生命危象的檢測結果、檢測到傳染病報告（如：志賀菌、沙門菌、霍亂弧菌、分枝桿菌等）、臨床特別要求提早給予試驗結果信息時、出現(xiàn)疑難菌株時，給予臨床的一種口頭報告方式，以方便臨床及時采取措施。當試驗獲得最終結果時，必須完成正式報告。正式報告：專用微生物檢驗報告，報告單上應有必需的病人信息、標本信息、檢測結果、檢測人員信息等。如遇特殊情況需要手寫，必須經負責人簽字和蓋章方可生效。所有檢驗報告都以統(tǒng)一格式電腦打印發(fā)出。分析后結果報告的管理由微生物室負責人或其指定人員負責審核。審核報告前須先閱讀質控結果，只有質控結果通過才可進行審核工作。藥敏數據的審核。警告值的核對。罕見結果的核對：腦脊液、血培養(yǎng)（除凝固酶陰性的細菌外）等無菌體液、膿、傷口、厭氧菌標本出現(xiàn)稀有細菌時，須告知微生物室負責人，經確認后方可發(fā)出報告。形態(tài)學檢查，少見的細菌形態(tài)以及細菌鑒定應由多位微生物工作人員共同討論，只有意見達成共識方能出具報告。分析后結果報告的管理由微生物室負責人或其指定人員負責審核。分析后結果報告的管理

分枝桿菌陽性報告須經微生物室負責人或其指派人員復核方可報告，立即聯(lián)系臨床醫(yī)師和填寫傳染病報告及危急值報告。鑒定出沙門菌、志賀菌、腦膜炎雙球菌、霍亂弧菌等傳染病細菌，應立即填寫傳染病報告，經微生物室負責人或其指派人員審核簽字后方可報告。血培養(yǎng)和腦脊液、標本染色涂片發(fā)現(xiàn)或培養(yǎng)出細菌后，應立即做危急值報告。特殊結果的核對分枝桿菌陽性報告須經微生物室負責人或其指派人員復核方可取萬古霉素MH平板。加104CFU/ml菌液至MH平板上，加樣最好在制備好菌懸液后15min內完成。35℃孵育16-20小時。判斷結果：有無細菌生長。細菌懸液的配制：先配制0.5McF的菌懸液，再做10稀釋，點種1～2μl。VA-MIC接種VA-MIC接種

葡萄球菌（金葡、路鄧、表葡、腐生、溶葡）腸球菌（糞腸、屎腸）鏈球菌（A群、B群、肺雙）腸桿菌科

H2S、苯丙、尿素、I、氨基酸不動桿菌（鮑曼、洛菲）非發(fā)酵（綠膿、糞產堿、洋蔥、嗜麥芽）腸道細菌鑒定卡他對臨床常見細菌的識別方法葡萄球菌（金葡、路鄧、表葡、腐生、溶葡）對臨床常見細菌的識布魯氏菌人心桿菌腐蝕艾肯菌金氏金氏菌多殺巴斯德斯對臨床少見細菌的識別方法布魯氏菌對臨床少見細菌的識別方法厭氧菌-蘇州臨檢中心蘇州臨檢蘇州臨床檢驗中心蘇州臨課件厭氧菌-蘇州臨檢中心蘇州臨檢蘇州臨床檢驗中心蘇州臨課件厭氧菌-蘇州臨檢中心蘇州臨檢蘇州臨床檢驗中心蘇州臨課件厭氧菌-蘇州臨檢中心蘇州臨檢蘇州臨