微生物棉簽擦拭取樣方法驗證方案主題內容本方案規定了微生物棉簽擦拭取樣驗證的目的、原理、標準及內容。適用范圍本方案適用微生物棉簽擦拭法取樣。責任人質量部現場監控員：負責棉簽擦拭取樣方法驗證方案的起草及實施。質量部QC：負責按計劃完成相關檢驗任務，確保檢驗結論正確可靠。質量部QA：負責監督驗證實施的全過程。驗證管理員：協助驗證方案的起草，組織協調驗證工作，并總結驗證結果，出具驗證報告。質量管理部部長：負責驗證方案及驗證報告的審核。質量授權人：負責驗證方案及驗證報告的批準。組長：質量管理部部長驗證小組成員：QA主管QC主管微生物限度檢驗員現場監控員內容4.1概述制藥企業生產設備、生產場所、用具等需要清潔，清潔后殘留物限度經檢驗應符合要求。檢驗殘留物限度的方法有兩種：一是最終淋洗水取樣；二是擦拭取樣。擦拭取樣優點是能對最難清潔部位直接取樣，通過考察有代表性的最難清潔部位的殘留物限度評價生產設備的清潔狀況。但取樣方法需驗證其可行性。因此需通過取樣方法驗證確定清潔方法的有效性。能消除藥品交叉污染及微生物污染。4.2驗證目的通過對清洗消毒后微生物取樣方法的回收率實驗，評價取樣方法的有效性、代表性和科學性，并為證明清潔方法有效性提供基本依據。4.3驗證原理通過物理的擦拭對那些已經干燥的殘留物取樣。通過選擇適當的擦拭溶劑、擦拭工具和擦拭方法，可將清洗過程中未溶解的，已“干結”在設備表面或溶解度很小的物質擦拭下來。檢驗結果能直接反映出個取樣點的清潔狀況。4.4清潔方法執行《XX機清潔SOP》、《房間清潔SOP》。4.5驗證方法 4.5.1.試驗器具包括不銹鋼載片（規格50mm×50mm）、培養皿Ф90mm、醫用棉簽，以上器具均需要經過121℃4.5.1.1.金黃色葡萄球菌菌液的制備接種金黃色葡萄球菌［CMCC(B)26003新鮮培養物至營養肉湯或營養瓊脂培養基中，30-35℃4.5.1.2.白色念珠菌菌液的制備接種白色念珠菌［CMCC(F)98001］新鮮培養物至改良馬丁或改良馬丁瓊脂培養基中，23-28℃4.5.1.3.染菌不銹鋼載片制備·載片脫脂處理：載片放在含肥皂的水中煮沸30分鐘，以純化水洗凈；用純化水煮沸10分鐘；用純化水漂洗至PH中性晾干備用。·菌液滴染將經滅菌的不銹鋼載片平鋪于無菌平皿內，滴加金黃色葡萄球菌、白色念珠菌含菌量為50-100CFU的菌液0.1ml，并均勻涂布于整個載體表面。滴染菌液后，載片置潔凈工作臺晾干備用。每種菌平行制備2個染菌不銹鋼載片。4.5.1.4.擦拭取樣·取無菌醫用棉簽2支，用0.9%無菌氯化鈉溶液潤濕后，在錐形瓶上擠壓除去多余的溶液。將其中1支棉簽頭按在染菌載片上，用力使其稍彎曲，平穩而緩慢地擦拭取樣表面，擦拭路線按下圖所示，擦拭過程應覆蓋整個表面。另取1支棉簽再次對該不銹鋼載片表面擦拭，擦拭路線和上次擦拭路線垂直。擦拭完后，用無菌手術刀把棉簽的頭部（棉花部位）剪斷，投入裝有50ml0.9%無菌氯化鈉溶液的錐形瓶中，密閉。共制備12份檢品。·取適宜稀釋的菌液0.1ml（約50-100CFU）分別注入平皿中，立即傾入冷卻至45℃4.5.1.5.檢驗將裝有樣品的錐形瓶反復振搖，使面前上的微生物釋放到溶液中。取樣品溶液50ml薄膜過濾，取出濾膜，菌面朝上，貼于培養基上。金黃色葡萄球菌用營養瓊脂培養基，白色念珠菌用改良馬丁瓊脂培養基。4.5.1.6培養及計數檢驗結束后，將細菌平皿倒置于30-35℃培養箱培養3天，霉菌平皿倒置于23-28養5天，計數。4.5.2可接受標準：陰性對照應無菌生長，總回收率不低于70%，RSD≤4.6檢驗結果：見檢驗記錄。4.7驗證次數：進行三次驗證。5．結論與評價驗證小組根據驗證情況對驗證結果進行綜合評審，做出驗證結論，由質量受權人作出是否批準的決定及負責發放驗證證書。對驗證結果評審應包括：驗證試驗是否有遺漏？驗證實施過程中對驗證方案有無修改？修改原因、依據以及是否經過批準？驗證記錄是否完整？驗證試驗結果是否符合標準要求？是否需要進一步補充試驗？綜合驗證的結果，判定取樣方法的有效性。6．再驗證：有以下情況需要進行再驗證。6.1到了規定的再驗證周期。6.2若取樣方法有變化應進行再驗證。6.4潔凈區環境包括溫、濕度有重大變化應進行再驗證。7．附表7.1表一取樣檢驗記錄可接受標準總回收率不低于70%，RSD≤20%金黃色葡萄球菌檢驗白色念珠菌檢驗陽性菌陰性菌1號樣2號樣3號樣4號樣5號樣RSD/檢驗人陽性菌陰性菌1號樣2號樣3號樣4號樣5號樣RSD/檢驗人第一次第二次第三次總回收率結論復核人：日期：7.2表二驗證結論與評價驗證結論評價驗證試驗是否有遺漏有□無□遺漏部分：驗證實施過程中對驗證方案有無修改有□無□修改部分：驗證方案修改原因驗證方案修改依據驗證方案修改是否經過批準是□否□驗證記錄是否完整是□否□是否需要進一步補充