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文檔簡介

實驗三細菌的分離培養及移植兩個概念：在細菌學檢驗中，細菌的分離培養是重要的基本技術之一。

分離：從混雜微生物中獲得單一菌株純培養的方法；

純培養：一株菌種或一個培養物中所有的細菌都是由一個細胞分裂、繁殖而產生的后代。實驗目的：1掌握細菌分離培養的基本要領和方法2掌握挑菌、純培養及移植技術3了解細菌的菌落形態及其在各種培養基上的培養性狀實驗材料：球1菌種：大腸桿菌斜面、大腸桿菌與金黃色葡萄球菌的混合培養肉湯等；2培養基：普通肉湯、普通瓊脂斜面、普通瓊脂平板3器械：剪刀、記號筆、酒精燈、接種環一需氧型細菌分離培養法1.平板劃線分離法

菌種被其他雜菌污染時或混合菌懸液常用平板劃線法進行純種分離。

此法是借助將蘸有混合菌懸液的接種環在平板表面多方向連續劃線，使混雜的微生物細胞在平板表面分散，以求得到分散的由單個微生物細胞繁殖而成的菌落，從而達到純化目的。

劃線培養時注意問題：左手持皿，用左手拇指、食指及中指將平皿揭開約呈20°的角度(圖1)；右手持接種環，灼燒冷卻后從混合培養肉湯中取少量涂布于培養基邊緣，開始劃線(圖2)；劃線前先將接種環稍稍彎曲，使之易與瓊脂面平行，不致劃破培養基；劃線中不易過多的重復舊線，以免形成菌苔；接種完畢，在皿底作好標記（菌名、日期、接種者等），平皿倒扣，置于37℃培養。圖2連續劃線法區劃線法圖1劃線分離示意圖2.純培養的獲得與移植法

---瓊脂斜面分離法

將37℃下培養24h的平板從溫箱取出，挑取單個菌落，鏡檢不含雜菌，即用接種環挑取單個菌落移植于瓊脂斜面培養，所得的培養物即為純培養物。圖3斜面接種時試管的拿法圖4斜面接種時無菌操作的程序左手斜持菌種管和被接種瓊脂斜面管，使管口相互并齊，管底部放在拇指和食指之間，松動兩管塞子，以便接種時易拔出（圖3）。

右手持接種棒，火焰滅菌后，用右手小指和無名指并齊同時拔出兩管塞，將管口進行火焰滅菌，使其靠近火焰。將接種環深入菌種管內，先在無菌生長的瓊脂上接觸使之冷卻，再挑取少許細菌后拉出接種環立即放入另一斜面培養基上，勿碰及斜面和管壁，直達斜面底部。

從斜面底部開始劃曲線，向上至斜面頂端為止，管口通過火焰滅菌，塞好棉塞，滅菌接種環，作好標記，置于37℃溫箱培養。（圖4）2.1兩試管間的斜面移植2.2平板到試管斜面移植手執接種棒，火焰滅菌，左手打開平皿蓋，將接種環置于平皿蓋上使之冷卻；挑取可疑的菌落，左手蓋上平皿蓋后立即取斜面管，深入斜面管中，從斜面底部開始劃曲線，向上至斜面頂端為止；管口通過火焰滅菌，塞好棉塞，滅菌接種環，作好標記，置于37℃溫箱培養。當組織病料中含病原菌少，或有抗菌藥殘留時，用瓊脂斜面或平板分離法可能無菌落長出，為提高由病料中分離培養細菌的機會，這時可以無菌操作剪取一小塊病料直接投入肉湯，經37℃培養，在肉湯中長出細菌后，觀察其在液體培養基上的生長表現，再用瓊脂斜面或瓊脂平板分離。3.營養肉湯增菌培養法4.穿刺培養法

半固體移植多用穿刺

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